细菌预成酶联合检测在阴道微生态评价中的应用价值

目的：探讨需氧菌性阴道炎（AV）、细菌性阴道病（BV）五项联合检测在阴道微生态评价中的应用价值。方法用传统方法对5000例健康体检者阴道分泌物进行清洁度、阴道pH、革兰染色检查作阴道菌群分析;同时应用AV、BV五项联合检测进行细菌预成酶测定。结果5000例体检者中传统方法检测阴道菌群正常2675例（53.5%）,阴道菌群异常2325例（46.5%）;阴道菌群异常组细菌预成酶检测结果阳性率明显高于阴道菌群正常组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 AV、BV五项联合检测灵敏度高,操作简便,可以作为快速筛查方法应用于临床,结合阴道清洁度等指标可系统评价阴道微生态状况。     

实时荧光聚合酶链反应检测金黄色葡萄球菌肠毒素A、D

金黄色葡萄球菌（金葡菌）不仅可以引起感染部位组织的化脓、坏死和脓肿形成，还可以通过分泌外毒素或毒素休克综合征毒素，引起食物中毒和毒素休克综合征。本试验选择FemB、SEA和SED基因分别作为金葡菌菌株、肠毒素A、肠毒素D的靶序列，拟采用Taqman探针技术建立一种快速、准确特异定量检测金葡菌及其肠毒素A、D的方法；探讨肠毒素在食物中毒引起腹泻中的意义。     

急性缺血性脑卒中患者白细胞对血小板聚集的影响及一氧化氮释放

目的探讨缺血性脑卒中患者白细胞与血小板的相互作用及其在中风发病过程中的作用机制和临床意义.方法分别测定40例急性缺血性中风患者富血小板血浆(PRP)加患者白细胞前后和加正常人白细胞前后的血小板聚集率和一氧化氮(NO)含量,同时作白细胞、血小板计数.结果患者白细胞、血小板数和健康对照组无显著差异.加白细胞前,患者血小板最大聚集率和NO含量明显高于对照组(71.63±14.82)%对(63.23±14.30)%(t=2.491,P＜0.05)和(0.386±0.026)μmo1/L对(0.292±0.020)μmo1/L(t=17,407,P＜0.001),加患者白细胞后,血小板最大聚集率为(51.71±15.02)%,明显抑制(t=5.971,P＜0.001),NO浓度为(0.496±0.072)μmol/L,明显升高(t=9.091,P＜0.001),且血小板聚集抑制和NO升高呈负相关.加正常白细胞后的血小板聚集率和NO浓度分别为(67.39±16.62)%和(0.391±0.028)μmol/L,均无明显变化(t=1.205,P＞0.05和t=0.826,P＞0.05).结论缺血性脑卒中患者白细胞激活后通过释放NO对血小板聚集起抑制作用,并和梗死大小、病情轻重及预后有一定关系.     

幽门螺杆菌cheA和cheY基因表达及其产物与细菌趋化的相关性

目的 克隆幽门螺杆菌趋化相关基因cheA和they并构建其原核表达系统,建立幽门螺杆菌体外趋化模型并确定其趋化诱导物质,了解特异性抗体和氯氰碘柳胺对幽门螺杆菌趋化的抑制作用.方法 PCR扩增幽门螺杆菌NCTC11637株全长cheA和cheY基因片段,T-A克隆后测序.构建上述目的基因原核表达系统,采用SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶成像分析系统检查目的重组蛋白rCheA和rCheY的表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rCheA和rCheY.rCheA和rCheY免疫家兔获得抗血清,用饱和硫酸铵沉淀法和DEAE-32离子交换法提纯IsG,用免疫扩散法检测抗血清及其IsG效价.采用硬琼脂法建立幽门螺杆菌NCTC11637株体外趋化模型并检测11种物质的趋化诱导作用,同时分别观察抗rCheA IgG(rCheA-IgG)和氯氰碘柳胺钠对细菌趋化的抑制作用.结果 PCR扩增获得预期大小的cheA和cheY基因片段,其核苷酸和氨基酸序列与文献报道完全相同.所构建的原核表达系统能有效表达rCheA和rGheY.rCheA和rCheY兔抗血清及其IgG免疫扩散效价均分别为1:4和1:2.盐酸、硫酸和乙酸对该幽门螺杆菌均有趋化诱导作用,一定浓度的rCheA-IgG和氯氰碘柳胺钠均对幽门螺杆菌趋化有抑制作用(P<0.05).结论 本研究成功地构建了幽门螺杆菌NCTC11637株cheA和cheY基因原核表达系统.H~+是诱导幽门螺杆菌趋化的信号物质,rCheA-IgG和氯氰碘柳胺钠均能抑制幽门螺杆菌对H~+的趋化.     

失代偿肝硬化患者血及腹水中—氧化氮测定及临床意义

<正>一氧化氮(Nitric Oxide,N0)是近年来生命科学研究领域中热门课题之一,与临床多种疾病有密切联系.在慢性肝病患者经肝活检中发现,NO增高与肝损害严重程度无关,而与腹水的有无呈非常显著相关,提示增高可能继发于门脉高压及腹水形成.据此,我们对肝硬化腹水中NO含量与白细胞计数作了观察,并对腹水中NO与肝硬化感染性腹水关系作一分析.1对象与方法1.1 对象住院的失代偿肝炎后肝硬化患者47例,诊断符合1995年全国病毒性肝炎学术会议诊断标准.其中男30例,女17例,年龄22岁～70岁,平均45岁,按Child-paugh分级:B级21例,C级26例.肝硬化合并腹水感染诊断标准:①不同程度的腹膜炎表现;㈡腹水白细胞>0.2X10~9/L.多形核细胞>50%,李凡他阳性;③排除癌性腹水.     

戊二醛脱毒前后的百日咳杆菌外膜蛋白及其组分的毒性与免疫原性

应用TritonX-100抽提和Sephadex G-100层析获得百日咳杆菌外膜蛋白(OMP)及其5个组分(OMP_1～OMP_5).OMP_1～OMP_4均具有促白细胞增多、组胺敏感和胰岛活化蛋白的活性.OMP及其各组分对中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)具有毒性作用,可使该细胞聚集生长、~3H-TdR掺入量下降,及核糖体大量脱落和膜旁颗粒减少等现象.OMP组分OMP_1～OMP_4经0.3%戊二醛处理后,上述生物学活性均明显下降,CHO细胞不出现聚集生长,~3H-TdR掺入量明显高于未脱毒的组分,与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05).脱毒前后的OMP各组分对小鼠的主动保护作用未见明显变化(P>0.05).实验结果表明,戊二醛能有效地降低OMP_1～OMP_4的毒性,但脱毒后的OMP_1～OMP_4仍具备较强的免疫原性和保护力.因此,OMP及其组分经戊二醛处理后,有希望成为百日咳杆茵的无细胞疫苗.     

337例肝病患者血清层粘连蛋白的测定及临床意义

对136例肝硬化,80例慢活肝,71例慢迁肝,50例急性肝炎及200例健康对照者进行血清层粘连蛋白(Laminin,LN)检测。结果发现,肝硬化、慢性活动性肝炎、慢性迁延性肝炎患者血清LN显著高于正常对照者,同时发现血清LN与食管静脉曲张程度呈显著正相关(r=0.881,P<0.01),且LN水平随门静脉、睥静脉内径增宽而升高,故而间接反映门静脉高压的程度。血清LN测定不仅反映肝纤维化程度而且独特地反映食管静脉曲张程度,也可作为监测门脉高压的一种较安全、简便、非刨伤性的手段,值得推广。     

基于TaqMan-MGB探针荧光定量PCR技术检定细菌和人基因组拷贝数比值方法的建立

目的建立一种可以检测细菌和人基因组拷贝数比值的方法。方法分别设计细菌和人基因组特异性引物及通用探针。以大肠埃希菌和幽门螺杆菌混合菌液及人全血样本模拟混合样本。采用TaqMan-MGB荧光PCR方法对不同稀释浓度的混合样本进行定量分析。通过比较实测比值(Ct值换算成拷贝数的比值)与理论比值,评估本研究方法的可行性和准确性。结果经变异系数法(CV)分析,6个不同浓度样本(DB1、DB2、DB3、DH1、DH2和DH3)的CV值依次为4.48%、1.57%、4.67%、1.55%、0.49%和1.29%。9组模拟混合样本中,实测比值(DB/DH拷贝数)和理论比值的误差均小于0.1,且两组数值相关性极显著(r=1.000,P0.001)。结论本研究建立的基于TaqManMGB探针荧光定量PCR技术检定细菌和人基因组拷贝数比值的方法重复性和准确度良好,可用于细菌和人类组织样本基因组拷贝数比例的检定。     

KPC型碳青霉烯酶研究概况和进展

1996年美国一家医院分离到第一株产KPC型(Klebsiella pneumoniae carbapenemase)碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌以来,在之后的10余年间,产KPC型碳青霉烯酶细菌的感染已在世界各地流行,特别是在肠杆菌科细菌所致的医院感染中占有重要地位。在目前所使用的抗菌药物中,碳青霉烯类抗生素具有广谱抗菌活性,常