深圳西乡近五年副溶血弧菌的分子特征及血清型别变迁研究

目的了解深圳西乡街道五年来引起感染性腹泻的副溶血弧菌血清型分布、毒力因子及分子流行病学特征,为暴发疫情早期预警预测提供基础数据。方法用传统血清凝集法做血清型鉴定、用荧光PCR法检测毒力基因,再采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对副溶血弧菌进行分子分型。并用BioNumerics软件对PFGE分型图谱进行聚类分析。结果从4 825份标本中,分离出目标致病菌1 077株,其中病原菌副溶血弧菌851株,占79.01%。851株中,563株副溶血弧菌为O3:K6型,占66.15%,其次是O4:K8型,占10.34%。93.4%(795/851)的菌株是tdh+tlh+trh-菌株。对60株O3:K6型副溶血弧菌进行PFGE图谱分析共得到20种不同的PFGE图谱类型,各菌株图谱条带差异小于3条。结论深圳西乡街道五年来副溶血弧菌感染以O3:K6型为主,93.4%的菌株是tdh+tlh+trh-菌株。各菌株图谱具有同源性。     

2001～2003年深圳市学校食堂餐具消毒监测结果分析

目的全面了解深圳市学校食堂餐具的卫生质量情况，为今后学校师生食堂餐饮卫生监督提供科学依据。方法大肠菌群按GB14934—94纸片法，致病菌按GB4789．4．5—2003进行。结果深圳市学校2001～2003年餐具大肠菌群整体合格率分别为87．3％、92．5％、96．8％，致病菌均未检出。结论深圳市大中小学校使用的餐具卫生状况整体情况比较好，多数学校餐具卫生3a保持良好状态，只有个别学校稍差。建议卫生监督机构除继续保持监测外，应着重加大对卫生状况和消毒效果稍差的学校的监督，指导学校做好消毒工作，以保护学校师生的饮食安全，避免引起食物中毒。     

伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌多重PCR及荧光PCR分型方法的建立与评价

目的建立伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌的快速和特异的检测方法,用于沙门菌属内的分型鉴定。方法根据GenBank公布的伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌的保守序列设计引物和改良分子信标探针,建立多重PCR检测方法和实时荧光PCR检测方法。结果采用所建立的多重PCR方法可分别检测到伤寒的3条特异性条带、甲型副伤寒沙门菌的2条特异性条带和丙型副伤寒沙门菌的1条特异性条带,但是乙型副伤寒沙门菌未出现特异性条带。建立的实时荧光PCR方法可以快速、特异、灵敏地检测出伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌,纯DNA和菌液的最低检出限分别可达10 fg/reaction和20 CFU/reaction;对77株细菌的检测正确率达100%。结论建立的实时荧光PCR检测方法比多重PCR方法更能快速、特异、灵敏地检测伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌。     

深圳市食品病原微生物污染的调查

目的了解深圳市食品污染卫生状况,为卫生主管行政部门发布食品安全预警系统提供及时、客观的科学依据。方法用传统国家标准法和快速荧光PCR检测方法对抽检的食品进行细菌总数、大肠菌群及常见的一些致病苗等微生物指标检测鉴定。结果从随机抽检的324份食品中,分别检出不合格的大肠菌群18份；金黄色葡萄球菌4份；沙门菌2份；志贺菌2份；致泻性大肠杆菌8份,空肠弯曲菌2份,副溶血性弧菌1份。结论深圳市食品在微生物卫生指标总体是安全的,食品被污染程度较轻；但少数卫生指标不合格,需要引起有关部门的重视,特别是夏季,要加强监管监测,以防出现大规模的食物中毒事件发生。     

改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157：H7

目的建立改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157：H7的快速方法。方法根据GenBank公布O157：H7的rfbE保守序列，设计一对引物和改良分子信标探针，用FAM荧光剂标记探针的5’端，建立改良分子信标实时PCR检测O157：H7的反应体系，应用于食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果共检测11种细菌。只有大肠杆菌O157：H7有荧光信号，其余10种全无荧光信号，且与其他细菌无交叉反应，DNA灵敏度为64fg，菌液灵敏度为59cfu／ml或2cfu／PCR反应体系。应用改良分子信标实时PCR反应体系检测10株O157：H7均出现特异的荧光信号，无干扰。对89份食品样品进行检测，5份O157：H7实时PCR阳性，其余样品为阴性，检测仅需2h。5份阳性样本，经传统方法培养，有3份检出大肠杆菌O157：H7。结论改良分子信标实时PCR检测体系快速、灵敏度高，特异性强，可用于大肠杆菌O157：H7食物中毒的快速诊断和食品微生物检测，为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌肠毒素液相悬浮芯片方法的建立

目的 采用Luminex液相悬浮芯片检测方法,建立一管同时检测19种葡萄球菌肠毒素和蜡样芽胞杆菌肠毒素的快速筛查方法.方法 根据GenBank公布的葡萄球菌肠毒素entA-entR基因、蜡样芽胞杆菌cesB,nheB基因,设计特异性引物和探针,优化反应体系和条件,建立19种肠毒素的Luminex液相悬浮芯片检测法.结果 Luminex液相悬浮芯片体系检测19种肠毒素互不干扰,经验证80株金葡菌和蜡样芽胞杆菌菌株,均出现特异性荧光中值信号.Luminex液相悬浮芯片技术从样品处理到检测结果需3.5h左右.结论 Luminex液相悬浮芯片筛查方法可应用于食物中毒等应急检测的快速和高通量筛查.     

深圳市食源性金葡菌的耐药趋势及携带肠毒素监测

目的了解深圳市食源性金黄色葡萄球菌（金葡菌）的耐药趋势及携带肠毒素状况,为临床用药、防控金葡菌引发的食源性疾病提供理论依据。方法对2006～2009年自深圳市食品污染物监测及食物中毒样本检出的菌株,均按GB／T4789．10—2008对其进行生化鉴定确定。按NCCLS（2006版）进行K—B法药敏试验,同时检测诱导型克林霉素耐药。用全自动酶联荧光免疫分析仪进行金葡菌肠毒素的检测。结果从185株中检测到9株诱导型克林霉素耐药菌株;对红霉素等3种药物的耐药率呈现上升趋势,对利福平耐药率呈现下降趋势,对其他药物的耐药率呈现波动状态。食品来源的菌株与食物中毒来源的菌株对头孢西丁等4种药物的耐药率有显著性差异。食品污染物和食物中毒分离株的金葡菌肠毒素阳性率分别为49．4％和81．7％,两者有显著性差异。结论食源性金葡菌的耐药性呈上升趋势,普遍具有多重耐药。食物中毒来源的金葡菌产毒率和耐药率高于食品污染物来源的菌株。     

抽检与送检桶装纯净水微生物污染的调查研究

目的研究分析抽检与送检桶装纯净水微生物污染的结果差别和卫生质量。方法对深圳市桶装纯净水的各种产品随机抽检280份；商场、超市和企业等主动送检桶装纯净水各种产品121份，采用国标标准进行微生物指标的各种检测，按国家微生物卫生标准评价。对二组结果进行比对分析研究。结果抽检的280份桶装纯净水合格率为74．3％；送检的桶装纯净水合格率为90．1％，经统计学处理两者有统计学意义（x^2=12．73，P〈0．001）。结论抽检桶装纯净水合格率明显低于送检桶装纯净水的合格率，且两者的差别有统计学意义，说明桶装纯净水存在潜在的安全隐患，并威胁着市民的饮水安全。     

腹泻病病原学研究临床价值

目的:探讨引起腹泻的病原微生物种类和构成特点及其流行情况.方法:采集腹泻患者粪便,进行致泻性大肠埃希菌、沙门菌、志贺菌、空肠弯曲菌和弧菌培养鉴定和血清定型检测;对其中水样便且病原菌检测阴性的标本进行轮状病毒、诺沃克病毒、肠道腺病毒和星状病毒荧光PCR检测.结果:在2 627份粪便标本中,共检出肠道病原菌257株,其中致泻性大肠埃希菌142株(55.3%),副溶血弧菌97株(37.7%),沙门菌17株(6.6%),志贺菌1株(0.4%);未检出霍乱弧菌和空场弯曲菌;5份标本同时检出2种病原菌.在668份病原菌检测阴性的水样便标本中,有274份检出肠道病毒,其中诺沃克病毒180份(65.7%),轮状病毒77份(28.1%),星状病毒15份(5.5%)和肠道腺病毒2份(0.7%);4份同时检出轮状病毒和诺沃克病毒.结论:腹泻病原微生物类型复杂多样,以致泻性大肠埃希菌和诺沃克病毒感染居多,加强腹泻病原微生物的常规检验对腹泻病的病因诊断和治疗有重要临床价值.     

一起食物中毒事件的快速诊断与病原分析

目的：同时应用传统细菌培养方法和改良分子信标方法检测食物中毒致病菌,为突发事件现场的调查处理及患者的治疗提供信息。方法：依据中华人民共和国国家标准《食品卫生微生物学检验》、广东卫生防疫《病原微生物学检验常规》和改良分子信标方法进行检测。结果：15份食品工人肛拭子及3份患者呕吐物均未检出致病菌。在111份患者肛拭子中,66份检出肠炎沙门菌,检出率为59.46%。37份可疑食品和剩余食品中5份检出肠炎沙门菌,18份生产加工环境样品中1份检出肠炎沙门菌。结论：此起食物中毒是面包厂在生产加工过程中糕点食品污染肠炎沙门菌而引起。改良分子信标方法能够快速准确的为传统方法提供检测方向信息,以及为现场疫情处理提供实验室依据。需要进一步加强食品卫生监督管理,定期对食品从业人员进行培训及健康体检,以提高食品安全意识。