鼠巨细胞病毒干扰神经干细胞分化相关基因表达的体外研究

目的 研究鼠巨细胞病毒(MCMV)对体外培养神经干细胞(NSCS)Wnt信号通路下游分化相关靶基因表达的影响,以探讨CMV先天感染致胎脑发育异常的分子机制.方法 体外分离培养BALB/c胎鼠NSCs,用感染复数(MOI)为5、1和0.1的MCMV Smith毒株感染NSCs并进行分化培养,Western blot法检测病毒感染后NSCs Wnt信号通路下游分化相关靶基因c-myc、cyclinD1、ngn-1、ngn-2蛋白表达水平的动态变化,real-time RT-PCR检测病毒感染后NSCs Wnt信号通路关键分化基因ngn-1 mRNA水平的动态变化.结果 感染组c-myc蛋白表达量在分化培养后第0.5～5天均显著低于正常对照组(P＜0.05);感染组cyclinD1蛋白表达量在第0 5天和1天显著低于正常对照组(P＜0 05);在第2天和3天显著高于正常对照组(P＜0.05);在第4天和5天,MOI=5组显著低于其他3组(P＜0.05);感染组ngn-1蛋白表达量在第1～5天显著低于正常对照组(P＜0 05);感染组ngn1 mRNA水平在第0 5～5天均显著低于正常对照组(P＜0.05);感染组ngn-2蛋白表达先降后升,与正常对照组先升后降相反,MOI=0.1和1组峰值后移至感染后第5天,且明显低于正常对照组峰值(P＜0.05).MOI=5组未表现出明显的峰值,各感染组ngn-2表达量在感染后1 d明显低于正常对照组(P＜0 05);感染后2 d,MOI=5组明显低于正常对照组(P＜0.05);在感染后3、4、5 d,各组ngn-2表达量又明显高于正常对照组(P＜0.05).感染组和正常对照组的差异随病毒MOI的增加而更加明显.结论 MCMV感染明显抑制NSCs Wnt信号通路分化相关基因c-myc和ngn-1蛋白表达,抑制ngn-1 mRNA表达,并诱导cyclinD1和ngn-2蛋白表达紊乱,其效应随感染滴度增加而更为显著.MCMV抑制和干扰NSCs Wnt信号通路下游分化相关靶基因表达可能是其抑制NSCs增殖分化进而导致胎脑损伤的重要作用机制之一.

Abstract：

Objective To investigate the influence of murine cytomegalovirus ( MCMV) infection on the expression of downstream differentiation related target genes of Wnt signaling pathway in neural stem cells (NSCs) in vitro and explore the molecular mechanism of fetal encephalodysplasia caused by CMV infection. Methods NSCs were separated from fetal BALB/c mouse and cultured in vitro. The NSCs infected by MCMV at a MOI (multiplicity of infection) of 5, 1 and 0.1, respectively, were cultured in differentiation medium. The dynamic expression of the downstream differentiation related target genes ( c-myc, cyclinD1, ngn-1 and ngn-2) of Wnt signal pathway in NSCs were measured by Western blot. Real-time RT-PCR was employed to measure the expression levels of the key differentiation genes ngn-1 in Wnt signal pathway of NSCs post infection. Results The protein levels of c-myc in the infected groups were significantly lower than that in the normal control at 0.5-5 d (P＜0.05) ; At 0. 5 d and 1 d post-infection (p. i. ) , the protein levels of cyclinDl in the infected groups were lower than that in the normal control (P＜0.05). At 2 d and 3 d p. i. , the cyclinD1 expression in the infected groups was higher than that in the control group (P ＜ 0. 05). However, at 4 d and 5 d p. i. , the cyclinD1 levels in the group of the MOI of 5 were lower than in other three groups (F＜0.05). The expression of ngn-1 protein in the infected groups was reduced importantly compared with normal control at 1 -5 d p. i. ( P ＜ 0.05 ). The expression of ngn-1 mRNA in the infected groups was lower than that in the control group at all time points (P ＜ 0. 05 ). The expression of ngn-2 protein decreased at first and then increased, which was opposite to the normal control. The peak of ngn-2 expression in groups of the MOT of 0.1 and 1 occurred later and were significantly lower than that in the normal control (P ＜0. 05). No distinct peak was seen in the group of the MOI of 5. At 1 d p. i. , the expression of ngn-2 of all infected groups was significantly lower than that in the normal control ( P ＜ 0. 05 ). At 2 d p. i. , the expression of in the group of the MOI of 5 was still lower (P ＜ 0.05). While at 3 d, 4 d and 5 d p. i. , the protein levels in all infected groups were higher than that in the normal control (P ＜ 0. 05). The protein expression of these genes increased following the increase of MOI. Conclusion MCMV inhibited the protein expression of c-myc and ngn-1 in differentiated NSCs, repressed the mRNA expression of ngn-1 and caused the perturbed expression of cyclinDl and ngn-2 in a MOI-dependent manner. These data suggest that inhibition of or interference with the protein expression of downstream differentiation related target genes of Wnt signaling pathway in NSCs by MCMV may be one of the important mechanisms, by which proliferation and differentiation of NSCs are inhibited and thus fetal brain is impaired after MCMV infection.     

高效的毛乳头细胞分离培养方法

目的 寻求一种洁净且无须显微镜下操作的毛乳头分离方法 ,培养高纯度的毛乳头细胞.方法 中性蛋白酶消化头皮组织,将含有毛囊的皮下脂肪层剪下切碎,并用Ⅰ型胶原酶消化,之后通过多次离心的方法 获得毛乳头;对培养出的毛乳头细胞进行形态学观察,并检测毛乳头细胞的标志物alfa-SMA和碱性磷酸酶的表达情况.结果 通过新型的两步酶消化法可获得洁净的毛乳头,培养出的毛乳头细胞标志物检测阳性.结论 新型的两步酶消化法是一种高效低劳动强度的毛乳头分离方法.     

海外高层次人才引进的实践与思考

回顾医院近年来海外高层次人才引进现状,分析医院在海外高层次人才引进方面的成效和遇到的问题,为今后的人才引进工作提供借鉴.     

高张力致运动性骨骼肌损伤机制的研究：（Ⅰ）—下坡跑对骨？…

采用间歇性下坡跑运动，连观察力竭性运动后即刻、２４ｈ、４８ｈ大鼠快慢骨肌超微结构和被动状态下的材料力学特性及其变化规律。实验结果发现，大鼠经过力竭性持续下坡跑运动后，     

急性大面积脑梗死脑电图δ/α功率比值与中线结构移位的相关性研究

目的 评估急性大面积脑梗死患者定量脑电图（quantitative electroencephalography，qEEG）参数和脑
中线结构移位之间的相关性，探索反映脑中线结构移位最敏感的qEEG变化区域。
方法 纳入2017年9月-2019年5月于首都医科大学附属北京天坛医院神经重症医学科住院治疗，脑
梗死体积＞患侧大脑中动脉流域的2/3，发病7 d内完成脑电图监测的脑梗死患者。使用快速傅里
叶变换分别计算梗死侧和健侧的前、中、后区域以及半球脑电图的δ/α功率比值（delta/alpha power
ratio，DAR），并记录同期GCS评分、NIHSS评分。在脑电图监测前后4 h内完成头颅CT或MRI，测量透明
隔水平的大脑中线结构移位。统计不同区域的DAR与中线结构移位的相关性。根据中线结构移位
≥5 mm和<5 mm，≥10 mm和<10 mm分组，比较组间不同部位DAR的差异。绘制ROC曲线，确定提示中
线结构移位≥5 mm和≥10 mm的DAR界值及其敏感性和特异性，并与NIHSS评分、GCS评分对中线结构
移位预测价值比较。
结果 共29例患者、38段脑电图记录纳入分析。健侧后头部DAR与中线结构移位正相关（ρ=0.5264，
P =0.0007）。中线结构移位≥5 mm组相比<5 mm组、≥10 mm组相比<10 mm组，健侧后头部DAR均显
著升高（分别为6.48±5.70 vs 2.09±1.47，P =0.0043；10.59±6.60 vs 3.29±3.30，P =0.0008）。分别
以DAR≥2.326和≥2.569为界值，可以提示中线结构移位≥5 mm和≥10 mm（敏感度分别为72.73%和
100.00%，特异度分别为81.25%和64.52%），均优于NIHSS评分和GCS评分。
结论 健侧后头部DAR增加与大面积脑梗死中线结构移位呈正相关。qEEG可作为监测大面积脑梗
死中线结构移位的方法。     

滑动加压鹅头钉治疗老年股骨粗隆部骨折失误分析

我院自1996年6月-2002年6月应用滑动加压鹅头钉治疗股骨粗隆部骨折136例，出现髋内翻、钢板断裂、股骨外侧皮质骨折、螺钉穿破股骨头等并发症26例，现分析如下。     

肥胖患者体重显著减轻后的体型雕塑手术回顾

体重显著减轻之后的体型雕塑是国际整形外科中相对新兴的一个领域,目的是通过手术去除因体积减少而变得冗重松垂的皮肤,重塑身体的曲线.它包括改良的传统腹壁整形术及许多特殊部位的特殊整形方式在内的一系列手术,经过近半个世纪的探索和实践,已形成了相对比较程序化的治疗方案.     

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人免疫球蛋白联合蓝光治疗新生儿ABO溶血病60例临床观察

目的：对人免疫球蛋白联合蓝光治疗新生儿ABO溶血病的临床疗效进行统计及分析。方法：选取2010年1月~2014年6月我院收治的60例新生儿ABO溶血病患儿,随机分为2组,甲组30例,单纯采用静脉滴注人免疫球蛋白治疗。乙组30例,采用人免疫球蛋白联合蓝光治疗,观察血清总胆红素值动态变化及黄疸消退时间。结果：乙组患儿治疗72小时总胆红素值较甲组降低明显,黄疸消退时间明显缩短,住院天数缩短。结论：人免疫球蛋白联合蓝光治疗新生儿ABO溶血病临床效果好,短时间降低胆红素值明显。     

微针技术结合乙醇脂质体促进重组人酸性成纤维细胞生长因子透皮吸收的研究

目的:探索rhaFGF透皮给药微创有效的给药方式。方法:离体实验:亚甲蓝染色经微针处理后的离体兔皮,观察微孔的分布和排列。冰冻切片HE染色观察微孔的深度。在体实验:新西兰大白兔分别分为微针+空白脂质体组、微针+rhaFGF组、微针+rhaFGF乙醇脂质体组、皮内注射组;时间和浓度一定时,皮肤组织切片免疫荧光、免疫组织化学染色观察rhaFGF的分布,ELISA法检测皮肤组织匀浆液中rhaFGF的含量,经统计后分析不同给药方式中药物经皮渗透效果最好的一组。结果:微针处理后离体兔皮微孔排列均匀,深度可达真皮层。动物给药30min后,微针+rhaFGF组、微针+rhaFGF乙醇脂质体组及皮内注射组皮肤组织匀浆液中rhaFGF含量均高于微针+空白脂质体组,差异均有统计学意义(P<0.05);微针+rhaFGF乙醇脂质体组高于微针+rhaFGF组皮肤组织匀浆液中rhaFGF含量,差异有统计学意义(P<0.05);微针+rhaFGF乙醇脂质体组及皮内注射组组织匀浆液中rhaFGF含量无明显差别(P>0.05)。rhaFGF免疫荧光、免疫组化染色显示,微针+rhaFGF乙醇脂质体组真皮组织中有大量rhaFGF存在,且分布均匀;结论:本文的研究结果表明微针技术结合乙醇脂质体能取得较高的rhaFGF透皮效果,使rhaFGF外用给药促进皮肤增殖,加速皮瓣扩张成为可能。此方法简单易行,同时也为其它蛋白、多肽类大分子药物的经皮给药研究提供了新思路。