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碱性环境和高磷条件下大鼠胸主动脉平滑肌细胞成骨样表型转化中钙激活钾通道mRNA的表达

目的观察碱性环境中高磷诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞中电导钙激活钾通道(KCa3.1)与大电导钙激活钾通道(KCa1.1)表达的变化,以及探究钙激活钾通道与大鼠胸主动脉平滑肌细胞表型转化之间的关系。方法采用组织块贴壁法培养原代大鼠主动脉平滑肌细胞,利用10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠制备血管平滑肌细胞钙化模型。使用HCl和Na HCO3调节培养基p H值。细胞随机分为5组:正常p H 7.4组、高磷p H 7.4组、高磷p H 7.7组、高磷p H 8.0组、TRAM-34干预组,共培养4天。用逆转录-聚合酶链反应检测各组细胞中KCa3.1、KCa1.1α、KCa1.1β、Runt相关转录因子2(Runx2)和平滑肌22α(SM22α)表达。结果与正常p H 7.4组相比,高磷组Runx2水平明显升高,且随着p H升高而表达量增加(P0.05);高磷组SM22α水平明显下降,且随着p H升高而表达量减少(P0.05)。与正常p H 7.4组相比,高磷p H 7.4组KCa3.1表达升高(P0.05),KCa1.1α表达下降(P0.05)。在高磷组中,随着p H升高KCa3.1、KCa1.1α表达量增加(P0.05)。在同一组中KCa3.1表达高于KCa1.1α(P0.05)。KCa1.1β表达在3个高磷组间未见统计学差异(P0.05)。与高磷p H 8.0组相比,TRAM-34干预组Runx2mRNA水平明显下降(P0.05),SM22αmRNA水平明显上升(P0.05)。相关分析显示,KCa3.1表达与Runx2表达呈正相关(r=0.945,P0.01),与SM22α表达呈负相关(r=-0.926,P0.01);在正常p H 7.4组、高磷p H 7.4组中KCa1.1α表达与Runx2表达呈负相关(r=-0.746,P=0.029),与SM22α表达呈正相关(r=0.971,P=0.002);在高磷p H 7.7组、高磷p H 8.0组中KCa1.1α表达与Runx2表达呈正相关(r=0.805,P=0.002),与SM22α表达呈负相关(r=-0.806,P=0.005);KCa1.1β表达与Runx2、SM22α表达不相关(r=0.414,P=0.356;r=-0.155,P=0.714)。结论碱性环境中平滑肌细胞钙激活钾通道表达参与高磷诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞的表型转化。     

酸性环境对慢性肾功能衰竭大鼠血管中膜钙化的影响及其机制

目的探讨酸性环境对慢性肾功能衰竭大鼠血管中膜钙化的影响及可能的作用机制。方法体内实验:将雄性SD大鼠随机分为对照组、肾功能衰竭组、血管钙化组和酸干预组,造模成功后采用von Kossa染色和邻甲酚酞络合酮比色法测定大鼠胸主动脉血管钙化情况。体外实验:分离培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),随机分为正常对照组、高磷组、酸干预组和抑制剂组(BMP信号通路抑制剂Noggin),采用茜素红染色和邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞钙化情况,酶联免疫吸附法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,RT-PCR和Western blot检测细胞BMP-2、Smad1、Runx2的表达情况。结果体内实验:成功制备了慢性肾功能衰竭大鼠血管钙化模型;与血管钙化组相比,酸干预组大鼠血管钙盐沉积明显减轻(P0.05)。体外实验:与正常对照组相比,高磷组细胞钙盐沉积明显增加(P0.05),ALP活性和Runx2表达均增高(P0.05);与高磷组相比,酸干预组细胞钙盐沉积减少(P0.05),ALP活性、Runx2、BMP-2和Smad1表达均降低(P0.05);与高磷组相比,抑制剂组细胞钙盐沉积和Runx2表达均降低(P0.05)。结论酸性环境可以抑制慢性肾功能衰竭大鼠血管中膜钙化的发生,其可能的机制之一是通过BMP-2信号通路抑制了VSMC成骨/成软骨样表型转化来实现的。     

影响维持性血液透析患者血磷水平的相关因素分析

目的 分析维持性血液透析患者血磷水平的相关影响因素.方法 选取维持性血液透析患者80例,年龄25～ 28岁,平均56.1岁;透龄3～80个月,平均19.13个月.观察透析前后血磷水平变化,对血磷水平的相关影响因素进行单因素分析及多因素分析.结果 患者透析后血磷水平低于透析前（P＜0.01）.透析前血磷值、肌酐下降率、透析器膜面积、有效血流速、血室容积、红细胞压积与血磷下降率密切相关.多因素分析示透析前血磷、肌酐下降率、有效血流速、透析器膜面积是血磷下降的独立因素（P均＜0.05）.结论 透析前血磷、肌酐下降率、有效血流速、透析器膜面积是影响维持性血液透析患者血磷水平下降的独立因素.     

血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C的测定方法及临床应用

肾小球滤过率（GFR）是检测肾功能的重要标志。GFR的“金标准”有菊粉和同位素标记物。菊粉经肾小球滤过，无肾小管重吸收和分泌，因此菊粉清除率可较精确检测肾小球滤过的功能。但是它的检测不方便，尤其需要静脉输注，并且菊粉的清除率的测定还受血糖的影响。同位素标记物清除率是目前临床上测定GFR可靠的方法，但价格昂贵，还需要特殊标本处理，     

彩色多普勒超声检查结合内瘘血管造影在评估动静脉内瘘中的应用

长期血管通路是维持血液透析患者的生命线,自体动静脉内瘘是透析用血管通路的第一选择[1].血管的评估和选择尤其是上肢内瘘所用头静脉的条件直接影响着内瘘的长期通畅率.临床常借助束臂试验发现条件不良的静脉,对临床帮助很大,但是,对于内瘘所用静脉的内径、有无血栓等具体问题以及内瘘术后失功的原因判断有一定的局限性.超声多普勒对血管的评估检查无创、经济、方便,造影检查是评估血管的金标准.笔者采用超声多普勒及血管造影检查评估上肢动静脉内瘘血管情况,以便指导临床采取进一步的治疗措施.     

肾癌中EphA2／EphrinA1的表达及其意义

目的 探讨EphA2／EphrinA1在肾癌中的表达及其与肾癌临床病理特征的关系。方法采用半定量逆转录一聚合酶链反应（RTPCR）和流式细胞术检测22例肾癌组织和12例非肾癌正常肾组织中EphA2、EphrinA1的基因及蛋白表达情况,并对其进行比较和相关分析;利用免疫组织化学法检测68例肾癌组织和24例正常肾组织中EphA2、EphrinA1的表达,分析与肾癌临床病理特征之间的关系。结果肾癌组织中EphA2和EphrinA1的mRAN和蛋白均明显高于正常肾组织（1．60±0．80vs0．58±0．19,1．37±0．63vs0．91±0．40;424．38±43．14VS332．44±42．83,419．44±52．13vs325．36±42．33,均P〈0．01）。但两种蛋白与其mRAN表达均不存在相关关系（r=0．050,P〉0．05;r=0．171,P〉0．05）。在肾癌组织分级不同的各组间,EphA2、EphrinA1蛋白的表达差异有统计学意义（X^2=9．575,P〈0．01）X^2=7．947,P〈0．05）,且随着等级的增加,EphA2、EphrinA1蛋白的表达量也显著增加（r=0．350,P〈0．01;r=0．344,P〈0．01）。结论EphA2和EphrinA1蛋白高表达于肾癌高分期组、高分级组和淋巴结转移组,其高表达的机制除与基因表达上调有关外,EphA2蛋白降解受阻可能是导致其升高的重要因素。     

慢性肾衰竭大鼠主动脉弹性功能与血管基质金属蛋白酶2表达及钙化间的关系

目的　探讨主动脉基质金属蛋白酶2（MMP-2）在慢性肾衰竭大鼠主动脉弹性功能变化中的作用及机制。方法　将20只大鼠随机分为正常对照组、慢性肾衰竭组、慢性肾衰竭血管钙化组。8周造模成功后测量大鼠主动脉脉搏波传导速度（PWV）,分别用逆转录-聚合酶链反应和免疫组织化学方法检测大鼠主动脉核心结合因子α1（Cbfα1）及MMP-2　mRNA和蛋白的表达。EVG染色方法检测主动脉弹性纤维的改变。结果　慢性肾衰竭血管钙化组PWV值和主动脉Cbfα1、MMP-2的mRNA及蛋白表达均高于慢性肾衰竭组及正常对照组（P<0.05）,PWV与主动脉MMP-2表达呈正相关（r＝0.754,P＝0.02）。结论　慢性肾衰竭大鼠血管弹性功能下降的可能机制之一是血管壁MMP-2表达升高导致弹性蛋白降解,同时后期的血管钙化也参与其中。