两种化学发光法试剂用于血液筛查HBsAg的检测性能评价

目的对化学发光法(chemiluminescent immune assay, CLIA)和电化学发光法(electrochemiluminescence immune assay, ECLIA)用于血液筛查HBsAg的检测性能进行评价。方法依照《血站技术操作规程(2015年)》,对不同血液检测方法的性能进行验证。使用1家化学发光分析仪和1家电化学发光分析仪对卫生部临检中心提供的HBsAg血清盘(包括献血者标本组、质控与突变标本组)进行检测,分析不同检测平台用于检测献血者标本的灵敏度、特异性、正确率、阴性预期值、阳性预期值,评估质控标本的精密度、不同血清型标本和突变株的检出能力,并与2种HBsAg ELISA试剂(国产A试剂、进口B试剂)的检测结果进行比较。结果 1)4种试剂检测灵敏度由高到低为ECLIA(100%)>B(95.74%)>A(89.60%)>CLIA(58.34%)。2)4种试剂检测特异性由高到低为CLIA(100%)>ECLIA(99.47%)>B(98.40%)>A(94.15%)。3)4种试剂检测正确率由高到低为ECLIA(99.84%)>B(96.56%)>A(91.00%)>CLIA(71.85%)。4) ECLIA批内CV值为1.27%—3.44%,批间为5.57%和7.08%;CLIA批内CV值为6.32%—14.62%,批间为6.75%和16.06%。5)对HBsAg不同血清型(ad和ay)梯度稀释标本的检测,ECLIA检出下限为0.05 IU/mL,CLIA结果全部漏检。6)20个重组突变株的梯度稀释标本,B全部检出,A检出16个,ECLIA检出12个,CLIA检出9个。7)32个天然突变梯度稀释标本,ECLIA和B可以全部检出32个,A可以检出25个,CLIA均未能检出。结论本研究所测试的ECLIA系统检测HBsAg具有比2种ELISA试剂灵敏度高、特异性强、准确率高的特点,适用于血站筛查HBsAg项目;本研究所测试的CLIA系统检测HBsAg的灵敏度与2种ELISA法存在显著差异(P<0.01),在对献血者真阳性血清和质控血清、HBsAg突变标本评价中表现为检测存在假阴性风险,用于血站筛查HBsAg项目还有待进一步研究。     

2006-2011年中国临床实验室检测自身抗体的室间质量评价

目的 评价我国临床实验室检测自身抗体的能力.方法 每年进行2次室间质量评价,每次发放5支质评样本;要求各临床实验室在规定时间内检测,并回报抗核抗体(ANA)定性结果、核型、滴度、抗可提取核抗原(ENA)抗体和抗dsDNA抗体定性结果,同时计算各项结果的符合率.结果 2006-2011年期间采用IIF检测ANA的实验室比例从77.6％ (149/192)增长到82.2％( 342/416),采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测ANA的实验室比例在14.5％ (53/365)至16.0％( 52/326)之间.用IIF法检测ANA阳性符合率在2006-2011年期间均在98％以上,ELISA检测的阳性符合率均在90％以上,IIF法每年的阳性符合率均高于ELISA.ANA核型仅为颗粒型的质评样本,除0613和0624号样本外,核型回报结果正确率均＞90％.ANA核型仅为均质型的样本,核型回报结果正确率均≥95％.ANA核型为着丝点型的样本,2007年核型回报正确率仅为88.5％( 161/182)、79.0％ (147/186),2010年提高到98.4％ (299/304),核型回报正确率呈明显上升趋势.各阳性样本中,报告滴度代码结果为中位数的实验室比例最低的仅为36％ (94/261),最高的为85.5％( 224/262).抗ENA抗体总符合率均＞90％,dsDNA抗体总符合率均＞85％.结论 IIF法是我国临床实验室进行ANA筛查的主要方法,其次为ELISA,2种方法对ANA定性回报的结果均较为理想.临床实验室对单一着丝点核型的判断有了很大提高,但是对滴度结果的报告尚不理想.ANA检测还有待标准化.     

6家血站实验室抗-HCV ELISA检测系统性能评价

目的评价使用相同检测试剂的6家血站实验室抗-HCV ELISA检测系统性能,探索实验室间检测能力比对的新方法、新维度。方法由卫生部临检中心组织6家血站实验室使用同一种抗-HCV ELISA试剂对同一组标本(1053例)进行检测。1)一致性评价:对各实验室初筛检测结果进行分析,使用结果一致性百分率评价实验室间检测结果的一致性。2)灵敏度和特异性评价:对各实验室初筛检测结果和最终判定结果进行分析,比较各实验室抗-HCV ELISA检测系统的灵敏度和特异性。3)准确性评价:使用ROC曲线下面积(AUC)评价各实验室抗-HCV ELISA检测系统的准确性。4)真阳性标本检测能力评价:使用标准差指数(SDI)和S/CO检测值联合分析各实验室对真阳性标本检测能力。5)真阴性标本检测能力评价:使用雷达图分析各实验室对真阴性标本检测能力。结果 1)6家实验室抗-HCV结果一致性百分率为83.84%,实验室间一致性好(kappa值为0.751~0.983)。2)6家实验室检测灵敏度由高到低为F(98.25%)A(97.81%)B/C/D(97.37%)E(89.47%);6家实验室检测特异性由高到低为B/C(97.88%)F(96.16%)D(93.41%)E(93.12%)A(90.61%)。3)6家实验室准确度均较高(AUC为0.929 1~0.993 5),但E实验室准确度低于其他5家实验室、差异有统计学意义(χ2=29.80、P0.01)。4)196例真阳性标本(6家实验室检测均为反应性)SDI分析显示A、E2家实验室呈现负偏离状态;34例真阳性标本(6家实验室检测结果不一致)S/CO检测值分析显示E实验室真阳性标本检测能力较差。5)623例真阴性标本(6家实验室检测均为非反应性)雷达图分析显示A、E2家实验室S/CO值分布跨度较大,精密度有待进一步提高。结论 1)6家血站实验室采用同一厂商试剂对同一组标本进行抗-HCV检测,不同实验室表现的检测准确性和精密性不尽相同,各实验室应采用科学的方法对本实验室检测系统的性能进行定期评估。2)不同形式的实验室间结果比对和检测结果质量评价对提升实验室业务运行能力具有推动作用。     

重庆地区近2年血液核酸集中化检测结果分析

目的探讨重庆地区血液核酸集中化检测的意义。方法对2016年1月—2017年6月,本市血液中心及重庆区县14家血站/库的血液标本,采用核酸检测试剂与酶联免疫法(ELISA)试剂平行检测。对联检反应性标本进行鉴别试验。对重庆市血液中心及区县血站/库的的核酸检测的联检反应性率、单反应性率、鉴别率进行分析,并对疑似HIV"窗口期"献血者做追踪和随访。结果共检测中心标本20 9328例,区县标本11 0588例。中心联检反应性率、单反应性率、鉴别反应性率分别为0.72%(1497/20 9328)、0.34%(707/20 9328)、30.98%(219/707),区县分别为1.1%(1228/11 0588)、0.61%(671/11 0588)、36.81%(247/671)。对核酸联检单反应性的标本做鉴别试验,共检出HBV反应性标本中心212例,区县血站/库246例;HIV反应性:中心检出3例,区县血站/库检出1例,并对这4例献血者进行了追踪随访,3例转阳确证为HIV"窗口期"。而HCV均未被检出。结论重庆市血液中心及辖区内各区县核酸检测结果存在区域性差异。核酸检测敏感性高,可检测出标本中及其微量的核酸,显著缩短病毒"窗口期",有效降低了经血传播传染病的危险。     

梅毒螺旋体感染不同血清学诊断方法的临床评价

目的：使用酶联免疫吸附测试验（ELISA）方法替代快速血浆反应素试验（RPR）和甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）方法确定诊断梅毒螺旋体感染的必要性。方法：使用目前国内最为常用的梅毒螺旋体感染诊断RPR和TRUST试剂及ELISA试剂检测阴阳性献血员标本，同时与梅毒螺旋体明胶凝剂试验（TPPA）的检测结果进行比较，从而得到各种试剂的检测假阴性和假阳性率。结果：在对30份阳性和20份阴性标本的检测中，所用一种RPR试剂和两种TRUST试剂的假阳性率，分别为15．0％（3／20）、10．0％（2／20）和10．0％（2／20），假阴性率分别为30．0％（9／30）、23．3％（7／30）和43．3％（13／30）；而两种ELISA试剂均无假阳性，有一家试剂出现1例假阴性。ELISA试剂的假阳性和假阴性率均明显低于RPR和TRUST试剂（P＜0．01）。结论：在梅毒螺旋体抗体的临床检测中，有必要使用ELISA方法替代RPR和TRUST方法。     

内含人前列腺特异性抗原mRNA的耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达

目的 构建原核表达系统，表达内含人前列腺特异性抗原（prostate specific antigen，PSA）mRNA部分序列的病毒样颗粒，该病毒样颗粒因噬菌体蛋白包被重组RNA而使其包裹的RNA具有耐核糖核酸酶（RNase）的特性。方法 采用聚合酶链反应扩增人前列腺特异性抗原cDNA的部分保守区域，进行TA克隆后用限制性内切酶HindⅢ酶切获得所需要的目的片段，与用HindⅢ酶切的表达载体pNCCL1相连接，构建一新的表达载体pNCCL1-PSA，再转化E．Coil BL21-DE3，用IPTG诱导表达噬菌体MS2包膜蛋白，包膜蛋白可进行自我组装成病毒样颗粒并将PSA mRNA部分序列包裹到病毒样颗粒内。结果 成功构建得到了新的表达载体pNCCL1-PSA，经原核表达得到耐RNase的内含PSA mRNA部分RNA序列的病毒样颗粒。结论 本研究得到的表达载体pNCCL1-PSA及原核表达系统，可以作为以后构建和制备耐RNase的PSA mRNA标准品和质控品的的平台，为实验室PSA mRNA的检测提供新的标准品及质控品。     

TOPSIS法评价全国15家血液筛查实验室资源配置情况

目的分析全国具有代表性的血站血液筛查实验室(简称血站实验室)的资源配置情况,综合比较评价实验室间资源配置的差异,为改善实验室管理提供依据。方法设计《血站血液筛查实验室基本情况调查问卷》,对15家不同规模血站实验室的人员、设备和基础设施配备3个方面进行调查,使用TOPSIS法进行综合评价。结果血站实验室A的资源配置评价最高,相对接近度Ci为0.723,血站实验室E的资源评价最低,Ci为0.246。规模较大实验室的Ci为0.660,中小规模实验室的Ci为0.340。结论各个血站实验室人员、设备和基础设施配备水平有较大的差异,规模较大实验室的整体资源配备情况要优于中小规模实验室,应合理调配人力资源、及时更新设备、加强实验室基础建设,以保障血液检测的质量。     

我国血液筛查实验室HBsAg ELISA检测系统性能评估与室间质评结果的关联分析

目的评价我国血液筛查实验室所使用的不同HBsAg ELISA检测系统性能。方法由卫生部临床检验中心(临检中心)于2015年组织13家采供血机构血液筛查实验室(a—m)使用7种HBsAg ELISA试剂(A—G)对1 473(人)份标本检测的结果(多中心评估),与同期临检中心组织的全国第3次采供血机构血液检验室间质量评价计划中的HBsAg项目结果(室间质评)做横向比较和分析。结果 1)13家实验室的7种HBsAg ELISA试剂灵敏度为84.82%(486/573)—95.85%(554/578),特异性为93.20%(617/662)—99.04%(828/836),其中6种试剂的准确率93%,D试剂相对较差,仅为89.91%(617/693)。2)7种HBsAg ELISA试剂室间质量评价结果均为正确率99%,多中心评估中表现良好的A、C、E 3种试剂在室间质评中的正确率也为100%。3)13家实验室所有标本的准确度较好(AUC为0.929—0.997);而真阳性标本的检出正确率参差不齐:m实验室准确性最低仅为78.53%(450/573),j实验室自身错误率最低为0.52%(3/572),E试剂错误率最低为2.60%—3.63%,B、F和G试剂的错误率相对较高,分别为11.11%—13.37%、12.06%—13.11%和13.44%—17.10%。4)c实验室在试剂评估和室间质评中均表现为检测存在假阴性风险,有待进一步提高。结论多中心评估及室间质评结果显示13家实验室HBsAg检测正确率87%,7种HBsAg ELISA试剂检测的准确率89%;但有1个实验室、3种试剂的检测性能存在一定的问题。     

定性免疫测定的试剂性能评价方法

检测病原体感染的定性免疫测定方法根据其检测目的物可分为两类,第一类直接检测病原体的抗原,可以直接反映病原体感染;第二类检测机体对病原体的免疫应答所产生的抗体等替代性标志物,可以间接反映病原体感染[1].检测感染性疾病的抗原和抗体有多重作用,包括健康人群中病原携带者与亚临床感染患者的筛查、疾病进程的监视、流行病学研究、治疗有效性的评价及对药物耐受的监测等.定性检测通常只提供两种反应结果(如阳性/阴性、是/否、有反应性/无反应性等),检测结果是否准确常常会影响临床医师对疾病的诊断及是否能尽早采取适当的治疗措施.因此,定性免疫测定方法必须准确、简便,并且能够及时提供检测结果[2].     

IgG抗体亲和力指数在HCMV感染的SLE患者中的临床评估

目的用外周血人巨细胞病毒(HCMV)IgG抗体亲和力指数判断人巨细胞病毒在系统性红斑狼疮患者中感染的情况。方法间接酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)检测122例系统性红斑狼疮患者,85例非系统性红斑狼疮的自身免疫病患者,137例正常人血清中人巨细胞病毒特异性抗体IgM和IgG,并对人巨细胞病毒IgG阳性的血清样本进行IgG抗体亲和力指数(a-vidity index,AI)的检测。结果系统性红斑狼疮患者人巨细胞病毒IgM抗体阳性率为11.48%;IgG抗体阳性率95.08%,其中低亲和力样本占8.62%。非系统性红斑狼疮自身免疫病患者血清中IgM抗体阳性率为1.18%;人巨细胞病毒IgG抗体阳性率95.29%且均为高亲和力抗体。而在137例正常样本中未检测到人巨细胞病毒IgM抗体阳性的样本;IgG抗体阳性率93.43%全部为高亲和力抗体。SLE患者相比非系统性红斑狼疮的自身免疫患者和正常人,其人巨细胞病毒IgM阳性率显著升高,且人巨细胞病毒IgG抗体低亲和力样本在IgG阳性样本中的比例也显著升高。因此,系统性红斑狼疮中的人巨细胞病毒初次感染后期[IgM(-)/IgG(+);AI<45%](10例)和再次或复发感染[IgM(+)/IgG(+);AI>55%](14例)的比例比非系统性红斑狼疮的自身免疫病患者和正常人都显著增多。结论综合HCMV IgG亲和力指数与HCMV IgM的检查结果发现,SLE患者相比正常人或非SLE自身免疫患者,表现出显著上升的原发性HCMV活化感染率与继发性HCMV活化感染率。因此,SLE的罹患与HC-MV感染有密切关联。