雪胆素乙对小鼠淋巴细胞体外活化及增殖的影响

目的分析雪胆素乙(Cucurbitacin IIb,CuIIb)对丝裂原刺激的小鼠淋巴细胞体外活化、增殖及促炎因子表达的影响,探讨其潜在的抗炎效应及作用机制。方法以WST法检测CuIIb对刀豆蛋白A(Con A)刺激的淋巴细胞增殖的作用,利用流式细胞术分析小鼠淋巴细胞活化抗原CD69和CD25以及促炎因子肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)表达的影响。结果 CuIIb能明显抑制Con A刺激引起的淋巴细胞的增殖作用,并呈现剂量依赖性;经CuIIb处理后,T细胞早期活化标志分子CD69和中期活化分子CD25的表达受到明显抑制;同时,CuIIb以剂量依赖方式抑制Con A诱导的促炎因子TNF-α和IL-6在CD3+T细胞中的表达。结论 CuIIb对小鼠淋巴细胞的活化、增殖均具有明显抑制作用,同时减少炎症相关细胞因子的表达,提示其通过对适应性免疫的调控发挥抗炎效应。     

杠板归对流感病毒感染鼠的防护作用研究

目的:评价中药杠板归体内抗流感病毒的药效。方法:120只BABL/c小鼠适应性饲养7天后随机分成6组,每组20只,分别为正常组、病毒对照组、利巴韦林组、杠板归高剂量组、杠板归中剂量组、杠板归低剂量组。乙醚麻醉小鼠,以10LD_(50)流感病毒40μL滴鼻感染小鼠,1h后开始给药,正常组和病毒对照组灌胃生理盐水0.1mL/d,利巴韦林组灌胃利巴韦林100mg/(kg·d),杠板归高、中、低各剂量组分别灌胃杠板归水煎液20g/(kg·d)、10g/(kg·d)、5g/(kg·d)。连续给药7天,每天记录体质量变化以及感染小鼠死亡情况。第8天,眼球取血,检测血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白G亚型1b(IgG1b)、免疫球蛋白G亚型2a(IgG2a)、白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;摘取肺组织,称肺重,进行病理检测。结果:与正常组比较,病毒对照组小鼠肺指数、IL-1、TNF-α、IgA、IgG、IgG1b、IgG2a水平显著升高,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。与病毒对照组比较,利巴韦林组和杠板归中剂量组小鼠肺指数显著降低;利巴韦林组、杠板归中剂量组、杠板归低剂量组小鼠炎症因子IL-1和TNF-α水平显著降低;利巴韦林组和杠板归中剂量组小鼠IgA、IgG、IgG1b、IgG2a水平显著升高,杠板归低剂量组小鼠IgA水平显著升高;差异均有统计学意义(P0.05)。与利巴韦林组比较,杠板归中剂量组小鼠肺指数、炎症因子IL-1、IgA水平较高,TNF-α水平较低;杠板归低剂量组小鼠肺指数、炎症因子IL-1水平较高,IgG1b水平较低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:有效剂量的中药杠板归能够提高流感病毒感染鼠的抗体水平,降低炎症因子含量以及肺指数,减轻肺部炎症,表现出较好的抗病毒作用。     

卵巢高钙血症型小细胞癌7例临床分析

目的：总结并分析卵巢高钙血症型小细胞癌（small cell carcinoma of the ovary-hypercalcemic type,SCCOHT）的临床特点、诊断、治疗及预后。方法：对我院1994-2018年诊治的7例SCCOHT病例资料进行回顾性分析。结果：7 例SCCOHT患者的平均年龄为（23.4±9.9）岁,＜30岁5例。Ⅰ期4例,Ⅲ期2例,Ⅳ期1例。临床多以腹痛、腹胀及发现盆腔包块为主诉,其中6例患者右侧卵巢受累,1例发生于左侧,5例（71.4%）诊断时伴血钙升高,6例（85.7%）血清CA125水平升高。7例患者均接受了手术及以铂类为基础的联合化疗,1例患者术后还接受了放疗。随访时间2～120个月,其中2例患者生存时间超过3年,其余5例均在发病2年内死亡。结论：SCCOHT是一类罕见的卵巢高度恶性肿瘤,预后很差,易发生于年轻女性,临床表现缺乏特异性,免疫组化有助于诊断,治疗以手术及以铂类为基础的化疗为主要治疗手段,最佳化疗方案有待进一步研究。     

多种教学模式在中医药院校生物化学实验教学中的应用思考

目前,中医药院校生物化学实验的传统教学模式是以授课为基础的学习(LBL)教学模式与以团队为基础的学习(TBL)教学模式为主,常常导致实验教学停留在机械性操作-记录结果-撰写报告的简单循环中,学生缺乏对于实验内容的深度探究和认识,无法达到培养创新科研型人才的教学目标.在中医药院校生物化学实验教学中引入以案例为导向的学习(...     

防己诺林碱阻断自噬抑制H1N1病毒感染的研究

目的 探索防己诺林碱在细胞水平抗H1N1病毒的作用,阐明防己诺林碱调控细胞自噬抑制H1N1病毒复制的分子机制。方法 CCK-8法检测0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.000 0、10.000 0、20.000 0、40.000 0、60.000 0μmol·L^-1的防己诺林碱对MDCK细胞活力的影响;MDCK细胞设置对照组、模型组和防己诺林碱(2.5、5.0、10.0μmol·L^-1)组,除对照组外,以感染复数(MOI)为0.1的H1N1病毒感染MDCK细胞,加入防己诺林碱共同孵育12 h,同时设置防己诺林碱(10.0μmol·L^-1)与病毒共同孵育4、8 h组,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR,检测HIN1 mRNA表达)和Western blotting[H1N1病毒核蛋白(NP)]检测防己诺林碱对病毒复制的抑制作用;PI/Hoechst 33342染色检测防己诺林碱(10.0μmol·L^-1)对MDCK细胞死亡的影响;qRT-PCR法检测防己诺林碱检测防...     

防己诺林碱阻断自噬抑制 H1N1病毒感染的研究

目的 探索防己诺林碱在细胞水平抗H1N1病毒的作用,阐明防己诺林碱调控细胞自噬抑制H1N1病毒复制的分子机制。方法 CCK-8法检测0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.000 0、10.000 0、20.000 0、40.000 0、60.000 0 μmol·L^-1的防己诺林碱对MDCK细胞活力的影响;MDCK细胞设置对照组、模型组和防己诺林碱（2.5、5.0、10.0 μmol·L^-1）组,除对照组外,以感染复数（MOI）为0.1的H1N1病毒感染MDCK细胞,加入防己诺林碱共同孵育12 h,同时设置防己诺林碱（10.0 μmol·L^-1）与病毒共同孵育4、8 h组,通过实时荧光定量PCR （qRT-PCR,检测HIN1 mRNA表达）和Western blotting ［H1N1病毒核蛋白（NP）］检测防己诺林碱对病毒复制的抑制作用;PI/Hoechst 33342染色检测防己诺林碱（10.0 μmol·L^-1）对MDCK细胞死亡的影响;qRT-PCR法检测防己诺林碱检测防己诺林碱预处理、病毒感染早期药物处理、病毒感染晚期药物处理以及吸附和进入阶段给药对病毒复制的影响;MDCK细胞转染EGFP-LC3或EGFP-mCherry-LC3双荧光质粒,观察防己诺林碱对EGFP-LC3的荧光强度、EGFP-mCherry-LC3共定位的影响,设置自噬诱导剂雷帕霉素（0.5 μmol·L^-1）、自噬晚期抑制剂氯喹（10 μmol·L^-1）、巴佛洛霉素A1 （100 nmol·L^-1）对照。转染过EGFP-LC3质粒的MDCK细胞感染H1N1病毒,免疫荧光检测防己诺林碱对LC3与胞内的病毒NP蛋白共定位的影响;体外培养A549细胞,以MOI为0.1的H1N1病毒感染,Western blotting检测防己诺林碱对LC3II/LC3I蛋白表达的影响。结果 防己诺林碱对MDCK细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）为40.19 μmol·L^-1 ;与模型组比较,防己诺林碱以浓度相关性的方式抑制HIN1 mRNA表达,以浓度和时间相关性的方式抑制NP蛋白表达（P＜0.01、0.001）;显著减少H1N1诱导的细胞死亡（P＜0.001）;抑制H1N1病毒进入过程。与对照组比较,防己诺林碱处理诱导LC3荧光聚集,诱导EGFP-LC3和mCherry-LC3双荧光共定位显著增加（P＜0.001）。与模型组比较,防己诺林碱处理明显减少NP的荧光数量（P＜0.001）,同时造成LC3荧光积累并与胞内的病毒NP蛋白共定位;引起LC3II积累（P＜0.01、0.001）。结论 防己诺林碱同氯喹和巴佛洛霉素A1一致,阻断自噬途径,使病毒粒子在自噬体内滞留,破坏病毒生命周期。     

千金藤素抗病毒作用的免疫学机制研究

目的 探索千金藤素体内外的抗病毒作用,并基于抗病毒天然免疫通路探究其抗病毒作用的分子机制。方法 CCK-8 法检测千金藤素（0.062 5～64.000 0 μmol·L^-1）对 A549 细胞活力的影响;利用表达绿色荧光蛋白的水疱性口炎病毒（VSV-GFP）感染 A549 细胞模型,结合流式细胞术检测千金藤素对病毒复制的影响并探究预处理、吸附过程及吸附后加药对 VSV-GFP 病毒复制的影响;实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）检测千金藤素对甲型流感病毒（H1N1）、脑心肌炎病毒（EMCV）和单纯疱疹病毒 I 型（HSV-1）复制的影响;构建 VSV 感染小鼠模型探究千金藤素的体内抗病毒作用;A549细胞中利用生物信息学方法探究其抗病毒机制;qRT-PCR 检测药物处理 A549 和原代胚胎成纤维细胞（MEF）后 IFNB1 及干扰素刺激基因 （ISGs） 表达变化;免疫印迹法 （Immunoblotting） 检测人源单核细胞白血病细胞（THP-1）中 TBK1 和STAT1 的磷酸化水平。结果 与模型组相比,千金藤素在 A549 细胞中显著抑制 VSV、H1N1、EMCV 和 HSV-1 复制;千金藤素不影响 VSV 的吸附过程,而预处理或吸附后给药可以显著抑制病毒复制;千金藤素提高 VSV 感染小鼠的存活率;千金藤素激活基于IFN-I通路的抗病毒天然免疫应答。结论 千金藤素通过激活基于IFN-I通路的抗病毒天然免疫发挥体内外抗病毒作用。     

四川省凉山彝族自治州彝汉民族3 439名残疾人龋病患病情况调查

目的 了解四川省凉山彝族自治州（凉山州）彝汉民族残疾人群患龋情况,为制定残疾人龋病防治规划提供依据。方法 根据 WHO《口腔健康调查基本方法》,并结合第三次全国口腔健康流行病学抽样调查方案,采用分层、多阶段、整群抽样方法,对四川省凉山州一市（西昌市）、三县（布拖县、木里藏族自治县、会理县）46个乡、镇、街道办事处的残疾人进行龋病流行病学调查。结果 调查凉山州彝汉民族残疾人 3 439人,其中男性 2 085人,女性 1 354人;城市 815人,乡村 2 624人;汉族 2 177人,彝族 1 262人。凉山州彝汉民族残疾人的恒牙患龋率为87.1%,龋均为 9.53。彝、汉民族残疾人的患龋率、龋均分别为 85.8%、9.93;87.9%、9.29。两民族间差异无统计学意义（P>0.05）。龋齿充填率极低,仅为0.2%。结论 四川省凉山州彝汉民族残疾人的恒牙患龋率较高,对残疾人这一特殊社会群体的口腔健康状况应给予更多关爱。     

小檗胺的体外抗病毒作用及基于Ⅰ型干扰素通路的机制研究

目的 观察小檗胺的体外抗病毒作用,并基于Ⅰ型干扰素（IFN-Ⅰ）通路的抗病毒天然免疫反应探讨其作用机制。方法 CCK-8法检测0.001、0.010、0.100、1.000、10.000、100.000 μmol·L^-1的小檗胺对A549细胞活力的影响;表达绿色荧光蛋白的水疱性口炎病毒（VSV-GFP）以0.05的感染复数（MOI）感染A549细胞制备模型,流式细胞术检测共同孵育12 h的小檗胺2.5、5.0、10.0 μmol·L^-1对GFP阳性细胞比例的影响;VSV感染A549细胞,Western blotting检测小檗胺对VSV病毒G蛋白表达的影响;小檗胺使用预处理12 h、病毒吸附过程中给药2 h、病毒吸附后给药10 h 3种不同方式给药,通过流式细胞术检测其对VSV-GFP在A549细胞中复制的影响;分别使用甲型流感病毒（H1N1）（MOI＝0.05）,脑心肌炎病毒（EMCV）（MOI＝3）和单纯疱疹病毒1型（HSV-1）（MOI＝1）感染A549细胞,同时给药共同孵育12 h后,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测小檗胺对病毒RNA表达的影响;小檗胺10.0 μmol·L^-1处理A549细胞24 h,进行转录组测序分析;10 μmol·L^-1小檗胺处理MEF细胞12 h后,qRT-PCR法检测Ifnb1、Ifit1、Ifit2、Ifi44基因的mRNA表达;利用IFN刺激性DNA （ISD）转染THP-1细胞,预先激活IFN-I信号通路,4～6 h加入小檗胺5、10 μmol·L-1处理12 h,qRT-PCR法检测IFNB1、IFIT1、IFIT2、IFI44基因的mRNA表达。结果 浓度为10 μmol·L^-1及以下时,小檗胺对A549细胞均未显示出明显的细胞毒性;与模型组相比,小檗胺剂量相关性地减少了VSV-GFP阳性细胞的比例（P＜0.05、0.001）,明显减少了病毒的VSV-G蛋白表达;小檗胺对VSV的吸附过程没有影响,而预处理或吸附后给药可以显著抑制病毒复制;与模型组比较,小檗胺剂量相关性地抑制了H1N1、EMCV和HSV-1的病毒基因表达（P＜0.001）;转录组测序和qRT-PCR结果表明,小檗胺促进细胞基于IFN-I信号通路的抗病毒免疫激活;在ISD刺激后,小檗胺诱导更高水平的IFNB1、IFIT1、IFIT2、IFI44 mRNA表达（P＜0.05、0.01、0.001）。结论 小檗胺可能通过促进基于IFN-I通路的抗病毒天然免疫反应抑制多种病毒复制。     

隐丹参酮体外抗病毒作用及机制研究

目的 探索隐丹参酮在细胞水平的抗病毒作用,从药物调控宿主抗病毒免疫角度,阐释隐丹参酮抑制病毒复制的分子机制。方法 通过流式细胞术、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、免疫印迹实验（Western blotting）等方法检测隐丹参酮对水疱性口炎病毒（VSV）、甲型流感病毒（H1N1）、脑心肌炎病毒（EMCV）、Ⅰ型单纯疱疹病毒（HSV-1）复制的影响。基于基因集富集分析（GSEA）,结合qRT-PCR、流式细胞术,分析隐丹参酮抗病毒的作用机制。在干扰素受体IFNAR1敲除A549细胞（Ifnar1^-/-A549）中,检测I型干扰素（IFN-I）通路对隐丹参酮抗病毒功能的影响。结果 隐丹参酮显著抑制VSV、H1N1、EMCV和HSV-1病毒的复制,在病毒进入前期和进入后阶段发挥抗病毒作用,对病毒吸附过程无影响;通过GSEA分析结合qRT-PCR验证,证明隐丹参酮促进IFN-I信号通路的激活;在Ifnar1^-/-A549细胞中,隐丹参酮的抗病毒功能受到抑制。结论 隐丹参酮通过促进IFN-I信号通路激活抑制多种病毒复制。