116株结核分枝杆菌链霉素耐药菌株rspL和rrs基因突变特征研究

链霉素为氨基糖苷类抗生素,主要作用于16s RNA,干扰蛋白质的翻译,抑制蛋白质合成。已经证实链霉素耐药相关的基因主要为编码核糖体蛋白S12的rpsL基因和编码16sRNA的rrs基因。在一些地区研究发现链霉素耐药株的传播与MTB北京基因型密切相关[1]。本研究旨在阐明天津地区链霉素耐...     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在结核病领域的应用进展

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)具有高通量、高速度、自动化等优点,成为生物大分子研究的重要工具。其在临床研究领域取得显著进展,在结核病研究领域的作用也日益凸显。作者主要介绍了MALDI-TOF MS在分枝杆菌菌种鉴定、结核病耐药性研究、结核病血清标志物的筛选、结核病易感基因多态性检测和抗结核药物代谢研究方面的应用进展,以加强对MALDI-TOF MS在结核病研究领域的认识。     

结核分枝杆菌北京基因型菌株大片段的多态性研究

目的 揭示结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)北京基因型菌株的进化路径,在进化过程中产生的各个进化分支,以及每个分支的北京基因型菌株在人群中的流行情况。方法 收集2014年1月至2016年4月天津地区临床分离的567株MTB菌株,首先采用多重PCR试验分析菌株基因组中差异片段207(RD207)的缺失情况,以鉴定收集的菌株是否为北京基因型;然后分析所有的北京基因型MTB菌株基因组中差异区域RD105、RD181、RD150和RD142的缺失情况,以及菌株基因组NTF(noise transfer function)区中插入序列6110(IS6110)的存在情况。结果 567株临床分离的MTB菌株中,517株(91.2%)为北京基因型菌株。所有北京基因型菌株中,447株(86.5%)为NTF区含有IS6110的北京基因型现代株;70株(13.5%)为NTF区不含IS6110的北京基因型古代株。基于大片段的多态性分析,北京基因型菌株被分为5个亚型,其中RD181(+)的北京基因型菌株为22株(4.3%),且全部为北京基因型古代株。RD181(-)/RD150(+)和RD181(-)/RD150(-)的北京基因型古代株分别为41株(7.9%)和7株(1.4%)。447株现代菌株中,RD181(-)/RD150(+)和RD181(-)/RD150(-)的分别为404株(78.1%)和43株(8.3%)。结论 MTB北京基因型中的现代株是天津地区的主要流行株;北京基因型MTB在人群传播流行中已经进化出5个分支,其中RD181(-)/RD150(+)的北京基因型现代株为主要的流行分支。     

萋-尼氏抗酸染色法和金胺O荧光染色法在结核分枝杆菌痰涂片检测中的对比

目的:比较萋-尼氏抗酸染色法（简称Z-N）和金胺O荧光染色法（简称荧光染色）在痰涂片镜检中对结核分枝杆菌的检测效果差异。方法:纳入580份痰标本,挑取相同部位制成两份涂片,分别使用Z-N和荧光染色进行染色镜检,比较两种方法的阳性检出率、阳性分级标准及读片时间上的差异。将涂片后余下的痰标本采用全自动分枝杆菌检测/药敏系统做液体培养。结果:Z-N法阳性检出率为10.8%,荧光染色法为15.3%,两种方法比较差异有统计学意义（P＜0.05）。对两种方法每一级别的结果进行?字2检验,结果表明两种染色方法在各个分级没有统计学差异（P＞0.05）。荧光染色法的读片时间要明显短于Z-N。结论:荧光染色阳性检出率略高于Z-N,证明荧光染色法是一种快速、灵敏的检测方法,对肺结核的临床诊断具有重要意义。     

利用多重PCR方法快速鉴定结核分枝杆菌北京基因型菌株

目的 建立结核分枝杆菌北京基因型菌株快速鉴定方法 ,研究该家族在人群中的流行传播的规律和特点。 方法 采用间隔区寡核苷酸（spoligotyping）分型与多重PCR方法 分别对临床分离的112株结核分枝杆菌进行北京基因型菌株鉴定。 结果在分析的112株结核分枝杆菌中,107株为北京基因型,多重PCR鉴定结果与Spoligotyping分型符合率为100%。 结论 与spoligotyping分型相比,多重PCR技术可以快速地区分北京基因型与非北京基因型株,且方法 简单,更适于基层试验室中对北京基因型结核分枝杆菌在人群中的流行进行大规模监测。     

天津市耐异烟肼或利福平的结核分枝杆菌相关基因突变特征

目前已知多个基因突变与MTB对异烟肼和利福平的耐药有关,但是不同的基因密码子突变率存在地区差异.为此,我们检测了天津市结核病患者异烟肼耐药株katG和inhA启动子以及利福平耐药株rpoB的突变情况,探讨其耐药相关基因的突变特征及基因突变与耐药表型的相关性.     

天津市耐异烟肼或利福平的结核分枝杆菌相关基因突变特征

目前已知多个基因突变与MTB对异烟肼和利福平的耐药有关,但是不同的基因密码子突变率存在地区差异.为此,我们检测了天津市结核病患者异烟肼耐药株katG和inhA启动子以及利福平耐药株rpoB的突变情况,探讨其耐药相关基因的突变特征及基因突变与耐药表型的相关性.     

σ因子在四种结核分枝杆菌临床株中的表达分析

目的 探索在体外培养的环境下,结核分枝杆菌13种σ因子在临床分离的敏感菌株、单耐异烟肼(INH)、单耐利福平(RFP))、耐多药(同时耐INH和RFP)菌株中的表达情况。方法 选取2018年1—12月天津市结核病控制中心门诊部确诊的结核病患者,对其痰标本快培阳性的实验菌株进行比例法药敏实验,随机分别选择10株全敏菌株、单耐异烟肼、单耐利福平、同时耐利福平和异烟肼的菌株进行Hain实验,随机分别选择10株katG 突变的单耐异烟肼菌株、rpoB 突变的单耐利福平菌株、katG 和rpoB 同时突变的耐多药临床分离株。以传统的Trizol方法提取全菌RNA,设计σ因子的特异性引物,以荧光定量PCR的方法,检测σ因子在转录水平上RNA的表达情况。以核糖体16s为参照基因,利用2^-ΔCt分析σ因子的转录倍数。将稳定表达的sigA作为统计分析的底物,单因素方差(ANOVA)分析其余σ因子的表达差异。结果 σ因子在四种临床分离株中的表达情况与H37Rv相比,虽然所有的σ因子转录水平都提高,但是差异无统计学意义(P >0.05)。三种耐药表型菌株和敏感菌相比,σ因子表达量也都上调,在单耐异烟肼的菌株中,sigC、sigG、sigI、sigJ、sigK表达倍数最高,单因素方差分析差异有统计学意义(P <0.05)。在单耐利福平表型中,只有sigC、sigG表达倍数最高,但差异无统计学意义(P >0.05)。在耐多药菌株中,sigC表达倍数最高,表达倍数>10(P <0.05)。结论 耐药基因的突变能够上调σ 因子的转录水平,σ 因子中sigB、sigC、sigG、sigI、sigJ、sigK可能会成为研究耐药新药方面的新的靶标。