一起肠炎沙门菌食物中毒的快速诊断与溯源

本研究采用改良分子信标-实时PCR快速检测方法和核酸脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术，成功地应用于深圳市一起细菌性食物中毒的快速诊断和准确溯源。     

实时荧光PCR同时检测丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌方法的建立和应用

目的建立丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的实时荧光PCR快速检测方法,用于沙门菌属内的分型鉴定。方法根据GenBank公布的丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立实时PCR检测方法。结果检测体系灵敏度高,纯DNA和菌液的最低检出限分别可达10fg和20CFU/反应体系;特异性好,对71株细菌的检测符合率达100%。20株沙门菌采取盲号模拟血培养标本进行血培养检测及鉴定,检出5株丙型副伤寒沙门菌和4株猪霍乱沙门菌,与试验的菌株相符。70份食品中用实时荧光PCR同时检测丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌均为阴性,而用传统方法分离培养未检出。结论建立的实时PCR检测方法可以快速、特异、灵敏地检测出丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌。     

深圳市淡水鱼中香港海鸥菌污染状况调查

目的了解深圳市淡水鱼受香港海鸥菌污染的状况。方法于2011年2-3月共采集深圳市2家农贸批发市场和1家商场淡水鱼共计329份,将鱼肠中、后段内容物直接涂布改良麦康凯琼脂平板,凡生化符合的同时用特异性荧光PCR确诊香港海鸥菌。结果在329份淡水鱼中共检出香港海鸥菌7份,总阳性率为2.13%,其中塘虱鱼的阳性率最高为7.50%,鳙鱼的阳性率为2.50%,草鱼的阳性率为1.22%,其它淡水鱼未检出。7株香港海鸥菌生化反应阳性的,荧光PCR结果均为阳性。结论深圳市场淡水鱼中香港海鸥菌的污染不容忽视,应加强对淡水鱼产品中香港海鸥菌污染的监测,及时进行食品安全的预防和预警。     

香港海鸥形菌分型方法建立与病原学分布调查

目的通过对深圳市感染性腹泻患者标本与外环境水产品标本的检测,掌握深圳市香港海鸥形菌病原学特征及分子分型。方法用传统方法和荧光PCR法同时检测香港海鸥形菌,阳性菌株用K-B法做药敏试验和PFGE分子分型。结果在329份淡水鱼中共检出7份阳性标本,579份腹泻病人标本未检出。该菌对临床常用的24种抗生素耐药性检测结果显示,对氨苄西林、头孢他啶、头孢噻吩、头孢噻腭、头孢哌酮、头孢曲松耐药,头孢西丁为中介,其余均为敏感。7株香港海鸥形菌生化反应阳性的,荧光PCR结果均为阳性。PFGE分子分型表明7株菌不具有同源性。结论本文建立一套完整的对该菌的分离鉴定、基因诊断和PFGE分子分型方法;了解深圳地区主要流行菌型,预测深圳地区该菌的流行趋势,为应对食源性疾病突发事件和水产品安全问题做好技术储备。     

1例罕见的新生儿B群流脑死亡病例的实验室结果分析

目的 明确诊断并分析l例新生儿疑似流行性脑膜炎死亡病例可能的传染来源和传播途径.方法 收集死亡病例的血液标本及其密切接触者的咽试子标本并进行菌株的分离培养和分型及药敏试验.结果 死亡病例的血标本及其密切接触者患儿父亲咽试子标本均分离到B群脑膜炎奈瑟菌菌株,2株菌株对氨苄西林、环丙沙星、利福平、氯霉素、头孢噻吩、红霉素及四环素均敏感,对磺胺类药耐药.结论 根据该病例的特点和实验室检测结果,判断该病例为B群脑膜炎奈瑟菌引起的死亡病例.     

深圳市甲型副伤寒PulseNet数据库的建立与应用

目的建立深圳市甲型副伤寒PulseNet数据库,用于甲型副伤寒的实时监测和分子流行病学调查。方法采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术,对深圳市2002-2007年散发和爆发的243株甲型副伤寒沙门菌的染色体DNA进行酶切电泳,用BioNumerics软件对PFGE分型图谱电子化数据分析,建立分子分型数据库。结果深圳市甲型副伤寒菌株各年间差异较小,用Xba酶切仅呈现6种PFGE图谱。同一起甲副暴发的临床分离株具有相同的PFGE图谱。各区和各年代的分离株都存在有相同的PFGE带型。结论深圳市甲型副伤寒沙门菌变异较小,呈长期流行趋势,甲型副伤寒PulseNet数据库的初步建立,对直观地分析各起疫情之间的相互关系,对疫情的控制和传染来源的追踪具有重要意义。     

一起蜡样芽孢杆菌10型引起食物中毒的快速诊断与分子分型研究

目的对引起一起食物中毒的蜡样芽孢杆菌进行快速诊断和分子分型。方法对中毒人员的呕吐物、肛拭子、可疑食品等样品用国标方法进行实验室检测,同时采用自主建立的荧光PCR方法进行快速检测。所分离的菌株PCR扩增vrrA基因多态性位点,产物进行基因双向测序和比较分析。结果在10份呕吐物、肛拭子、可疑食品中用传统方法和荧光PCR方法同时检出8份蜡样芽孢杆菌阳性,生物分型为10型。PCR测序结果显示它们有99%的同源性。结论这是一起食用了由蜡样芽孢杆菌10型污染的食品引起的呕吐型食物中毒,用蜡样芽孢杆菌呕吐毒素基因cesB为检测靶标的荧光PCR方法可以快速灵敏地对此类食物中毒进行初步诊断。以vrrA基因为多态性位点的PCR基因测序方法可用于蜡样芽孢杆菌的分子分型和食品污染源的准确追踪。     

深圳市部分酒店的空调系统微生物污染情况监测

目的 了解深圳市部分酒店的空调系统微生物污染情况，以便对空调系统采取消毒和卫生管理措施。保障空调环境卫生。方法 采用对酒店各部不同类型空调进行抽样调查，检测空调系统过滤网、冷却水、空气中的细菌总数、霉菌总数以及军团菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、芽孢杆菌等项目。结果 中央空调冷却水军团菌污染严重，阳性率为65．66％。不同类型空调系统集尘过滤网的细菌总数、霉菌总数超标率达33.8％，金黄色葡萄球菌，溶血性链球菌未检出阳性，而芽胞杆菌检出率较高为70.87％；在空气积尘中细菌、霉菌总数超标率较低，金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、芽胞杆菌检出率较低。结论部分酒店空调系统污染较为严重，必须引起注意，加强卫生消毒措施及管理。     

蜡样芽胞杆菌DNA分子分型研究

目的 建立蜡样芽胞杆菌分子分型方法，用于蜡样芽胞杆菌食物中毒的快速溯源。方法15株蜡样芽胞杆菌进行生化分型，同时进行vrrA基因PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染检测PCR扩增产物，所有PCR扩增产物进行序列分析，并用ClustalW(ebi．ac．uk)分析软件对DNA序列进行同源性比较。结果传统生化分型：15株蜡样芽胞杆菌中12株可分为3个型，3株不能分型；主要生化型为1型、2型和4型。分子分型：15株蜡样芽胞杆菌都可分为7个型。结论、vrrA基因可作为蜡样芽胞杆菌分子分型的一个多态性遗传标记。蜡样芽胞杆菌分子分型方法与传统生化分型方法相比，将传统生化分型所需的48h甚至更长时间缩短到5h，具有简便快速准确的优点，可做到快速溯源。     

应用实时荧光PCR法快速检测从业体检人群肠道致病菌结果分析

目的分析与评价实时荧光PCR法快速筛查从业人员沙门菌、志贺菌的带菌情况。方法收集从业人员肛拭样本,用实时荧光PCR法进行快速筛查,采用常规细菌培养法作为标准方法进行验证和血清分型,分析其灵敏度及特异性。结果在24598份样品中,实时荧光PCR法检出沙门菌阳性18份,志贺菌阳性11份．阳性率分别为0．732‰和0．447‰。通过细菌培养法验证及分型,14份标本确认为沙门菌阳性,阳性率为0．569‰,分布于A、B、C、D、E、F6个群11个血清型;6份标本确认为志贺菌阳性,阳性率为0．244‰,分布于B、C、D3个群5个血清型。实时荧光PCR法筛查沙门菌、志贺菌的灵敏度均为100．00％。特异性均为99．98％。结论与传统细菌培养法相比．实时荧光PCR法简便、快速,可提高检测的灵敏度和特异性,减少工作量,适用于肠道致病菌的快速筛查。