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检测病原体感染的定性免疫测定方法根据其检测目的物可分为两类,第一类直接检测病原体的抗原,可以直接反映病原体感染;第二类检测机体对病原体的免疫应答所产生的抗体等替代性标志物,可以间接反映病原体感染[1].检测感染性疾病的抗原和抗体有多重作用,包括健康人群中病原携带者与亚临床感染患者的筛查、疾病进程的监视、流行病学研究、治疗有效性的评价及对药物耐受的监测等.定性检测通常只提供两种反应结果(如阳性/阴性、是/否、有反应性/无反应性等),检测结果是否准确常常会影响临床医师对疾病的诊断及是否能尽早采取适当的治疗措施.因此,定性免疫测定方法必须准确、简便,并且能够及时提供检测结果[2]. 相似文献
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目的 研制乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶链反应(PCR)测定室间质评用血清盘。方法 从血站献血员收集HBVDNA阴、阳性血浆。经处理后,组成血甭盘,血清盘由22份样本组成。包括5份强阳性、2份弱阳性、5份阴性及2个强阳性的10倍稀释系列(各5份)。并在全国91个实验室进行应用。结果 稳定性试验表明,在室温、4℃及37℃下贮存至少分别可稳定5天、7天和3天,反复冻融至6次,HBVDNA量无明显变化。使用该血清盘对全国HBVDNAPCR测定的室间质评表明,对5份阴性样本测定的假阳性率在1.1%-9.9%之间。对强阳性样本测定假阴性率在6.6%-14.3%之间;对2份弱阳性样本测定的假阴性率分别为47.3%和41.8%。结论 目前全国HBVDNA PCR临床测定大部分实验室存在有不同程度的假阳性和/或阴性问题,有必要建立全国室间质评网络以提高检测质量和水平。 相似文献
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王露楠 《国际检验医学杂志》2000,(4)
本文综述了离心及分离血清时间、抗凝剂、贮存温度及样本反复冻融对HCVMRNA测定的影响。表明在临床制备和贮存用于 HCV RNA PCR测定血样本时,应尽量用 EDTA抗凝管,6h内分离血桨;如不用抗凝剂,则在血凝集后立即离心,2h内分离血清;样本长期贮存应在.80℃,避免反复冻融。 相似文献
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两种定量测定丙型肝炎病毒核酸的聚合酶链反应方法比较 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:观察荧光定量聚合酶链反应(PCR)PE5700测定丙型肝炎病毒RNA的准确性。方法:所用临床评价血清盘由36份血清组成,其中包括1个5倍倍比稀释系列(7份)、9份阴性血清和20份阳性血清。使用临床评价血清盘比较2种测定方法的重复性、线性和临床样本符合情况。结果:实时荧光定量方法和全自动PCR-ELISA内标法检测系统的线性回归系数分别为0.9732和0.9995。全自动PCR酶联免疫附(ELISA)内标法检测系统不同含量的样本批内变异系数(log10)均比实时荧光定量方法低。临床样本的检测实时荧光定量方法与全自动PCR-ELISA内标法检测系统的相关系数为0.845,结论:实时荧光定量方法具有良好的线性和重复性,同时与全自动PCR-ELISA内标法检测系统有良好的相关性。 相似文献
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丙型肝炎病毒抗体酶联免疫吸附试验阳性判断值在献血员血液筛检中的意义 总被引:3,自引:1,他引:3
目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)测定阳性判断值(Cut-off)“灰区”在献血员血液筛检中的应用价值。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测了503份抗-HCV ELISA测定为阴性的献血员血清(浆)标本的HCV RNA。如HCV RNA检测为阳性,则使用重组免疫印迹(RIBA)方法进一步检测抗HCV。结果在503份抗-HCV ELISA阴性献血员血清(浆)标本中,发现有5份HCV RNA阳性,其中2份标本抗HCV ELISA测定S/CO比值小于0.5,RIBA结果均为阴性。另外3份抗HCV阴性(ELISA检测的S/CO值在0.8-0.9之间)但HCV RNA为阳性的献血员血标本,进一步进行RIBA检测,发现其中2份为抗核心区(C22)单独阳性,另外1份为抗NS3单独阳性。阳性标本HCV RNA的含量测定均约为10^4拷贝/ml。结论为尽可能减少输血后HCV感染的发生,有必要将抗-HCV ELISA测定的Cut-off值下移20%,因为S/CO比值接近Cut-off值的血液有很大可能为HCV感染者。 相似文献
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抗核抗体谱检测的室间质量评价 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 评价全国临床实验室检测抗核抗体谱的能力。方法 每年进行2次室间质量评价,每次发放5支质评样本;要求各临床实验室在规定时间内检测,并回报检测结果、所用检测方法、仪器和试剂资料;卫生部临床检验中心对各实验室的结果进行统计分析,最后将结果反馈给各实验室。结果70%以上的实验室采用间接免疫荧光法测定抗核抗体谱,2003-2005年的阳性符合率分别为94.1%、93.0%和98.6%。对单一核型,包括均质型、颗粒型等检测结果符合率明显高于混合核型的检测。阳性样本,各实验室回报的滴度存在很大差异。可提取性核抗原抗体谱的检测方法主要有酶联免疫吸附法、间接免疫荧光法和免疫印迹法,采用免疫印迹法的实验室占90%以上,检测结果符合率存在明显差异。抗双链DNA(抗dsDNA)抗体检测整体成绩均接近或超过90%。结论 抗核抗体的检测还有待于标准化。通过抗核抗体谱临床检验实验室间质量评价,可及时发现参评实验室检测中存在的问题,促进实验室不断提高检测质量。 相似文献
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耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达 总被引:7,自引:5,他引:7
目的:为耐核糖核酸酶(RNase)的RNA标准品和质控品的表达制备提供1个通用载体平台。方法:将MS2噬菌体基因组中成熟酶蛋白和包膜蛋白基因编码序列的1.7kb cDNA目的片段,用Hind Ⅲ和EcoR I酶切后,用于相同内切酶酶切的表达载体质粒PET28b中,并在T4 DNA连接酶的存在下连接,构建一新的表达载体pI NCCL,再转化BL21-DE3 E.Coli进行原核表达。结果:成功构建出新的表达载体pI NCCL,经原核表达为耐RNase的病毒样颗粒。结论:本研究得到的pI NCCL表达载体及原核表达系统,可作为1个耐RNase的RNA标准品与质控品的构建和制备表达通用载体平台,以促进有关标准品和质控品的研究。 相似文献
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目的:通过改变MS2噬菌体衣壳蛋白RNA包装位点的亲和力,构建并表达含轮状病毒NSP3基因耐RNA酶的病毒样颗粒,并探讨其稳定性。方法:设计含PvuⅠ和KpnⅠ酶切位点的上、下游引物,扩增1 049 bp轮状病毒NSP3基因片段,并将包装位点-5位的U替换为C,提高与MS2衣壳蛋白作用的亲和力。用PvuⅠ和KpnⅠ双酶切扩增的目的基因和pACYC-MS2表达载体,连接获得重组载体pACYC-MS2-NSP3,转化TOP10感受态细胞后用PCR验证阳性克隆并测序。阳性克隆转化BL21(DE3)细胞后表达含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒,用超声破碎、纯化获得表达产物,鉴定并讨论其稳定性。结果:成功构建pACYC-MS2-NSP3表达载体并获得了含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒,其可耐受DNA酶和RNA酶的降解,并在-20 ℃、4 ℃、室温25 ℃下10 d保持稳定。 结论:通过改变MS2噬菌体衣壳蛋白RNA包装位点的亲和力,可以成功构建耐RNA酶的病毒样颗粒,本研究所构建的病毒样颗粒具有耐RNA酶的特性和良好的稳定性,为轮状病毒实时荧光定量逆转录 PCR的标准品和质控品的研究提供了一个可行的方法。 相似文献
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乙型肝炎病毒DNA聚合酶链反应测定室间质量评价 总被引:1,自引:1,他引:1
乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测是国内开展最早也最为普遍的临床聚合酶链反应(PCR)检验项目,其定性、定量检测分别对处于HBV感染“窗口期”的患者确诊、乙型肝炎患者抗病毒治疗的动态观察,具有重要的应用价值。卫生部临床检验中心(以下简称部中心)从1998年开始对全国的HBV DNA临床PCR测定进行室间质量评价,近年PCR测定技术的临床应用发展颇快,使用的方法主要有实时荧光PCR和PCR-ELISA两种方法,临床测定正在进入规范化的轨道。 相似文献