白介素-13 对与乳腺癌细胞共培养的成纤维细胞SDF-1 和EGF 表达影响

目的:为了探索白细胞介素-13(Interleukin-13,IL-13)在乳腺癌发展中的作用机制,我们研究了IL-13 对与乳腺癌细胞共生长的成纤维细胞表达SDF-1(Stromal cell derived factor 1)和EGF(Epidermal growth factor)的影响。方法:采用体外和荷瘤裸鼠体内人乳腺癌细胞株MDA-MB-231 和人成纤维细胞株CCC-ESF-1(ESF)共培养的方法,用定量PCR(RT-qPCR)方法、流式细胞术和Western blot 方法检测在IL-13 作用下体外共培养的成纤维细胞SDF-1 和EGF 的表达,细胞增殖实验Cell counting kit-8(CCK-8)观察IL-13 对体外共培养的乳腺癌细胞增殖的影响;免疫荧光激光共聚焦显微镜观察在IL-13 作用下荷瘤裸鼠体内与乳腺癌细胞共生长的成纤维细胞SDF-1 和EGF 的表达,检测IL-13 对荷瘤裸鼠肿瘤体积的影响。结果:IL-13 上调体外与乳腺癌细胞共培养的成纤维细胞SDF-1 和EGF 的表达,并促进共培养的乳腺癌细胞的增殖;IL-13 上调荷瘤裸鼠乳腺癌组织成纤维细胞SDF-1 和EGF 的表达,并促进荷瘤裸鼠肿瘤生长。结论:IL鄄13 上调与乳腺癌细胞共培养的成纤维细胞SDF-1 和EGF 的表达,IL-13 对乳腺癌促进作用的分子机制涉及乳腺癌基质成纤维细胞的SDF-1 和EGF。     

人可溶性粘附素5截短体的克隆、表达及生物活性测定

目的：克隆和转染人可溶性粘附素5截短体（sCadherin5△），并检测其生物活性。方法：RT—PCR扩增Cadher-in5△cDNA，并克隆人pMSCV逆转录病毒载体，构建pMSCV／sCadherin5△，转化感受态大肠杆菌XL—blue菌株，提取、纯化和酶切质粒，测序分析sCadherin5△，转染NIH3T3细胞，mRNA和蛋白质水平检测NIH3T3细胞表达和分泌sCadherin5△，MTT方法检测sCadherin5△生物活性。结果：PCR产物约为1128bp，构建了pMSCV／sCadherin5△质粒载体，序列测定的结果与GeneBank中Cadherin5胞膜外区121bp至1248bp之间的序列一致。pMSCV／sCadherin5△转染的NIH3T3细胞表达和分泌sCadherin5△，sCadhefin5△抑制HUVEC细胞体外增殖。结论：克隆、表达和分泌了具有生物活性的人sCadherin5△。     

兔输卵管内皮素-1 mRNA阳性表达细胞的分布

为了探明内皮素－1在兔输卵管组织细胞中的来源,本文采用地高辛精标记ET－1 cRNA探针核酸原位杂交法对兔输卵管内皮素－1mRNA阳性表达细胞的分布进行了研究。结果显示,输卵管粘膜上皮细胞浆内可见ET－1mRNA阳性杂交信号,呈深蓝色,阳性杂交信号强且密集,该阳性杂交信号主要分布在细胞核的上方,靠近游离面。     

IL-13和乙醇对人肺成纤维细胞增殖的影响

目的 研究乙醇和(或)IL-13对人肺成纤维细胞(HFL-1)的促增殖作用.方法 培养HFL-1,通过MTT法检测乙醇和(或)IL-13对HFL-1增殖的影响,并对结果进行分析.结果 ①25、50、100、200 mmol·L-1乙醇对HFL-1的增殖无影响(P>0.05).②10、20、50 μg·L-1的IL-13对乙醇有促增殖作用,且有浓度依赖性(P<0.05).③不同浓度的乙醇(25、50、100、200 mmol·L-1)和10 μg·L-1 IL-13共同刺激HFL-1后增殖效果与10 μg·L-1 IL-13单独刺激的效果差异无统计学意义(P>0.05);除50 mmol·L-1外,其余浓度的乙醇(25、100和200 mmol·L-1)和20 μg·L-1 IL-13共同刺激HFL-1后增殖效果高于20 μg·L-1 IL-13单独刺激的效果(P<0.05);不同浓度的乙醇(25、50、100和200 mmol·L-1)和50 μg·L-1 IL-13共同刺激HFL-1后增殖效果明显高于50 μg·L-1 IL-13单独刺激的效果(P<0.05),且具有浓度依赖性.结论 单独低浓度乙醇(25、50、100和200 mmol·L-1)不会影响HFL-1的增殖,但与一定浓度IL-13共同作用下将对HFL-1的增殖有显著影响.     

ePNP自杀基因载体的构建及其表达

[目的]构建稳定表达ePNP（E.coliPNP）的细胞模型,为肿瘤的基因治疗提供实验基础。[方法]提取大肠杆菌E.coliK12总DNA,PCR方法克隆大肠杆菌ePNP基因,构建逆转录病毒载体质粒pMSCV-ANGPTL4,鉴定测序。脂质体法将三种逆转录病毒载体pMSCV-ANGPTL4、pVSV、pGAG-POL共转染293-EBNA包装细胞,获得高滴度病毒并感染MDA-MB435细胞。荧光显微镜与RT-PCR检测MDA-MB435细胞ePNP基因的表达。[结果]所克隆的ePNP基因与文献报道一致;成功构建了pMSCV/ePNP重组逆转录病毒载体;ePNP基因在MDA-MB435细胞中获得稳定表达。[结论]pMSCV/ePNP自杀基因载体的成功构建及其表达为ePNP应用于肿瘤基因治疗奠定了基础。     

纸片扩散确认法与聚合酶链式反应检测超广谱 β-內酰胺酶的比较

  【目的】 分析纸片扩散确认法与聚合酶链式反应(PCR)检测超广谱β-內酰胺酶(ESBL)检出率&#65377;【方法】 以分离保存的30株多重耐药(MDR), 对3种以上实验所用抗生素耐药)且β-内酰胺酶阳性鲍曼不动杆菌(AB)菌株作为研究对象,对其中15株经纸片扩散确认ESBL+ AB 和15株ESBL- AB菌株的分布&#65380;药敏&#65380;质粒谱及基因型作了比较分析,并对两种方法检出ESBL的阳性率进行比较&#65377;【结果】 通过纸片扩散确认法检出的ESBL+ AB 和ESBL- AB在不同科室间的分布(P > 0.05)&#65380;不同标本间的分布(P > 0.05)&#65380;对不同抗生素的耐药情况(P > 0.05)及质粒谱都无明显差异,且用聚合酶链式反应在ESBL- AB质粒上也分离到了相同的3种耐药基因,PCR法检测ESBL的阳性率高于纸片扩散确认法(P < 0.001)&#65377;【结论】 用PCR法检测ESBL更快更敏感,对指导临床合理使用抗生素和降低医院感染率和病死率有重要意义&#65377;     

原癌基因c—fos及c—myc在IL-13诱导Dami细胞分化中的表达关系

目的研究重组人白细胞介素-13（recombinant human interleukine-13,rhIL-13）诱导Dami细胞分化中原癌基因c-los及c—myc表达,探索原癌基因c-fos及c—myc在IL-13信号传导通路中的作用。方法采用RT—PCR检测rhIL-13分别作用不同时间GPⅡbmRNA、c-losmRNA和e-myc mRNA的表达;Western Blotting检测c—Fos和c—Mye的表达。结果IL-13促进巨核细胞表面标志物GPⅡb mRNA表达;诱导原癌基因c—fos mRNA和蛋白的表达,并随后下调原癌基因c-mycmRNA和蛋白的表达。结论原癌基因c—fos与c—myc参与了IL-13诱导的信号传导并具有相关性。     

酪氨酸激酶抑制剂A771726阻断IL-13对成纤维细胞的促胶原合成作用

目的:观察酪氨酸激酶抑制剂A77 1726对白细胞介素13(IL-13)促成纤维细胞胶原合成作用的影响.方法:MTF法观察不同浓度的A77 1726对成纤维细胞的增殖作用的影响.成纤维细胞分为实验组和实验对照组,实验对照组加入IL-13(100 μg/L),实验组加入A77 1726(50 μmol/L)和IL-13(100μg/L),作用24、48、72 h后,羟脯氨酸(Hyp)检测A77 1726对IL-13促进成纤维细胞分泌胶原蛋白的影响,RTPCR观察A77 1726对IL-13促进成纤维细胞Ⅰ型胶原α1基因mRNA水平表达的影响,Western blot观察A77 1726对IL-13促进成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原蛋白的影响.结果:A77 1726可抑制成纤维细胞的增殖.羟脯氨酸检测实验组48 h组和72 h组成纤维细胞分泌胶原蛋白的含量显著低于实验对照组(P＜0.05),RT-PCR观察到实验组48 h组和72 h组成纤维细胞Ⅰ型胶原α1基因(COLIA1)mRNA表达水平显著低于实验对照组(P＜0.05),Western blot观察到实验组48 h组和72 h组成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原蛋白的水平显著低于空白对照组(P＜0.05).结论:酪氨酸酶抑制剂A77 1726阻断IL-13对成纤维细胞的促胶原蛋白合成作用,阻断IL-13促成纤维细胞Ⅰ型胶原α1基因mRNA水平和蛋白水平的表达.