云南省5县健康人群乙型脑炎血清学调查

<正> 流行性乙型脑炎(简称乙脑)在我省广泛分布,近年来发病数虽有下降,但局部地区的流行时有发生。为了解人群隐性感染状况,我们在泸西、寻甸、永胜、宁蒗和昌宁采集健康人血清,测定乙脑病毒抗体、结果如下。1 材料与方法1.1标本采集 在云南省泸西、寻甸、永胜、宁蒗和     

与人类疾病相关的布尼安病毒研究进展

近几年,布尼安病毒的研究进展较快,新的布尼安病毒不断被发现。布尼安病毒科（Bunyauiridne）至少包括350种病毒,被分为5个属：Orthobunyavirus、Hantanvirus、Nairovirus、Phlebovirus、Tospovirus（见表1）,是动物病毒家族中最大的一个病毒科。至少有60种布尼安病毒可引起人类或家畜的疾病,其中对人类健康及社会经济生活产生严重威胁的病毒主要有裂谷热病毒（RVFV）、Lacrosse脑炎病毒（LACV）、奥罗普切热病毒（OROV）、白蛉热病毒（SFV）、克里米亚一刚果出血热病毒（CCHFV）和汉坦病毒属成员等。     

云南省1976--2012年肾综合征出血热流行特征分析

目的分析云南省肾综合征出血热（HFRS）流行特征,为防治提供参考。方法收集云南省HFRS病例资料并用Excel2003软件建立数据库,用SPSS13．0软件对HFRS的发病率、死亡率及疾病的地理、季节、人群分布进行统计学处理,其中方差分析应用于比较不同地区间的发病率差异,线性相关分析用于比较不同人群与发病的相关性。结果1976—2012年,云南省共报告HFRS患者876例,死亡50例,年平均发病率为0．058／10万,年平均死亡率为0．0042／10万,病死率为5．71％。1984—1987年和1998—2006年出现两次流行高峰。全省14个州（市）的75个县（市、区）有病例报告,各州（市）之间发病率差异有统计学意义。主要流行地区为昆明市及红河、楚雄和大理州,占全省病例数的80．48％,其中昆明市占全省发病数的35．50％。从地理特点分析,疫区分布在中部和西北部海拔1500~2500m的地区。西南部低海拔（〈1500m）地区和海拔〉2500m的山区几乎无病例报告。全年均有发病,春夏季为流行高峰;主要发病人群为男性青壮年农民。结论HFRS在云南省分布较广,主要流行区为中部和西北部海拔在1600~2000m的盆地地区,应加强主要疫区的监测和防控工作。     

2004年云南省肾综合征出血热监测研究

目的进一步掌握肾综合征出血热（HFRS）在云南省的流行特点，为防治提供依据。方法收集全省HFRS疫情资料，并在固定监测点及面上常规调查中采集人血清、鼠血清和鼠肺做汉坦病毒（HV）抗体和抗原检查。结果2004年全省共报告HFRS 55例，死亡2例，年发病率0．13／10万，病死率为3．64％。主要发病地区为大理州、昆明市、红河州和楚雄州。在固定监测点泸西、寻甸和永胜县捕获鼠类10种803只，采集鼠血清314份，人血清313份，其中居民区以黄胸鼠和褐家鼠为优势鼠种，野外以高山姬鼠为优势鼠种；鼠带病毒率为3．89％（26／668），带病毒鼠有褐家鼠、黄胸鼠、小家鼠、高山姬鼠、臭鼩鼱和短尾鼩；对鼠及人血清抗体检测，阳性率分别为3．50％和2．24％。在滇西地区10个县（市）采集到16种896份鼠肺标本，带病毒率为3.01％（27／896），带病毒鼠有褐家鼠、黄胸鼠、小家鼠、大足鼠、短尾鼩、高山姬鼠和臭鼩鼱。结论进一步证实云南省存在以褐家鼠和黄胸鼠为主要宿主的家鼠型HFRS疫源地，也存在以高山姬鼠和大绒鼠为主的姬鼠型疫源地。近几年发病率的上升与较高的鼠密度和鼠间感染有关。     

云南省澜沧江下游地区虫媒病毒的调查研究

目的 了解云南澜沧江下游地区自然界虫媒病毒流行情况。方法 从云南澜沧江下游地区(澜沧县和思茅市)所属乡村采集蚊虫,分类后保存于液氮。经消毒、研磨、离心等处理后接种组织培养细胞分离病毒,并进行初步鉴定。结果从233份标本中,分离到22株致C6/36细胞病变的病毒,表现为细胞圆化、聚集、脱落。分离阳性率为9.4％(22/233)。经鉴定10株对乙醚和5’-磺脱氧尿苷抵抗,为无包膜双链RNA病毒,核酸电泳为12节段RNA病毒。9株对乙醚敏感,对5’-碘脱氧尿苷抵抗,为有膜RNA病毒,核酸电泳为10条带。Colti病毒95-75单克隆抗体与新分离的12节段RNA病毒的酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光试验呈阳性反应,而与10节段病毒呈阴性反应。3株病毒为对乙醚敏感,其中1株被乙型脑炎病毒A2株免疫腹水中和,并与A2免疫腹水荧光试验呈阳性反应;1株(云南92-4)与布尼亚病毒组特异免疫腹水的荧光试验和ELISA试验均为强阳性,而与甲病毒组特异性免疫腹水及黄病毒组的乙型脑炎病毒免疫腹水均呈阴性反应;经负染在电镜下观察毒粒呈圆形,直径约为(87.00±0.05)nm。外层可见表面突起。结论 从云南澜沧江下游地区采集的蚊标本分离到10株Colti病毒,9株环状病毒,1株为乙脑病毒,1株为布尼亚病毒,1株尚在研究中。     

三带喙库蚊和致倦库蚊胸腔接种乙型脑炎病毒减毒活疫苗SA14-14-2株的研究

目的通过实验掌握SA14142乙脑减毒活疫苗株对蚊虫的敏感性,对该疫苗的特性和安全性进行确定。方法建立三带喙库蚊和致倦库蚊的实验室种群,将乙型脑炎SA14142疫苗株病毒和乙脑野毒株(Nak)悬液做10倍系列稀释,以100～109(共10个稀释滴度)胸腔接种两种库蚊,感染后分别于8天和12天每组取10只蚊虫,研磨制成悬液,应用空斑实验方法检测蚊虫体内的病毒存在情况和病毒滴度。结果接种疫苗株后两种库蚊在100～103稀释滴度下发生感染,在104～109稀释滴度时未发生感染;被感染的三带喙库蚊最高PFU为4.48logPFU/ml,致倦库蚊为5.63logPFU/ml。接种野毒株后,致倦库蚊在100～105稀释滴度时发生感染,最高PFU为6.59logPFU/ml;三带喙库蚊在100～104稀释滴度时发生感染,其最高PFU为5.74logPFU/ml。结论蚊虫经胸腔接种SA14142株后,该疫苗病毒能在三带喙库蚊和致倦库蚊体内繁殖。     

云南新分离四株流行性乙型脑炎病毒全基因组序列特征研究

目的 对云南省2009年和2010年分离的4株流行性乙型脑炎(乙脑)病毒进行全基因组序列测定和分析,阐明近期乙脑病毒流行株的分子生物学特征及基因型。 方法 通过反转录-聚合酶链反应和核苷酸序列测定方法获得病毒全基因组序列,采用Clustal X、DNAstar和Mega等生物学软件进行核苷酸和推导氨基酸序列分析及系统进化分析。 结果 2009年和2010年在云南省中部和西部地区三带喙库蚊(Culex tritaeriorhynchus)中分离到4株乙脑病毒,其中YN09M57株基因组全长10 967 bp,DH10M865、DH10M978和DHL10M62株基因组全长均为10 965 bp,均编码3432个氨基酸。这4株病毒核苷酸和氨基酸同源性分别为98.3%～99.9%和99.5%～99.9%,与来自GenBank的7株基因Ⅰ型乙脑病毒核苷酸和氨基酸同源性分别为98.3%～99.9%和99.7%～99.9%;与基因Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ型参考株核苷酸和氨基酸同源性分别在78.7%～89.7%和91.4%～98.4%;与乙脑减毒活疫苗SA14-14-2株在E蛋白编码区有15个氨基酸位点差异,均位于抗原关键位点之外。基于E基因、全基因组系统进化分析显示云南4株乙脑病毒均为基因Ⅰ型,并形成2个进化分支,分别与相邻省份和东南亚流行株进化关系较近。 结论 云南新分离4株乙脑病毒属基因Ⅰ型,虽然它们之间及其与该型参考株核苷酸和氨基酸位点存在某些差异,但决定病毒毒力和抗原性的关键位点未见明显变化。本研究提示这些乙脑病毒流行株具有稳定的遗传特性和地域特征。     

昆明市登革热输入性病例的调查及C/PreM基因序列分析

目的 调查云南省昆明市登革热输入性病例分布状况及病原分子特征.方法 收集登革热病例资料,采集本病急性期病人血清标本,用ELISA法检测登革病毒(DENV) IgM抗体,RT-PCR法检测DENV核酸,核酸阳性者进行DENV-C/PreM区的基因核苷酸序列测定和分析,采用MEGA5软件的邻接法构建进化树.结果 2010-2013年在昆明市第三人民医院住院病人中采集到登革热临床诊断病例血清标本13份,经检测DENV-IgM抗体均为阳性,DENV核酸阳性2份.根据流行病学史、临床表现和实验室检测结果,这13例病人均被诊断为登革热.获得了两株病毒(YNH8和YNH12)的C/PreM区基因核苷酸序列,进化分析表明YNH8和YNH12株均为登革Ⅰ型病毒.其中YNH8株与南亚地区印度流行株进化关系最为接近,而YNH12株与泰国、缅甸、柬埔寨和越南等东南亚国家流行株具有较近亲缘关系.结论 昆明市登革热患者均为输入性病例.流行病学史和分子流行病学研究证实,YNH8和YNH12病例与印度和缅甸流行株具有较近亲缘关系.     

三带喙库蚊和致倦库蚊经口感染乙型脑炎病毒疫苗SA14-14-2株的研究

目的通过实验，确定被SA14—14—2乙脑减毒活疫苗免疫的宿主动物和人在被媒介蚊虫叮咬后，是否存在感染和传播的可能。方法建立三带喙库蚊和致倦库蚊的实验室种群，用乙型脑炎SA14—14—2疫苗株病毒和乙脑野毒株经口感染两种库蚊，感染后不同时间取一定数量的蚊，研磨制成悬液，应用空斑试验方法检测感染后不同时间蚊体内的病毒存在情况和病毒滴度。结果在用6．0610gPFU／ml SA14～14—2病毒经口感染的两种库蚊中，没有检测到病毒空斑，即没发现蚊虫的感染；在用较高的6．1810gPFU／ml病毒经口感染的三带喙库蚊和致倦库蚊中，分别有一组蚊虫出现低滴度感染，空斑形成单位分别是1．24和1．11log10PFU／ml；在用野毒株经口感染的两种库蚊，共计19组蚊虫中，有14组发生感染，空斑形成单位在3．18～4．7910g10PFU／ml。结论作为乙脑主要传播媒介的三带喙库蚊和致倦库蚊对SA14—14—2疫苗株病毒的经口感染和病毒在体内的复制严重受限，当叮咬接种疫苗的人后，不具备发生乙脑病毒感染和传播的能力。     

小白鼠经口感染辛德毕斯病毒的研究

辛德毕斯病毒经口途径可使小白鼠感染.并能在体内繁殖,经短期的病毒血症.侵入中枢神经系统。在脑、心、血、肺、肝、肾、胃、肠和脾等脏器内分离到病毒,其中脑内病毒量最高。此外,经腹腔和皮下途径.亦可使小白鼠感染辛德毕斯病毒。