噬菌体展示技术在感染性疾病诊断上的应用

噬菌体展示技术是一种将外源肽或蛋白基因与噬菌体特定蛋白基因在其表面进行融合表达的技术,该技术实现了表型与基因型的统一,具有广泛的应用前景。本文综述了噬菌体展示技术的基本原理及其在感染性疾病诊断上的应用。     

含人甲胎蛋白mRNA部分序列的耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达

原发性肝癌为一种严重威胁人们健康的恶性肿瘤。甲胎蛋白(AFP)mRNA在监测原发性肝癌的肝外转移以及术后复发方面是一个很好的标志物，也可用于肝癌治疗效果的评价。通常AFPmRNA的检测方法为逆转录巢式聚合酶链反应(RTPCR)法进行定性检测，或利用凝胶电泳扫描的方法进行半定量检测。近来随着实时荧光PCR技术的发展使得准确定量检测AFPmRNA成为可能。     

乙型肝炎病毒DNA聚合酶链反应测定室间质量评价

乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测是国内开展最早也最为普遍的临床聚合酶链反应(PCR)检验项目，其定性、定量检测分别对处于HBV感染“窗口期”的患者确诊、乙型肝炎患者抗病毒治疗的动态观察，具有重要的应用价值。卫生部临床检验中心(以下简称部中心)从1998年开始对全国的HBV DNA临床PCR测定进行室间质量评价，近年PCR测定技术的临床应用发展颇快，使用的方法主要有实时荧光PCR和PCR-ELISA两种方法，临床测定正在进入规范化的轨道。     

建立定性免疫测定中假阳性监测的室内质控方法

目的 建立利用实验室日常检测数据进行定性免疫测定假阳性监测的室内质控方法。方法 测定数据为正态分布，采用半Levey—Jennings质控图法，即以实验室日常不少于20次检测的阳数率为基础，计算阳性率的均值（x^-）和标准差（s），绘制质控图，以1,2s为失控规则。如为非正态分布，则采用直接概率计算法。结果 半Levey—Jennings质控图法和直接概率计算法均适用于定性免疫测定假阳性统计室内质控。结论 为临床免疫常规检测提供了具有可操作性的假阳性统计室内质控方法。     

沙眼衣原体聚合酶链反应测定质控物的构建及其应用研究

目的 研制能够模拟真实临床样本且无生物传染危险性的沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)PCR检测质摔物,并进行稳定性研究.方法 在充分查阅文献的基础上,明确国内外已有文献报道的CT:PCR检测的靶序列,选择最普遍应用的CT质粒序列,采用重叠(overlap)PCR、分子克隆等技术构建含有所选择的常用检测目的 CT质粒序列的重组真核表达载体,即pTARGETTM-CT 质粒.然后,将载体以脂质体转染的方式转染入宫颈上皮细胞(HTB-SiHa细胞)中,收集细胞,经含20%小牛血清的细胞培养液稀释,即成为能模拟CT检测临床样本的细胞质控物.最后观察得到的质控物对目前国内常用商品试剂盒的适用性及在4℃、37℃及室温条件下的稳定性.结果 成功构建了含CT质粒(178-610)、(1219-1993)、(2471-3260)、(5239-5864)、(6722-7499)等5个片段的重组真核表达载体,并转入HTB-SiHa细胞中,得到了可模拟临床样本的CT PCR检测的质控物.采用深圳匹基生物工程有限公司、中山大学达安基因股份有限公司商品CT PCR检测试剂盒对转染后样本进行检测,得到阳性结果;定量为3.21×108拷贝/ml;倍比稀释后较高浓度样本检测结果呈梯度下降、10倍稀释循环阈值相差约3.3;对不同浓度稀释后在4℃、37℃及室温条件下保存1个月的样本的检测结果进行随机区组的两因素方差分析后发现,在各温度下保存的样本经检测后的结果问差异无统计学意义,所构建的质控样本至少可以稳定保存1个月.结论 利用重叠PCR与双酶切的方法,建立了一种将多间隔片段连接并构建入同一载体的简便有效的方法.成功地得到了可模拟临床标本的CT PCR检测质控物.     

我国OBI献血者中乙型肝炎病毒BCP/前C区及C区的分子特征

目的获得我国隐匿性乙型肝炎病毒感染(occult HBV infection, OBI)人群中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)基本核心启动子区(basic core promoter, BCP)、前C区和C区序列特征, 为进一步阐明该区域与OBI的关系奠定基础。方法收集2016—2018年全国18个省、自治区和直辖市的43家血站实验室, 经日常检测后HBV DNA阳性的血浆样本。经实验室确认后HBsAg阳性样本和OBI样本各入组不少于200例, 针对HBV BCP/前C区、C区和S区进行半巢式或巢式PCR和Sanger测序及序列分析。结果完成测序417例样本, 其中HBsAg阳性样本216例和OBI阳性201例, 均为基因型B和C。HBsAg阳性组该区域的突变频率明显高于OBI组。在B基因型中仅发现1个OBI高频突变A1896G, 在C基因型中发现T1762A/A1764G、T1803A/G、A1986G、T1866A(D22E)等OBI高频突变。在C基因型中发现的前C区ε-反式作用元件区域(1 847-1 907 nt)突变G1888T可能会改变前基因组R...