血吸虫Sj26膜锚定表达DNA疫苗的构建、表达及其免疫原性

目的构建含日本血吸虫相对分子质量为26000的抗原（Sj26GST）基因的膜锚定表达DNA疫苗，观察其免疫BALB／c小鼠后的免疫应答效应。方法用RT—PCR法，以血吸虫成虫RNA为模板，扩增获得Sj26的全长基因。利用重组PCR技术，在Sj26基因的5’端加上编码IL-2的信号肽核苷酸序列，3’端加上编码胎盘碱性磷酸酶的膜锚定序列，然后将其克隆入pIRES载体中，构建一个膜锚定型真核表达质粒pIRES-Sj26。将重组质粒转染HeLa细胞，通过RT—PCR及间接免疫荧光技术检测目的基因的表达。用构建的pIRES-Sj26疫苗肌肉注射免疫BALB／c小鼠后，以ELISA试剂盒检测小鼠血清中的总IgG抗体浓度，脾细胞培养法检测脾淋巴细胞培养上清的干扰素γ（INF-γ）含量，淋巴细胞刺激指数（SI）反映淋巴细胞增殖能力，流式细胞术检测脾细胞CD4／CD8亚群。结果经过酶切鉴定、PCR及测序证实重组质粒pIRES-Sj26构建成功，经转染HeLa细胞及免疫荧光检测证明质粒pIRES-Sj26能在体外进行表达。免疫小鼠后检测结果表明pIRES-Sj26组的血清总IgG抗体浓度、INF-γ的含量明显高于空白对照组和空载体组（均P〈0．01）；其脾SI高于空白对照组和空载体组（P〈0．05）；CD8^＋细胞百分比高于空白对照组和空载体组（均P％0．05），CD4^＋细胞百分比没有显著变化（P〉0．05）。结论成功构建日本血吸虫膜锚定表达DNA疫苗pIRES-Sj26，表达的Sj26蛋白大部分锚定在细胞膜上。pIRES—Sj26疫苗能增强BALB／c小鼠的免疫应答反应。     

大黄对危重症患者的治疗作用及机制研究

目的：观察大黄对合并呼吸衰竭和胃肠功能障碍的危重患者的治疗作用。方法：将63例入住ICU的危重症患者分为大黄治疗组和对照组,观察两组患者氧合指数变化、机械通气天数、胃肠功能障碍持续时间及C反应蛋白变化。结果：大黄治疗组氧合指标第3天开始上升（P〈0.05）,第5天明显改善（P〈0.01）;大黄治疗组机械通气时间也少于对照组（P〈0.05）;胃肠功能障碍持续时间,大黄治疗组明显少于对照组（P〈0.01）;两组C反应蛋白水平第3.5天均有下降,但大黄治疗组C反应蛋白下降幅度均高于对照组（P〈0.05）;结论：大黄可改善呼吸衰竭患者的氧合指标,缩短患者机械通气天数,能有效改善胃肠功能障碍并减弱炎症反应。     

致农民肺嗜热吸水链霉菌cDNA文库的构建及体外表达

目的构建致农民肺嗜热吸水链霉菌cDNA文库并进行EST测序,通过生物信息学软件分析EST序列同源性及生物学功能,筛选重组阳性基因克隆进行体外表达。方法利用SMART方法构建致农民肺嗜热吸水链霉菌的cDNA文库,随机挑选重组阳性克隆进行EST测序。挑选有关目的基因连接入pET-28a载体并转化大肠埃希菌BL2（DE3）,IPTG诱导体外表达。结果该文库的重组率为96．3％,是一个较高质量的文库。从文库中随即挑选的1020个重组阳性的克隆,获得978个有义序列,平均长度为495bp,含有347个单一基因,同源性比较发现部分序列与猪胸膜肺炎放线菌外膜蛋白（omla）,转铁蛋白B（TbpB）具有较高的同源性,分别为51％和42％。将重组阳性的基因克隆至载体中,IPTG诱导得到表达产物的相对分子质量分别为63×10^3和30×10^3。结论所构建的致农民肺嗜热吸水链霉菌cDNA文库包含全部EST序列,可能包含嗜热吸水链霉菌相关疾病巨大部分毒力分子,这些数据的积累将有助于农民肺特异性毒力分子的进一步筛选,同时为研究农民肺的发病机制奠定基础,如果能准确筛选出相关毒力基因,将为农民肺血清学诊断以及特异性疫苗的研发奠定基础。     

先天性甲状腺功能低下症病因分析及左甲状腺素钠治疗效果观察

目的分析先天性甲状腺功能低下症(congenital hypothyroidism,CH)的病因及左甲状腺素钠的治疗效果。方法选取2015年1月至2017年1月在我院确诊的CH患儿60例,分析患儿病因并应用左甲状腺素钠进行治疗,对比治疗前后甲状腺指标的变化情况。结果 60例CH患儿的甲状腺形态异常以甲状腺异位最为常见;与其他类型的甲状腺改变患儿比较,甲状腺不发育或发育不全、甲状腺激素合成障碍、继发感染、甲状腺或靶器官反应低下是CH的常见病因(P0.05);治疗后患儿的TSH、FT3以及FT4水平显著下降,血清ghrelin水平以及体重指数也显著下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论针对CH常见病因进行筛查,有利于对CH患儿的及时治疗,而应用左甲状腺素钠治疗可有效改善患儿甲状腺功能。     

慢性阻塞性肺疾病患者长期家庭氧疗结合康复训练的疗效与经济学分析

目的 评价长期家庭氧疗(LDOT)结合康复训练对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者的成本和效果.方法 72例需接受LDOT的COPD患者随机分为治疗组和对照组各36例,对照组予常规LDOT治疗,治疗组同时进行康复训练.2年后观察肺功能的改变,记录急性发作情况及住院费用,并运用药物经济学的成本-效果分析方法进行经济学评价.结果 对照组相比,治疗组FEV1、FVC、FEV1％有明显改善(P＜0.05或P＜0.01);平均急性加重次数、平均住院时间及医疗费用均较低(P＜0.05);以FEV1改善为疗效分析,治疗组成本-效果比明显较低.结论 LDOT结合康复训练可明显改善COPD患者肺功能,并具有明显经济学优势.     

Foxp3+CD4+调节性T细胞在急性期和慢性期大棚作业农民肺外周血中的变化及其意义

目的 观察急性期和慢性期大棚作业农民肺(简称大棚肺,greenhouse farmer's lung,GFLD)患者和大棚作业健康农民外周血中Foxp3+ CD4+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg细胞)、CD4+CD25+双阳性T细胞比例和外周血T细胞亚群的变化,探讨Foxp3+ CD4+Treg细胞在两个不同时期GFLD发病中的调节性作用.方法 ①该院呼吸内科于2006年8月～2009年6月采用分层、随机和整群抽样方法,对辽宁省沈阳市、锦州市和朝阳市3个地区进行GFLD流行病学调查,应调查5 880人,有效调查5 420人,应答率92.2％,共调查菌棚167个,家禽棚126个,花卉棚208个,蔬菜棚334个,共835个;其中沈阳市的蔬菜棚231个,蔬菜棚从业农民共855人,筛查出GFLD患者55例,排除不符合本研究纳入标准的患者13例,最终纳入本研究的GFLD患者42例,男27例,女15例,对其进行肺部HRCT检查;按照GFLD的不同分期将急性期GFLD患者20例设为急性期组、慢性期GFLD患者22例设为慢性期组(吸烟者和亚急性期GFLD患者排除),选取同期同村大棚从业健康农民17例设为对照组.②各组受试者统一于清晨8时抽取空腹静脉血2mL,严格按照试剂盒所提示的方法处理标本,处理标本后1h内应用流式细胞仪检测受试者外周血的Foxp3+ CD4+Treg细胞比例和T淋巴细胞亚群.多组间比较采用单因素方差分析,多组内两两比较采用SNK检验(方差齐)和Games-Howell法(方差不齐);Treg细胞与T细胞亚群关系用Spearman相关分析进行相关性检验.结果 ①急性期组和慢性期组外周血Foxp3+ CD4+Treg细胞比例[(0.43±0.17)％]和[(1.10±0.26)％]明显少于对照组[(1.79±0.60)％],差异有显著性(F =62.68,P＜0.01);②急性期组和慢性期组外周血CD4和CD25双阳性细胞比例[(2.70±1.04)％]和[(2.98±1.35)％]明显低于对照组[(4.72±1.65)％],与对照组相比,差异有显著性(F =11.82,P＜0.01);急性期组和慢性期组比较,外周血CD4和CD25双阳性细胞比例差异无显著性(P＞0.05);③急性期组和慢性期组外周血中CD4+CD3+％比例(19.79±10.96)％和(30.96±10.76)％较对照组(36.86±11.57)％明显减少,尤以急性期组减少为著,差异均有显著性(F=11.54,P＜0.01);急性期组和慢性期组外周血中CD8+CD3+％比例(36.65±18.71)％和(21.87±7.53)％较对照组(20.15±6.14)％明显增加,而急性期组增加的更为显著,差异有显著性(F =10.66,P＜0.01).与对照组相比,急性期组和慢性期组外周血CD4+/CD8+的比值(0.56±0.18)和(1.43±0.21)明显降低,三组比较均差异有显著性(F=214.09,P＜0.05);④相关性分析:急性期组和慢性期组外周血中CD4+/CD8+比值与其外周血中Foxp3+ CD4+Treg细胞比例和CD4和CD25双阳性细胞的比例均呈显著正相关(r值分别为0.827和0.420,均P＜0.05);急性期组和慢性期组外周血Foxp3+ CD4+Treg细胞比例和CD4+/CD8+比值与年龄之间均无相关性(r值分别为0.079和0.131,P＞0.05).结论 GFLD患者体内Foxp3+CD4+Treg细胞的下调或过度消耗可能是GFLD发病机制中的重要因素之一.     

长期家庭氧疗结合肺脏康复训练对慢性阻塞性肺疾病患者临床疗效的影响

目的评价长期家庭氧疗结合肺脏康复训练对慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者临床疗效的影响。方法72例需接受长期家庭氧疗的COPD患者按随机数字表法随机分为治疗组和对照组各36例。对照组予常规长期家庭氧疗治疗,治疗组同时进行肺脏康复训练。2年后比较肺功能、动脉血气参数和血液流变学指标;记录病情变化情况。结果两组随访1～2年,治疗组平均急性加重次数为（3．0±1．3）次,低于对照组的（4．0±1．6）次,差异有统计学意义（t=1．893,P〈0．05）。治疗组治疗2年与对照组相比,1秒钟用力呼气量（FEV,）[（1．59±0．08）L与（1．41±0．13）L,t=-3．966,P〈0．01]、用力肺活量（FVC）[（2．47±0．20）L与（2．27±0．17）L,t=-2．788,P〈0．05]、FEV,占预计值百分比（FEV1％）[（62．1±6．2）％与（53．1±5．0）％,t=-4．402,P〈0．01]和动脉血氧分压（Pa02）[（79．1±8．9）kPa与（60．0±6．6）kPa,t=-4．622,P〈0．01]显著升高;血浆黏度[（2．14±0．31）mPa·s与（2．44±0．45）mPa·s,t=1．985,P〈0．05]、全血低切黏度[（13．48±1．97）mPa·S与（14．33±1．87）mPa·s,t=2．126,P〈0．05]、全血中切黏度[（6．33±0．66）mPa·s与（7．92±0．98）mPa·s,t=4．238,P〈0．01]、全血高切黏度[（4．58±0．59）mPa·s与（5．33±0．68）mPa·s,t=3．890,P〈0．01]和红细胞沉降率[（30．63±5．76）ram／1h与（35．63±6．93）mm／1h,t=2．230,P〈0．05]显著降低。结论长期家庭氧疗结合肺脏康复训练可明显改善COPD患者肺功能、动脉血气参数和血液流变学状况。     

整合素连接激酶在非小细胞肺癌中过度表达及促进肺癌细胞的侵袭和迁移

目的:探讨整合素连接激酶（ILK）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及在侵袭和迁移中的作用和相关分子机制。方法:免疫组化法检测ILK蛋白在NSCLC患者中的表达,细胞转染、siRNA干扰、细胞划痕试验、实时定量PCR、Western blot方法探讨ILK在肺癌A549细胞中的表达及分子机制。结果:ILK蛋白在原发性NSCLC组织中过度表达30.6％（33/108）并且和TNM分期（P=0.001）、淋巴结转移（P=0.033）相关。ILK在A549细胞中过度表达并且通过下调E-cadherin,上调波形蛋白、纤维连接蛋白、Snail、Slug导致上皮-间质转化（EMT）。此外,NF-κB抑制剂BAY 11-7028和小干扰靶RNA（siRNA）NF-p65可诱导E-cadherin的表达下调。结论:ILK在原发性NSCLC组织中高表达并与TNM分期和淋巴结转移相关,其促进肺癌细胞的侵袭和迁徙机制可能是经NF-κB信号通路诱导EMT所致。