三明治羊膜代心包的形态学研究

目的　探讨人三明治羊膜替代心包防止粘连的效果。方法　选用 12只山羊 ,切除部分心包 ,以人三明治羊膜替代心包 ,对羊膜防止粘连进行了形态学观察。结果　术后所有羊恢复良好 ,无切口感染及其它并发症。分别于 3、6、9、12个月处死动物 ,肉眼观察无心包积液 ,三明治羊膜补片与胸壁切口背面、心外膜之间无任何粘连 ,效果良好 ,而硅橡胶补片在术后晚期出现粘连。扫描电镜观察 ,羊膜补片表面均有上皮覆盖 ,无纤维和细胞成分 ,硅橡胶表面无上皮 ,有少量纤维成分 ,无炎症细胞。结论　人三明治羊膜替代心包防止粘连 ,效果良好。     

高温致神经管畸形中bcl-2和bax变化的动物实验研究

目的 探讨高温致神经管畸形的分子机制。方法 在高温致金黄地鼠神经管畸形的动物模型上，利用免疫组织化学法(SABC法)染色，观察神经管畸形发生过程中凋亡相关基因bcl—2和bax在神经上皮细胞中的表达变化。结果 高温后8h开始，实验组鼠胚神经上皮细胞bcl—2的表达均不同程度低于对照组，尤以高温后16h差异最为显著，24h后实验组与对照组相比bcl—2的表达差异无显著性。高温后8h，16h，实验组鼠胚神经上皮细胞bax的表达均明显高于对照组，24h后实验组与对照组相比bax的表达差异无显著性。结论 高温抑制bcl—2的表达，促进bax的表达，诱发神经上皮细胞的凋亡，是导致神经管畸形发生的机制之一。     

PCNA和Caspase-3在妊娠滋养细胞疾病中的表达及意义

目的研究PCNA和Caspase-3在妊娠滋养细胞疾病中的表达变化及意义,为妊娠滋养细胞疾病早期诊断、预后判断提供理论依据。方法收集滋养细胞疾病标本50例,其中葡萄胎10例(均为完全性葡萄胎),侵蚀性葡萄胎20例,绒毛膜癌20例。正常早孕绒毛标本10例为对照组。应用免疫组织化学技术检测PCNA和Caspase-3在早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌组织中的表达情况。结果 PCNA在正常早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌中的表达分别为10.24%、20.70%、50.92%、53.65%,各组差异有统计学意义(P0.05)。Caspase-3在正常早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌中的表达先升高又降低,分别为1.25%、2.60%、6.40%、1.90%,各组差异有统计学意义(P0.05)。结论 PCNA及Caspase-3表达异常,增殖/凋亡失衡是引起GTT的重要因素。     

香丹注射液诱导人脐血间充质干细胞向神经细胞的分化

背景:选择一种高效、细胞损伤低的诱导人脐血间充质干细胞分化为神经细胞的方法是其应用于临床的前提.目的:拟采用传统中药香丹注射液联合生长因子诱导脐血间充质干细胞向神经细胞方向分化,并且与单纯生长因子的诱导作用进行比较.设计、时间及地点:免疫细胞化学水平的细胞观察实验,于2006-09/2008-04在潍坊医学院组织胚胎学教研室完成.材料:人脐血标本取自潍坊市妇幼保健院,香丹注射液的有效成分为丹参素.方法:采用密度梯度离心法分离人脐皿单个核细胞,贴壁法筛选出人脐血间充质干细胞,体外扩增,以免疫荧光方法检测表面抗原.分为2组进行诱导分化,香丹注射液联合生长因子诱导组采用30 g/L香丹注射液联合表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子诱导脐血间充质下细胞向神经细胞方向分化,并且与单纯生长因子诱导组进行比较.主要观察指标:采用免疫细胞化学方法和免疫荧光方法检测诱导前后神经元特异性标志(神经元核抗原、β-TubulinⅢ)和神经胶质纤维酸性蛋白的表达.结果:香丹注射液联合生长因子诱导法对脐血间充质干细胞损伤作用小,诱导效率高.脐血间充质干细胞经香丹沣射液诱导后出现类似神经细胞的形态改变,胞体呈椭圆形,伸出长突起.免疫组织化学和免疫荧光方法鉴定显示,诱导后的细胞能特异性表达神经元核抗原和β-TubulinⅢ,而神经胶质纤维酸性蛋白阳性细胞较少.香丹注射液联合生长因子诱导组的β-TubulinⅢ和神经元核抗原的阳性细胞率显著高于生长因子诱导组(P＜0.05),神经胶质纤维酸性蛋白阳性细胞率明显低于生长因子诱导组(P＜0.05).结论:香丹注射液联合生长因子诱导对脐血间充质干细胞损伤作用小,诱导效率高,优于生长因子诱导法.且体外诱导后细胞丰要分化为神经元样细胞,而非星形胶质细胞.     

Wnt抑制因子-1在肌萎缩脊髓侧索硬化症转基因小鼠中的表达变化

目的 检测Wnt抑制因子-1(Wif-1)在成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型小鼠脊髓内的表达变化,进一步探讨Wif-1在ALS发病中的作用.方法 选取ALS转基因鼠和同窝野生型鼠各54只,分别于鼠龄95d、108d、122d取材,部分鼠经4%多聚甲醛心脏灌注固定、分离脊髓、制备冷冻切片,应用免疫荧光染色技术...     

维甲酸、音猬因子对大鼠脊髓神经干细胞向运动神经元样细胞分化的影响

目的:分离大鼠胚胎的脊髓神经干细胞进行体外培养,探讨维甲酸(RA)、音猬因子(Shh)诱导其向运动神经元样细胞分化. 方法:应用无血清培养技术分离培养脊髓神经干细胞,通过5-溴-2-脱氧尿苷标记、免疫荧光显色检测细胞增殖、分化情况;培养液分组添加Shh、 RA或Shh+RA,观察神经干细胞向运动神经元样细胞的分化情况. 结果:大鼠胚胎脊髓可成功分离神经干细胞,分化后可表达神经元、星形胶质细胞的特异性抗原;诱导分化后结果显示Shh组未检测到胆碱乙酰转移酶阳性细胞,RA组为20.63%, Shh+RA组为66.84%,其差异具统计学意义.结论:从大鼠胚胎脊髓可成功分离神经干细胞,Shh、 RA可不同程度地诱导脊髓神经干细胞分化为运动神经元样细胞.     

大鼠脊髓发育过程中神经干细胞的分化

目的:研究正常大鼠脊髓发育过程中神经干细胞的分化规律。方法:应用免疫荧光染色技术,检测Nestin、NeuN、MAP2、GFAP、CNPase阳性细胞在大鼠胚胎期及生后脊髓内的分布及变化情况。结果:胚胎发育早期,脊髓中央管、灰质、白质均可检测到Nestin阳性细胞,生后Nestin阳性细胞数量逐渐减少。大鼠脊髓神经元的发生呈现明显的背腹模式,孕14d(E14)脊髓内可检测到NeuN阳性细胞,E16 NeuN阳性细胞逐渐增多,腹侧NeuN阳性细胞核体积较大,分布较稀疏,背侧神经元细胞核体积较小,分布较密集。MAP2染色结果与NeuN一致。胶质细胞的分化、成熟在生后初期进行,P4可检测到GFAP及CNPase阳性细胞,主要分布于脊髓白质内,P30在脊髓灰质内可检测到GFAP阳性细胞,细胞分支较多且短。结论:正常大鼠脊髓发育中神经干细胞的分化呈现一定规律性,向神经元方向化较早且呈明显的背腹模式,胶质细胞的分化较晚。     

鼠胚神经上皮细胞原代培养的形态学观察

应用倒置相差显微镜、扫描电镜、透射电镜和免疫细胞化学技术，对原代培养的神经细胞进行形态学观察。结果显示：接种后１０ｈ，少数细胞开始贴壁；２４ｈ时，大部分细胞贴壁，突起延长并互相连接，部分细胞ＮＳＥ免疫染色呈阳性；３ｄ时，胞体增大，突起互相连接成神经网络，胞核大，形态规则，胞质内含较多的粗面内质网和线粒体，高尔基复合体发达；７ｄ时神经细胞晕光明显，胞体饱满，ＮＳＥ免疫阳性细胞增多；１４ｄ时，神经细胞数目减少，有些神经细胞开始退化；２１ｄ时，神经细胞数目明显减少，突起萎缩，出现碎解。