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目的应用RNA干扰技术靶向阻断survivin基因表达,探讨其蛋白表达水平及对细胞增殖抑制作用。方法将siRNA真核表达载体Pgenesil-sur通过脂质体介导转染腺样囊性癌细胞,采用免疫组化法检测survivin基因蛋白表达;并用图象分析仪分析蛋白表达强度及表达抑制率。MTT法检测对腺样囊性癌细胞增殖的抑制作用。结果空白对照组、空质粒载体组、RNA干扰组survivin蛋白表达强度分别为:2.52±0.10,2.48±0.11,0.53±0.10。经统计学分析表明转染Pgenesil—sur真核表达载体后。survivin基因蛋白表达水平明显减低(P〈0.05),其抑制率达到79%;转染空质粒载体与空白对照组差异无统计学意义(P〉0.05);MTT法结果表明转染Pgenesil—sur真核表达载体后细胞增殖受到显著抑制,抑制率为38.80%(P〈0.05);转染空质粒载体细胞增殖未受到抑制(P〉0.05)。结论靶向survivin siRNA能抑制体外培养的腺样囊性癌细胞survivin基因蛋白表达与细胞增殖作用。 相似文献
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目的:通过研究中药有效成分柚皮苷对人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖、矿化成骨及骨保护素(OPG)表达的影响,探讨柚皮苷对人牙周膜细胞增殖及成骨功能的调节作用。方法:采用酶消化结合组织块法,体外原代培养hPDLCs,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、酶联免疫吸附法和半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法,测定不同质量浓度(100、10、1.0、0.1、0.01mg/L)柚皮苷作用后,hPDLCs增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、Ⅰ型胶原蛋白、OPG表达的变化,采用SPSS16.0统计包对数据进行统计学处理。结果:原代培养的hPDLCs形态良好,1.0mg/L浓度组的柚皮苷对hPDLCs增殖、ALP活性和Ⅰ型胶原蛋白表达的促进作用最强,此浓度柚皮苷对细胞OPG mRNA的调节作用在测定时段内呈时间依赖性。结论:柚皮苷有促进hPDLCs增殖及向成骨方向转化的作用。 相似文献
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目的:观察中药有效成分柚皮苷和黄芩苷联合应用对人牙周膜细胞(hPDLCs)生物学活性的作用。方法:用酶结合组织块法原代培养hPDLCs;通过MTT法、酶联免疫吸附法、诱导矿化实验测定二者配比之后对hPDLCs增殖、Ⅰ型胶原蛋白的表达、碱性磷酸酶(ALP)活性及钙化结节形成的影响。结果:1.0 mg/L的柚皮苷与0.1 mg/L黄芩苷配伍对细胞增殖、Ⅰ型胶原蛋白表达、ALP活性以及矿化的促进作用明显。结论:柚皮苷与黄芩苷配伍组合可增强hPDLCs的成骨能力。 相似文献
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[摘要] 目的 探讨正常人与口腔扁平苔藓(OLP)患者口腔黏膜的差异蛋白。 方法 对正常人与OLP的口腔黏膜进行蛋白质的提取,对标本进行双向凝胶电泳并对图像进行扫描分析,寻找可能的差异蛋白。肽质量指纹图谱鉴定差异蛋白,PMF图象收集及在线检索,实现对蛋白质的鉴定,并对其进行分析。结果 OLP与正常人口腔黏膜组织差异表达蛋白质点数为28个,其中20个点在OLP中为高表达,8个点在OLP中为低表达(P<0.05)。选取分辨清楚的10个差异蛋白质点进行MALDI-TOF-MS检测,鉴定出5个蛋白质,其中角蛋白II型表皮细胞骨架2、波形蛋白、胞质动力蛋白重链1及纤维蛋白原β链在OLP患者中高表达,载脂蛋白A1在OLP患者中低表达。结论 获得了OLP患者与正常人的蛋白质双向电泳图谱,发现OLP患者与正常人的口腔黏膜组织之间存在蛋白质表达差异,鉴定出的特异蛋白质提示OLP的发病过程可能有细胞骨架体系的参与并支持OLP的发病与微循环障碍及高粘血症有关。 相似文献
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目的观察存活素蛋白在SD大鼠牙胚发育过程中的表达,探讨其在牙胚发育过程中的作用。方法建立SD大鼠牙胚发育模型,用免疫组化方法检测存活素蛋白在SD大鼠牙胚不同发育时期中的表达情况。结果图像分析显示存活素蛋白的表达在胎鼠牙胚的蕾状期增强,帽状期、钟状早期减弱,出生后再增强以后随着发育的进行逐渐减弱,呈双波形变化趋势,经统计学检验出生后3.5d与出生后5.5d之间的差异无显著性,其他各组之间均存在显著性差异。结论存活素蛋白可能参与了牙胚发育过程。 相似文献
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目的观察存活素蛋白在SD大鼠牙胚发育过程中的表达,探讨其在牙胚发育过程中的作用。方法建立SD大鼠牙胚发育模型,用免疫组化方法检测存活素蛋白在SD大鼠牙胚不同发育时期中的表达情况。结果图像分析显示存活素蛋白的表达在胎鼠牙胚的蕾状期增强,帽状期、钟状早期减弱,出生后再增强以后随着发育的进行逐渐减弱,呈双波形变化趋势,经统计学检验出生后3.5d与出生后5.5d之间的差异无显著性,其他各组之间均存在显著性差异。结论存活素蛋白可能参与了牙胚发育过程。 相似文献
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目的 构建白色念珠菌3-磷酸甘油醛脱氧酶(GAPDH)的表达载体并使其在大肠杆菌中正确表达.方法 提取基因组总RNA,PCR方法获得GAPDH基因,构建其原核表达质粒pET-32a(+)-GAPDH,转化大肠杆菌BL21菌株,经IPTG诱导产生蛋白,用SDS-PAGE和Western Blotting检测GAPDH蛋白表达情况.结果 构建的白色念珠菌GAPDH基因表达质粒经序列测定证实,与GenBank数据完全一致.双酶切鉴定证实,克隆基因正确插入pET-32a(+)载体.在1.0 mmol·L-1的IPTG浓度诱导下表达,可观察到相对分子量51kDa的蛋白,经SDS-PAGE和Western Blotting检测证实为GAPDH蛋白.结论 实验成功克隆白色念珠菌GAPDH基因,并在大肠杆菌中正确表达,为白色念珠菌感染的候选疫苗奠定工作基础. 相似文献
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目的:包装纯化具有感染性的腺相关病毒rAAV-hBMP7,检测其包装效率及感染滴度。方法:应用AAV Helper-Free System、磷酸钙三质粒共沉淀法,将病毒质粒pAAVIRES-hrG-FP-hBMP7、辅助质粒pAAV-Helper和包装质粒pAAV-RC转染AAV-293细胞,进行病毒包装,荧光计数法测定病毒包装效率;反复冻融收获病毒液,按氯仿处理、PEG/NaCl沉淀的方法浓缩纯化;纯化的病毒液感染AAV-HT1080细胞观测荧光表达,原位β-半乳糖苷酶染色测定病毒感染效率和滴度。结果:转染AAV-293细胞后6h即有绿色荧光表达,包装效率为94.16±0.13%。纯化的rAAV-hBMP7在HT1080细胞中的感染效率为78%,计算病毒物理滴度为2.34×1011v·g/ml。结论:磷酸钙三质粒共沉淀法可实现病毒在AAV-293细胞中的高效包装,纯化的rAAV病毒载体能介导hBMP7基因转染真核细胞并具有较高的转染效率和感染滴度。 相似文献
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目的:构建人骨形成蛋白-7(hBMP-7)基因重组腺相关病毒载体,并转染牙髓细胞,为牙组织损伤修复的基因治疗做探索性研究。方法:以含hBMP-7全长cDNA的载体PTcDNA-hBMP-7为模板进行PCR扩增,将回收产物和pAAVIRES-hrGFP分别双酶切后连接、转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,获得重组质粒pAAVIRES-hrGFP-hBMP-7。采用磷酸钙共沉淀法转染293细胞进行病毒包装,收获的病毒液按氯仿处理、PEG/NaCl沉淀、酚:氯仿反复抽提法浓缩纯化,斑点杂交法测病毒滴度,并转染体外培养的牙髓细胞。结果:酶切鉴定和测序结果表明,hBMP-7基因成功克隆入pAAVIRES-hrGFP载体中。在293细胞中包装出重组腺相关病毒载体rAAVIRES-hBMP-7,物理滴度为3.0×1011v.g/ml。rAAV转染牙髓细胞后GFP表达逐渐增强,可持续表达到4周以后。结论:重组腺相关病毒载体rAAVIRES-hBMP-7,能有效转染牙髓细胞表达目的基因。可用于牙组织工程基因治疗的研究。 相似文献