人巨细胞病毒pp65对系统性红斑狼疮诱导作用的研究

目的 探究人巨细胞病毒(HCMV) pp65是否可以诱发正常C57BL/6小鼠产生系统性红斑狼疮(SLE)相关实验室诊断指标的变化.方法 构建HCMV pp65原核表达质粒与真核表达质粒,然后进行HCMV pp65原核蛋白表达与纯化.间接法ELISA检测anti-pp65 IgG、dsDNA、抗核抗体(ANA),竞争法ELISA检测血浆中IL-1b、IL-6、TNF-α浓度.结果 成功获得HCMV pp65原核表达蛋白和真核表达质粒,免疫小鼠后血清中anti-pp65、抗dsDNA抗体、ANA、IL-6均有明显上升趋势.结论 HCMVpp65可以使C57BL/6小鼠SLE相关检测指标发生明显改变,这一结果有助于进一步研究自身免疫病的发病机制与影响因素.     

用于HCV RNA逆转录聚合酶链反应测定的血清(浆)样本的质量控制

目的 确定用于丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ测定血清（浆）样本的最佳收集贮存条件。方法 采集ＨＣＶ ＲＮＡ阳性的血样按设定的不同条件处理,用荣光定量ＰＣＲ试剂测定ＨＣＶ ＲＮＡ。结果 血凝集后２小时内离心分离血清ＨＣＶ ＲＮＡ含量无明显改变（降低１０．４２％）;４小时变化明显（降低４０．４９％）。采用抗凝剂的血浆管ＨＣＶ ＲＮＡ含量显著高于血清管（枸橼酸钠抗凝管高出４０．９％,ＥＤＴＡ抗凝管高出５３     

酶联免疫法检测弓形体感染初探

目的酶联免疫法正确有效诊断弓形体急性感染。方法对4 500例无偿献血者血浆样本分别检测弓形体IgM抗体、IgG抗体,对IgM抗体阳性和IgM抗体阴性且IgG抗体阳性的样本检测其IgG抗体亲合力。结果 4 500例样本中,弓形体IgM抗体阳性率为0.51%,IgG抗体阳性率为1.53%。其中22例为IgM（＋）IgG（＋）,1例为IgM（＋）IgG（-）,47例为IgM（-）IgG（＋）,4 430例为IgM（-）IgG（-）。在对69例弓形体IgG（＋）的样本进行IgG亲合力检测时,IgM（＋）IgG（＋）的22例样本中2例为IgG中等亲合力抗体,3例为IgG高亲合力抗体,但这5例样本的IgM抗体均为可疑,可能由于IgM抗体常年保持低水平,并非正处于弓形体急性感染期;IgG（＋）IgM（-）的47例样本中,3例为IgG低亲合力抗体,可能由于其中的弓形体IgM抗体在急性感染期后期,IgM抗体滴度太低无法检测到,仍可判定为处于急性感染期。最终确定弓形体急性感染的样本为20例,感染率0.44%。结论可同时检测弓形体IgM抗体和弓形体IgG抗体亲合力来诊断弓形体感染,IgM抗体阳性或IgG抗体低亲合力的样本均可判定为弓形体急性感染。     

新型冠状病毒核酸混采对检测结果的影响

目的:评估新型冠状病毒（2019-nCoV）样本混采对提取、扩增步骤的影响。方法:取10只阴性咽拭子储存在6 ml病毒保存液中,充分混匀后1∶2、1∶10稀释,加入灭活2019-nCoV病毒培养液,以模拟10混1、5混1和单人份检测。使用a、b、c 3种提取方式和体系不同的核酸提取试剂及A~E 5种模板上样量和检测灵敏...     

miR-146a在自身免疫性疾病发病机制及临床诊疗研究中的进展

微小mRNA( miR)是一类长约22个核苷酸的非编码RNA,通过作用于相应mRNA在转录后水平调节基因表达,在炎性反应和自身免疫病中发挥重要作用.近期关于miR-146a在自身免疫性疾病中发挥作用的研究备受关注.在此对miR-146a与几种常见自身免疫性疾病发病机制的相关性及其潜在临床应用价值进行阐述.     

5种ELISA试剂检测抗-HCV结果的差异分析

目的分析5种酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测抗-HCV结果的差异,为血站血液筛查试剂的选择提供依据。方法分析国家卫计委临床检验中心2015年多中心评估项目丙型肝炎病毒(HCV)标志物检测的数据,选取5种试剂进行评估,计算每种试剂的灵敏度、特异性、符合率、Youden指数、准确度和漏检率,比较试剂的检测性能。结果 1 074份标本经检测,确证结果阳性242份,阴性832份。5个实验室各自使用的2种试剂检测结果一致性较高。A、B、C、D实验室2种试剂的检测结果均有统计学差异(P0.05),E实验室采用的试剂5和试剂4的检测结果无统计学差异(P0.05)。B、C、D、E实验室各自采用的2种试剂初筛反应性标本的准确度无统计学差异(P0.05),A实验室采用的试剂2的准确度优于试剂1(P0.05)。A、B、C、E实验室采用的2种试剂初筛非反应性标本的漏检率无统计学差异(P0.05),D实验室采用的试剂5的漏检率低于试剂2(P0.05)。结论 5个实验室各自使用的2种试剂检测结果一致性较高。综合灵敏度、特异性、符合率、Youden指数、准确度和漏检率得知,A实验室试剂2优于试剂1、B实验室试剂3优于试剂1、C实验室试剂3优于试剂4、D实验室试剂5优于试剂2、E实验室试剂5优于试剂4。     

综合评价法在血站血液检测实验室的应用

正在2006年《血站管理办法》、《血站质量管理规范》、《血站实验室质量管理规范》(以下简称一法两规)颁布实施后的头5年,国家卫生行政主管部门开展了以推进一法两规为目的的对全国血站现场督导检查(以下简称督导)。督导采用审核表和评分的方式,评价血站实验室质量体系运行的符合性、有效性,这种方式在贯彻实施一法两规、建立质量管理体系的初期,对于血站实验室全面认识质量管理理念、学习将过程方     

耐核糖核酸酶内含长片段嵌合体RNA的病毒样颗粒的构建和表达

目的 通过改变原噬菌体ms2包膜蛋白RNA包装位点(19碱基的茎环结构)的数量及亲和力,构建新的原核表达系统,探讨表达内含长片段(达到理论上的1 900 bp)RNA的耐RNase病毒样颗粒的可能性.方法 首先设计含Hind Ⅲ和Not Ⅰ酶切位点的引物,扩增ms2包膜蛋白的编码成熟酶蛋白和衣壳蛋白的1 700 bp序列,并将原来的19mer的包装位点序列改变为C-5变异体(19 bp stem-loop结构中-5位的尿嘧啶改变为胞嘧啶),Hind Ⅲ和Not Ⅰ酶切后,与用同样酶切的表达载体pET-28(b)相连接,得到重组载体pET-ms2-pac.应用重叠PCR扩增3种病毒的5段嵌合体序列(包括3段SARS-CoV基因、一段HCV基因和一段HSN1基因),并在SARS-CoV3和HCV序列之间插入一个19mer的变异体包装位点序列,在设计引物时,使嵌合体两端含有Not Ⅰ酶切位点,与Not Ⅰ酶切的重组载体pET-ms2-pac相连接,构建得到具有2个变异包装位点的表达载体pET-ms2-3V.同时构建3种对照重组表达载体,分别测定N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C、P-3V-pET-P和pET-ms2-3V 4种重组表达质粒表达产物的260 nm吸光度(A260)值,根据公式A160=0.125 mg/ml计算4种表达产物的表达效率.结果 成功构建了4种原核表达载体:pET-ms2-3V、P-3V-pET-P、N-P3V-pET-P和N-P3V-pET-C.pET-ms2-3V和P-3V-pET-P经原核表达后得到含全长为1 891的5段嵌合体RNA的病毒样颗粒;N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C其原核表达产物病毒样颗粒中仅包装了1 200 bp的目的 嵌合体RNA.N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C、P-3V-pET-P和pET-ms2-3V的表达效率分别为0.23、0.35、0.35和0.51 mg/ml.N-P3V-pET-C比N-P3V-pET-P表达效率高52%,而pET-ms2-3V比P-3V-pET-P表达效率高38%.所包装的RNA具有耐RNase和DNase消化的特性以及良好的不同温度条件下的稳定性.结论 通过改变噬菌体ms2 RNA包装位点(19碱基的茎环结构)的数量,可构建能表达内含达到理论上的约1 900 bp外源RNA的耐RNase病毒样颗粒的原核表达载体平台.通过应用包装位点的变异体C-变异体,可以增加病毒样颗粒的表达效率.     

无偿献血者中HIV阳性者的病毒载量分析

目的分析无偿献血者艾滋病病毒(HIV)阳性标本的病毒载量水平及无偿献血人群HIV的携带状态,为评估无偿献血人群HIV感染风险提供依据。方法收集2016—2018年国内25家血站HIV筛查反应性(R)的血浆标本683(人)份,根据HIV反应性类型分为ELISA双试剂反应性组(ELISA R-R)、核酸检测(NAT)反应性组(NAT R),ELISA单试剂反应性组(ELISA R-NR),使用电化学发光试剂法做HIV抗原抗体检测,使用核酸定量试剂做HIV RNA定量检测,核酸定量检测低于检测下限(80 IU/mL)的标本以WB法确认。结果本组无偿献血者筛查R标本中,1)HIV确认阳性率为27.1%(185/683),确认阳性样本ELISA R-R标本占89.2%(165/185),ELISA NR-NR+NAT-R占8.1%(15/185),ELISA R-NR占2.7%(5/185),3(种)组病毒载量(IU/mL)分别集中在10~(4.605±0.047)、10~(3.472±0.328)和10~(5.196±0.655)(P0.05);HIV窗口期标本病毒载量(IU/mL)10~5者占20.0%(4/20),其中2例来自ELISA R-NR组,2例来自NAT R组;30.0%(6/20)为10~4者,其中2例来自ELISA R-NR组,2例来自NAT R组;其余50.0%(10/20)为10~1—10~3者,其中1例来自ELISA R-NR组,剩余9例来自NAT R组。2)在HIV确认阳性者中发现3名疑似HIV精英控制者(ECs)。结论我国无偿献血者中HIV ELISA R-R感染者病毒载量较抗原抗体窗口期感染者高;HIV窗口期感染者中多为低载量病毒感染者。疑似HIV ECs的发现揭示我国无偿献血人群HIV感染状态日益复杂多样化,需要加强对血液筛查实验室检测质量的管理,探究更合理的HIV筛查策略。