细胞培养实验中细胞系鉴定及质量控制重要性探讨

目的 以脑胶质瘤细胞系(U87)为例,探讨对在细胞培养实验中所使用的细胞系进行鉴定和质量控制的重要性.方法 对三株不同来源的U87细胞系进行STR分型检测,并结合显微镜下形态学特征,判断所测细胞系是否为真正的U87细胞系及是否发生交叉污染.结果 通过细胞STR分型结果与ATCC、DSMZ中STR数据库对比,得出U87-1细胞分型与ATCC中U-87 MG Glioblastoma-Astrocytoma Humanl00％匹配;U87-2细胞分型与DSMZ数据库中U-87MG100％匹配;U87-3未得到扩增产物,不能进行分型,原因是该细胞株为非人源细胞.结论 细胞培养实验中所使用细胞系的鉴定对于后续研究具有重要意义,可使用STR分型检测技术在细胞系培养过程中进行质量控制,对其进行准确鉴定,并排查是否存在细胞交叉污染.     

脑脊液寡克隆区带、24小时鞘内IgG合成率及IgG指数在脑脊膜血管型神经梅毒诊断中的应用研究

目的 探讨脑脊液寡克隆区带、24 h鞘内IgG合成率及IgG指数在脑脊膜血管型神经梅毒诊断中的应 用价值。 方法 回顾性分析2014年6月-2019年6月于首都医科大学附属北京地坛医院神经内科连续住院的 脑脊膜血管型神经梅毒患者的临床资料,对脑脊液甲苯胺红不加热血清试验（toluidine red unheated serum test,TRUST）、寡克隆区带、24 h鞘内IgG合成率及IgG指数诊断脑脊膜血管型神经梅毒的阳性率 和假阴性率进行分析。 结果 研究共纳入确诊的脑脊膜血管型神经梅毒患者102例。脑脊液寡克隆区带、24 h鞘内IgG合 成率及IgG指数检查的阳性率分别为93.1%、93.1%和91.2%,均高于TRUST检查的阳性率（71.6%,均 P＜0.001）。脑脊液寡克隆区带、24 h鞘内IgG合成率及IgG指数检查的假阴性率分别为6.9%、6.9%及 8.8%,均低于TRUST检查（28.4%,均P＜0.001）。 结论 脑脊液寡克隆区带、24 h鞘内IgG合成率及IgG指数均可用于脑脊膜血管型神经梅毒的诊断, 且上述指标的敏感性和假阴性率均优于脑脊液TRUST检测。     

利用SmartFlare技术进行胶质瘤细胞系U87中Twist1hi亚群分选及其对顺铂耐药性研究

目的 利用特异性SmartFlareTM RNA检测探针在人脑胶质瘤细胞系U87中分选Twist1hi-U87细胞亚群,并研究其对顺铂的耐药性.方法 用SmartFlareTM RNA探针对Twist 1hi-U87细胞亚群进行分选.以未分选细胞作为对照.CCK8法检测Twist1hi-U87亚群和亲代U87细胞对顺铂的化疗敏感性.流式细胞仪检测顺铂作用后细胞凋亡情况.结果 根据细胞核内Twist1的表达量,流式细胞分选所得Twist1hi-U87亚群约占亲代U87细胞的57.9％～ 69.8％.CCK8结果显示,加药后24h和48h,Twist1hi-U87亚群对顺铂的耐药性均高于亲代U87细胞(P＜0.05).经顺铂处理后,Twist1hi-U87细胞凋亡率(14.07％±0.96％)明显低于U87细胞(20.4％±1.29％)(P＜0.05).结论 Twist1基因高表达可以抑制胶质瘤细胞凋亡,进而降低顺铂的杀伤作用.     

高强度聚焦超声联合替吉奥治疗晚期胰腺癌的临床观察

目的 探讨高强度聚焦超声（HIFU）联合替吉奥（S-1）治疗晚期胰腺癌的疗效。方法 选取120例不能切除的晚期胰腺癌患者随机分为A组（n=61）和B组（n=59）,两组均接受口服S-1治疗。根据体表面积（BSA）制定方案：BSA＜1.25m²,80mg／d;1.25～1.5m2,100mg／d;＞1.5m²,120mg／d;d1～d14,3周为1周期。仅A组在S-1基础上联合HIFU。根据实体瘤疗效评价标准（RECIST） 1.0版评价近期疗效并计算有效率（RR）和疾病控制率（DCR）,采用NCI CTCAE 3.0标准评价毒副反应,记录疼痛缓解率并随访患者生存情况。结果 全组均可评价近期疗效。A组获CR 3例、PR 15例、SD 28例和PD 15例,RR和DCR分别为29.5％和75.4％;B组获CR 1例、PR 5例、SD 15例和PD 38例,RR和DCR分别为10.2％和35.6％;A组的RR和DCR均高于B组（P＜0.05）。A组的中位生存期（OS）为11.2个月,6、12个月的生存率分别为80.0％和40.0％,均优于A组的7.9个月、70.0％和10.0％,差异有统计学意义（P＜0.05）。A组的疼痛缓解率为57.4％（35／61）,高于B组的20.3％（12／59）,差异有统计学意义（P＜0,05）。两组均无3～4级毒副反应,1～2级毒副反应为贫血、中性粒细胞减少、血小板减少、恶心、腹泻、手足综合征及神经毒性,组间差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 HIFU联合S 1方案治疗晚期胰腺癌的疗效较好,毒副反应较轻且患者可耐受,是治疗晚期胰腺癌的一种有效手段。     

FISH技术探讨hTERC基因与子宫颈上皮内瘤样病变和宫颈癌的相关性

目的应用荧光原位杂交技术检测研究子宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和宫颈癌人类染色体末端酶(hTERC)基因表达情况。方法收集120例LCT标本,应用荧光原位杂交技术检测hTERC基因扩增情况。结果 hTERC基因异常扩增阳性率在正常对照组与CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌组间有显著性差异(P<0.01),在宫颈癌与CINⅠ、CINⅡ间有显著性差异(P<0.05),随着宫颈病变级别增加,hTERC基因异常扩增的阳性率明显增加。结论 hTERC基因异常扩增与宫颈癌密切相关;在LCT检查和HPV检测筛查宫颈癌的同时,检测hTERC基因扩增,有助于宫颈癌及癌前病变诊断,是预测癌前病变是否向宫颈癌进展的重要指标。     

吉西他滨联合卡培他滨治疗蒽环类和紫杉类药物耐药晚期乳腺癌的临床观察

目的 观察吉西他滨联合卡培他滨不同时期用于治疗蒽环类和紫杉类耐药的转移性乳腺癌患者的有效性与安全性.方法 回顾性分析16 例晚期乳腺癌患者,辅助、一线或二线治疗中曾应用蒽环类和紫杉类药物,出现进展后选用吉西他滨联合卡培他滨方案化疗.具体用药方案为:吉西他滨1000 mg/m2 静脉滴注第1、8 天;卡培他滨1000 mg/m2 口服,2 次/d,第1 ～14 天;21 d 为1 个周期.每周期评价毒副反应,化疗3 周期后评价疗效.结果 有效率37.5%,其中完全缓解1 例(6.3%),部分缓解5 例(31.3%),稳定6 例(37.5%),进展4 例(25.0%).中位无进展生存期为6.7 个月.主要毒副反应为骨髓抑制及手足综合征.结论 吉西他滨联合卡培他滨方案用于治疗蒽环类和紫杉类药物耐药的晚期乳腺癌有一定疗效,耐受性好.     

FOLFOX4方案治疗晚期肝细胞癌的多中心Ⅱ期临床研究

目的:在初步观察的基础上,探讨以奥沙利铂(OXA)和亚叶酸钙/5-氟尿嘧啶(LV/5-FU)组成的FOLFOX 4方案进行系统化疗,治疗无法手术切除的国人晚期肝细胞癌(HCC)患者的有效性和安全性。方法:前瞻性、单臂、开放性、多中心的II期临床研究,采取Simon二阶段法。经病理组织学和/或细胞学检查确诊的局部晚期、无法手术或已有远处转移的HCC患者,给予FOLFOX 4方案进行全身化疗,即OXA 85 mg.m-2,静滴,d 1;LV 200 mg.m-2,静滴2 h,d 1,d 2;5-FU 400 mg.m-2,静推,继以600 mg.m-2,持续静脉滴注22 h,d 1,d 2;每2周重复;直至疾病进展或最多不超过6个周期。每2个周期(6周时间)按照RECIST标准(1.0版)评价客观疗效,观察至疾病进展时间(TTP)和生存期(OS),并动态监测血清甲胎蛋白(AFP)的变化。一般毒性,按照NCI-CTC 2.0版标准观察和判定;神经系统毒性,参照OXA专用神经病变分级标准评判。结果:4家肿瘤中心参加,共入组25例患者,其中22例可以评估疗效,结果获得完全缓解(CR)1例,部分缓解(PR)3例,稳定(S...     

基底细胞样乳腺癌相关信号通路研究进展

根据基因微阵列分析,乳腺癌的分子分型分为5种亚型：LuminalA型、LuminalB型、正常乳腺样（normal—like）型、Her-2／neu基因过表达型以及基底细胞样乳腺癌,其中,基底细胞样乳腺癌生物学行为复杂,对传统的治疗手段无效,     

支气管冲洗术联合无创正压通气抢救COPD呼吸衰竭合并肺不张的疗效观察

目的:探讨支气管冲洗术联合无创正压通气(NIPPV)抢救慢性阻塞性肺疾病(COPD)呼吸衰竭合并肺不张的治疗价值.方法:将COPD呼吸衰竭合并肺不张患者随机分为两组,治疗组22例、对照组20例.治疗组在监护下备好急救设施后,按纤维支气管镜检查要求,插入纤支镜后先吸出气道内滞留的分泌物,然后用冲洗液反复冲洗,直到分泌物基本清除,支气管冲洗完毕后接面罩行NIPPV,第二、三天患者气道分泌物多(或肺不张无改善)则再次进行气管冲洗术;对照组只单纯给予NIPPV治疗.结果:治疗组第一次支气管冲洗前后比较PaO2有显著升高,PaCO2有显著下降(P<0.01),15例进行第二次支气管冲洗后较冲洗前PaO2上升不明显(P>0.05),而PaCO2则有显著下降(P<0.05).肺不有17例完全复张.对照组NIPPV前后PaO2亦有显著上升(P<0.01),PaCO2则有显著下降(P<0.05).治疗组治疗成功19例,成功率86.4%,改为有创通气3例,未见严重并发症发生;对照组治疗成功15例,成功率75%,差异有非常显著性(P<0.01).治疗组NIPPV治疗时间、住院时间、肺完全复张时问明显缩短,住院费用明显降低.结论:支气管冲洗术联合NIPPV抢救COPD呼吸衰竭合并肺不张安全有效,值得临床进一步研究.     

PDGF-R-2β胞外区基因的克隆和DNA疫苗的构建

目的克隆鼠血小板源性生长因子β受体(PDGFR2β)胞外区基因序列,构建DNA疫苗。方法 TRIzol法提取SD仔鼠肝脏总RNA,RT-PCR法克隆PDGFR2β胞外区,回收目的基因,连接至pMDT-18载体,亚克隆法将目标基因片段连接入真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建DNA疫苗pcDNA3.1(+)-PDGFR2β。脂质体转染COS7细胞,Western-Blot法检测目标基因的表达。结果 PCR扩增长度为1599 bp的PDGFR2β基因胞外区片段,DNA自动测序证明所获基因片段序列阅读框架正确。将PDGFR2β连接入pcDNA3.1(+)真核表达载体,构建PDGFR2β胞外区cDNA基因真核表达载体。疫苗转染COS7细胞,Western-Blot显示细胞中有相对分子质量约50000的特异蛋白表达。结论成功构建鼠DNA疫苗pcDNA3.1(+)-PDGFR2β,并在真核细胞中表达,为进一步研究PDGF/PDGFR-2β通路在肿瘤血管生成中的作用奠定了基础。