医院分离致病菌的临床分布和耐药性监测

 [目的]调查南昌大学第一附属医院临床分离致病菌的分布特点及对常用抗菌药物的耐药情况。[方法]用Microscan-autoscan-φ型自动微生物分析仪鉴定到种并测定其对常用抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC50）,按美国临床实验室标准委员会（NCCLS）2003年版标准判断结果,利用WHONET5软件进行统计和分析。[结果]1344株菌中,革兰氏阳性（G^＋）菌占31.92%;革兰氏阴性（G^-）菌占68.08%。最常见的G^＋菌有表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌等;最常见的G-菌有大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、洛菲不动杆菌、短黄杆菌和阴沟肠杆菌等;细菌的分布以痰液中分离的最多（40.10%）,其次为尿液（19.79%）,分泌物占11.24%;主要来源于呼吸内科（11.53%）和ICU（10.79%）。药敏结果表明：利福平、万古霉素对常见G^＋菌治疗效果较好,但利福平对金黄色葡萄球菌无效;头孢西丁、哌拉西林/他巴唑、亚胺培南和阿米卡星是治疗肠杆菌感染的首选药,但对阴沟肠杆菌无效;鲍曼不动杆菌和嗜麦芽假单胞菌对常用抗菌药物的平均耐药率分别为37.67%和56.15%。[结论]细菌的多重耐药日趋严重,开展细菌耐药性监测,对指导临床合理使用抗生素,降低医院感染率和病死率有重要意义。     

人肝癌相关基因ANGPTL4的克隆及鉴定

目的获取人肝癌相关基因血管生成素样4（angiopoietin-like4，ANGPTL4）cDNA克隆，构建重组逆转录病毒载体pMSCV-ANGPTL4，为进一步相关研究打下基础。方法以人肝细胞株HL-7702的总RNA为模板，用RT-PCR方法体外扩增出人肝癌相关基因ANGPTL4 cDNA，将其亚克隆至逆转录病毒载体pMSCV，测序鉴定。结果所克隆的ANGPTL4基因cDNA与文献报道的ANGPTL4基因完整编码区cDNA一致，成功构建重组逆转录病毒载体pMSCV-ANGPTL4。结论从人肝细胞株HL-7702中可以稳定克隆出ANGPTL4基因cDNA，成功将ANGPTL4 cDNA亚克隆至逆转录病毒载体pMSCV。     

酪氨酸激酶抑制剂A77-1726阻断IL-13介导STAT6磷酸化和c-fos表达

目的研究酪氨酸激酶抑制剂A77-1726对IL-13介导Dami细胞STAT6磷酸化和c-fos表达的影响,为A77-1726的临床应用和IL-13的信号通路研究提供新的实验依据。方法提取Dami细胞总RNA,RT-PCR检测c-fos mRNA表达。提取Dami细胞总蛋白,Western blot检测磷酸化STAT6和c-fos蛋白表达。凝胶定量软件Quantity One检测电泳条带光密度,统计学分析。结果100μg·L-1IL-13作用Dami细胞,可见STAT6磷酸化,50μmol·L-1A77-1726可阻断IL-13诱导的Dami细胞STAT6磷酸化。IL-13作用Dami细胞,c-fos mRNA表达增高(P<0.05),50μmol·L-1A77-1726阻断了IL-13诱导的Dami细胞c-fos mRNA的表达(P<0.05)。IL-13促进Dami细胞c-fos蛋白表达(P<0.05),50μmol·L-1A77-1726作用Dami细胞,阻断了IL-13诱导的c-fos蛋白表达(P<0.05)。结论酪氨酸激酶抑制剂A77-1726阻断了IL-13介导的白血病Dami细胞STAT6磷酸化和c-fos表达,JAK/STAT6通路是IL-13信号通路之一,IL-13诱导的c-fos表达与STAT6通路相关。     

ICU常见病原菌及鲍曼不动杆菌质粒上耐药基因的研究

目的分析南昌大学一附院ICU常见菌的种类、分布、耐药性及鲍曼不动杆菌（AB）质粒上的耐药基因。方法用Microscan-autoscan-φ型自动微生物分析仪鉴定到种并测定其对常用抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC50），按美国临床实验室标准委员会（NCCLS）2003年版标准判断结果，利用WHONET5．2软件进行统计和分析，并用聚合酶链式反应（PCR）分析AB质粒上的耐药基因。结果ICU分离菌中革兰阴性菌占75．3％，常见的菌种有铜绿假单胞菌（16．27％）、金葡菌（15．66％）、AB（15．06％）和肺炎克雷伯菌（14．66％），非发酵菌的分离率明显上升，占分离菌总数的42．77％，87．35％的标本来自痰液。革兰阴性菌耐药率高，AB对包括IPM在内的13种常用抗生素均高度耐药且其质粒上携带可接合传递并稳定传代的三种耐药基因。结论细菌的多重耐药日趋严重，开展细菌耐药性监测，对指导临床合理使用抗生素，降低医院感染率和病死率有重要意义。质粒上带一种或多种可接合传递并稳定传代的blaTEM-1（EU022370）、blaPER-1（EU022369）和blaOXA-23（EU022368）基因是ICUAB多重耐药的分子学机制之一。     

鲍曼不动杆菌TEM-1型ESBLs基因及其多重耐药的研究

目的分析产TEM-1型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）鲍曼不动杆菌的耐药性及其基因序列。方法用聚合酶链式反应（PCR）扩增产ESBLs鲍曼不动杆菌的TEM-1型耐药基因，用克隆测序方法分析质粒上TEM-1型ESBLs基因。结果15株产ESBLs鲍曼不动杆菌中，TEM-1型ESBLs阳性菌株有12株，TA克隆后测序表明，与鲍曼不动杆菌（AY560328．1）bla TEM-1基因序列99％源。结论质粒上带产TEM-1型ESBLs的鲍曼不动杆菌，bla TEM-1基因与鲍曼不动杆菌多重耐药密切相关。     

ePNP自杀基因载体的构建及其表达

[目的]构建稳定表达ePNP（E.coliPNP）的细胞模型,为肿瘤的基因治疗提供实验基础。[方法]提取大肠杆菌E.coliK12总DNA,PCR方法克隆大肠杆菌ePNP基因,构建逆转录病毒载体质粒pMSCV-ANGPTL4,鉴定测序。脂质体法将三种逆转录病毒载体pMSCV-ANGPTL4、pVSV、pGAG-POL共转染293-EBNA包装细胞,获得高滴度病毒并感染MDA-MB435细胞。荧光显微镜与RT-PCR检测MDA-MB435细胞ePNP基因的表达。[结果]所克隆的ePNP基因与文献报道一致;成功构建了pMSCV/ePNP重组逆转录病毒载体;ePNP基因在MDA-MB435细胞中获得稳定表达。[结论]pMSCV/ePNP自杀基因载体的成功构建及其表达为ePNP应用于肿瘤基因治疗奠定了基础。     

肝素增强血小板生成素对巨核细胞增殖的作用

目的和方法：为了探讨巨核细胞增殖调控,我们研究了肝素对重组人血小板生成素刺激ＢＡＬＢ／ｃ小鼠巨核系祖细胞（ＣＦＵ－ＭＫ）和人巨核细胞系－红白细胞白血病细胞 作用。采用固体和液体培养、ＣＦＵ－ＭＫ－乙酰胆碱脂酶染色和５－溴－２‘－脱氧尿嘧啶核苷（５－ＢｒｄＵ）－酶联免疫吸附等方法,观察了ＣＦＵＭＫ和ＨＥＬ细胞集落数以及ＨＥＬ细胞的吸光度。结果：在培养基中加入ｒｈＴｐｏ１００ｎｇ／ｍｌ和肝素２．５Ｕ／     

溶血磷脂酸对人肺成纤维细胞白细胞介素13受体α2mRNA表达的影响

背景:白细胞介素13受体α 2与白细胞介素13结合后,不介导白细胞介素13功能,对白细胞介素13起负调控作用.有研究表明,溶血磷脂酸能增加人支气管上皮细胞白细胞介素13受体α 2的表达,从而抑制白细胞介素13的作用.目的:验证溶血磷脂酸对人肺成纤维细胞白细胞介素13受体α 2 mRNA表达的诱导作用.设计、时间及地点:mRNA水平的观察对照实验,于2007-07/2008-11在南昌大学医学院和江西省医学生物高技术重点实验室完成.材料:人肺成纤维细胞HFL-1购于中科院上海生化和细胞生物研究所.方法:培养HFL-1细胞,行时间依赖和剂量依赖实验.时间依赖实验采用1 μ mol/L溶血磷脂酸刺激细胞,分别于0,6,12,24 h收集细胞.剂量依赖实验分别用0,0.1,1,10 μ mol/L的溶血磷脂酸刺激细胞,12 h收集细胞.主要观察指标:显微镜下观察溶血磷脂酸对HFL-1细胞生长的影响,提取HFL-1细胞总RNA,用反转录-聚合酶链反应及图像分析法剑测溶血磷脂酸对HFL-1细胞白细胞介素13受体α 2 mRNA表达的影响.结果:溶血磷脂酸不影响HFL-1细胞生长.1 μ mol/L溶血磷脂酸刺激HFL-1细胞,白细胞介素13受体α 2 mRNA的表达增高,并呈时间依赖性.随着溶血磷脂酸浓度的增加,白细胞介素13受体α 2 mRNA的表达明显增加.1 μ mol/L溶血磷脂酸刺激HFL-1细胞,白细胞介素13受体α 2 mRNA的表达可达高峰.溶血磷脂酸对HFL-1细胞白细胞介素13受体α 1 的表达无影响.结论:溶血磷脂酸能促进人肺成纤维细胞HFL-1白细胞介素13受体α 2 mRNA的表达.     

RNA干扰抑制DLL4基因表达对人血管内皮细胞增殖的影响

背景：Delta—like4（DLL4）是近年新发现的血管生长调控因子,研究表明抑制DLL4可导致过度无效的血管生成。目的：研究RNA干扰抑制DLL4基因表达对人血管内皮细胞增殖的影响。设计、时间及地点：随机分组,对比观察,于2007—07／2008—09在南昌大学医学院和江西省医学生物高技术重点实验室完成。材料：人微血管内皮细胞由上海细胞生物和生物化学研究所提供。方法：设计和化学合成靶向DLL4基因的siRNA序列,lepofectamine^TM2000介导DLL4 siRNA转染人微血管内皮细胞。提取细胞总RNA,进行反转录一聚合酶链反应扩增,琼脂糖电泳检测DLL4mRNA。提取细胞总蛋白,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。采用四甲基偶氮唑盐法检测DLL4 siRNA对人微血管内皮细胞增殖的影响,实验分4组：①85nmol／LDLL4 siRNA—duplex组。②85nmol／LDLL4 siRNA-scrambled阴性对照组。⑧lepofectamine组。④未经处理组。主要观察指标：RNA干扰后,人微血管内皮细胞DLL4的转录和蛋白表达及人微血管内皮细胞的增殖。结果：反转录聚合酶链反应和Western blot实验结果显示,人微血管内皮细胞转录DLL4和表达DLL4蛋白;85nmoIILDLL4 siRNA完全抑制人微血管内皮细胞DLL4转录和DLL4蛋白的表达。DLL4sIRNA抑制人微血管内皮细胞DLL4表达的有效浓度为85nmol／L。四甲基偶氮唑盐实验结果显示,85nmol／LDLL4 siRNA-duplex组的细胞增殖率为190．00％,未经处理组的细胞增殖率为110．00％。结论：人微血管内皮细胞表达DLL4,DLL4 siRNA抑制人微血管内皮细胞表达DLL4并促进人微血管内皮细胞增殖,DLL4对人微血管内皮细胞增殖具有抑制作用。     

白细胞介素-13与霍奇金淋巴瘤

白细胞介素-13（IL-13）是20世纪90年代发现的细胞因子,当初命名为P600蛋白,主要有激活的TH2细胞分泌的具有多效能性的免疫调节性细胞因子口。IL-13在过敏性炎症的病理变化中起重要作用,它与IL-4、IL-10协同,具有抗炎症的功能,并抑制由细菌脂多糖引起的单核细胞产生炎症因子,如TNF-α、IL-18、IL-6和IL-8等。王碧飞等研究表明,在体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（MC）无基础TNF-α分泌及TNF—α mRNA表达,