Ad5F35-LMP2重组腺病毒修饰DC体内特异性抗瘤作用的研究

目的 了解含有EB病毒潜伏膜蛋白2的非复制型重组腺病毒（Ad5F35-LMP2）修饰的DC能否在体内抑制肿瘤细胞生长.方法 人外周血单个核细胞在细胞因子IL-4、GM-CSF和TNF-a诱导下生成树突状细胞.将人的外周血单个核细胞移植入实验组SCID小鼠体内2次,再分别经两次DC与Ad5F35-LMP2-DC免疫SCID小鼠,然后用1×10^6的CNE-2肿瘤细胞接种SCID小鼠皮下,观察肿瘤生长情况.结果 Ad5F35-LMP2-DC组肿瘤的潜伏期明显延长,对照组和DC组小鼠1周左右就出现了肿瘤,而Ad5F35-LMP2-DC组则直到2周左右才出现肿瘤;且肿瘤体积最小,重量最轻,与DC组比Ad5F35-LMP2-DC疫苗组的肿瘤抑制率为64.75%.结论 Ad5F35-LMP2重组腺病毒疫苗修饰的DC在体内可以有效的抑制NPC肿瘤细胞CNE-2生长.     

少儿心肌炎基质金属蛋白酶-1检测与临床意义

[摘要]　目的 评价血液中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)与少儿心肌炎相互关系，验证临床检测MMP-1的意义。方法 将年龄为1~14岁临床诊断为心肌炎的患者9例与相匹配的对照组9例取血标本，测定心肌酶谱包括门冬氨酸氨基转移酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、α-羟丁酸脱氢酶（HBDH）、肌酸激酶同工酶（CKMB），心肌肌钙蛋白I（cTnI）、C反应蛋白及MMP-1，并行超声心动图等检查。结果　超声心动图示心肌炎患儿射血分数显著降低、左心室扩大。心肌炎患儿与正常对照组心肌酶、心肌肌钙蛋白I、C反应蛋白及MMP-1检测均差异无显著性。结论　对少儿心肌炎患者来说，血液中的MMP-1水平可能与其疾病没有相关性。     

Ad5F35-LMP2重组腺病毒的构建及鉴定

目的：构建Ad5F35-LMP2重组腺病毒.方法：分别以EcoR Ⅰ单酶切pSH-LMP2和pDC316,将LMP2目的基因片段和线性化的pDC3l6连接,克隆构建pDC3l6-LMP2,以PCR和酶切的方法鉴定插入方向正确.pDC3l6-LMP2与腺病毒骨架pBHG-fiber5/35共转染293细胞构建重组腺病毒Ad5F35-LMP2,PCR及间接免疫荧光进行鉴定.结果：经PCR和酶切鉴定证实pDC3l6-LMP2构建成功.pDC3l6-LMP2与腺病毒骨架共转染293细胞后见明显的毒斑,说明二者在293细胞中同源重组并包装成功.经PCR证实重组腺病毒Ad5F35-LMP2构建完成,间接免疫荧光鉴定LMP2蛋白能在细胞膜上有效表达.结论：本实验成功构建了含EB病毒LMP2全序列的Ad5F35-LMP2重组腺病毒,为下一步进行该重组病毒生物安全性能和生物学功能研究及今后应用Ad5F35-LMP2重组腺病毒对鼻咽癌患者进行基因免疫治疗奠定了基础.     

普伐他汀对急性心肌梗死的疗效及抗炎作用

目的 研究普伐他汀对急性心肌梗死（AMI）治疗作用及其机制。方法 将体重1．5-2．5kg的成年兔24只随机分为对照组（A组）,普伐他汀组（B组）两组,建立ANI模型并给予相应的干预,作术后6h血液学观察,4d时分别作血液、血清、血流动力学、大体形态测量及组织学的观察,4周时测量瘢痕厚度。结果 B组与A组比较,6h,4d及4周时白细胞数明显下降（P〈0．05）,术后4d一氧化氮（NO）两组差异无显著性（P〉0．05）,心房钠尿肽（ANP）、丙二醛（MDA）、左室功能测定值（STI）、左室舒张未压（LVEDP）、梗死面积均明显下降（P〈0．05）。4周时B组瘢痕厚度较A组变薄（P〈0．05）,组织学检查显示A组梗死区术后4d坏死心肌组织结构消失,中性粒细胞大量浸润,B组白细胞浸润程度与A组无明显差异,但B组梗死区中有少许坏死心肌组织。在B组梗死区边缘可见有带细胞核的心肌细胞结构,可能是活的心肌细胞岛,但A组少见。结论 证实普伐他汀对AMI短期使用后疗效显著,其抗炎作用在此过程中的意义值得关注。     

弹性酶治疗高脂血症179例疗效观察

高脂血症是体内脂质代谢紊乱。主要表现为血清总胆固醇 (ＴＣ)、甘油三酯 (ＴＧ)和 (或 )低密度酯蛋白(ＬＤＬ -ｃｈ)等增高 ,而高密度脂蛋白 (ＨＤＬ -ｃｈ)降低。血清ＴＣ升高 ,特别是ＬＤＬ -ｃｈ升高及ＨＤＬ -ｃｈ降低是冠心病的独立危险因素。研究已证明改善血脂代谢紊乱 ,可明显降低冠心病的发病率及死亡率[1] 。我们应用弹性酶治疗高脂血症 179例 ,并与脂必妥进行对比观察疗效满意 ,报告如下。1　临床资料1·1　对象和分组　 2 2 9例高脂血症患者均为 1999年1月至 2 0 0 0年 1月来本院就诊的门诊及住院患者 ,经饮食控制无效 ,近期 2…     

EBV-LMP2蛋白的表达和初步纯化

目的 应用杆状病毒表达载体表达并纯化EB病毒LMP2蛋白.方法 利用杆状病毒Bac-to-Bae杆状病毒表达系统,将EBV-LMP2基因插入到质粒pFastBacTMHT B中,获得携带EBV-LMP2基因的重组杆状病毒Bac-LMP2.重组病毒感染Sf-9细胞,表达N端携带6个组氨酸（6 X His）的LMP2融合蛋白His-LMP2.经镍离子亲和层析纯化,获得纯化蛋白.结果 SDS-PAGE及Western-Blot检测表达的蛋白相对分子质量大小与预计结果一致.HPLC分析纯化后蛋白的纯度可达86%.结论 利用杆状病毒表达系统表达EB病毒LMP2基因并经过初步纯化后,可以获得较好纯度的LMP2蛋白.     

携带EBV-LMP2基因的重组MVA痘苗病毒初步免疫效果

目的 观察携带EBV lmp2基因的重组痘苗病毒疫苗在小鼠体内诱导的LMP2特异性细胞免疫应答效果.方法 使用表达EBV lmp2基因的重组痘苗病毒MVA-Lac-LMP2,采用低（2＆#215;105 pfu/只）、中（2 ＆#215; 106pfu/只）、高（2 ＆#215; 107pfu/只）三个剂量组,分别于0、2周免疫BALB/c小鼠,末次免疫1周后应用IFN-γ ELISPOT方法检测小鼠脾淋巴细胞中EBV LMP2特异性CTL应答水平.结果 MVA-Lac-LMP2能诱导小鼠产生EBV LMP2特异性的CTL应答,其中,中、高剂量组小鼠CTL水平明显高于低剂量组（P≤0.01）,中、高剂量组小鼠诱导的CTL应答水平差异没有统计学意义.结论 MVA-Lac-LMP2能够在小鼠体内诱导EBV-LMP2特异性的细胞免疫,应答水平的高低与免疫剂量有关.     

使用双相血培养瓶进行临床血液及无菌体液培养结果分析

目的：使用双相血培养瓶进行血液和无菌体液培养，是一种比较好的手工方法，可大大的提高检出的阳性率。方法：用双相血培养瓶对833份血液和体液标本进行检测。结果：培养时间一般为7d，阳性率为15％，其中血培养阳性率为9％，体液阳性率为21％，共检出32种细菌。结论：用双相血培养瓶进行血培养，可提高检出率，快速做出病原学诊断。     

腺病毒载体疫苗在恒河猴体内的长期毒性试验

目的探讨以5型腺病毒为载体的人用疫苗Ad5-LMP2在恒河猴体内的药效学作用和安全性。方法恒河猴经im给予4.5×1011、1.5×1011和0.5×1011v.p·(kg·次)-1的Ad5-LMP2和等体积的磷酸盐缓冲液(对照组),每5d给药1次,共给药6次。在停药次日和停药15d时进行尿常规、血液、眼科、心电图、脏器重量和系数、大体观和病理组织学检查;给药前后定期采取猴血清并从剖检猴的脾脏分离淋巴细胞,用ELISA、病毒中和试验和ELISPOT检测腺病毒载体和目的基因蛋白产物LMP2诱导的体液和细胞免疫应答;通过PCR扩增各器官总DNA中的lmp2基因来检测Ad5-LMP2在体内的生物分布。结果在整个试验期间试验猴均未出现任何异常反应,也无动物死亡;给药组动物在整个给药期间的摄食、饮水和体重增长及上述各项常规毒理学检测中均未出现明显异常。受试物在试验猴体内诱发了较高水平的抗腺病毒中和抗体,但目的蛋白LMP2诱导的特异性细胞免疫应答未受抗腺病毒中和抗体的明显抑制;在猴的心、肝、脾、肺、肾、脑、睾丸(或卵巢)及给药部位均可检测到Ad5-LMP2并维持到停药后15d。结论在保证受试物药理学作用的前提下,恒河猴连续1mon肌肉注射相当人临床拟用剂量37.5倍的Ad5-LMP2,未见明显不良反应,中毒靶器官和中毒剂量未明显显示,其安全剂量大于4.5×1011v.p·(kg·次)-1。     

脑钠肽水平的检测对呼吸困难的诊断价值

目的 检测呼吸困难患者脑钠肽(BNP)水平,评价BNP对心源性呼吸困难和肺源性呼吸困难的诊断价值.方法 选择呼吸困难患者70例,分为心源性呼吸困难和肺源性呼吸困难组,各35例.结果 心源性呼吸困难组患者BNP水平较肺源性呼吸困难组患者显著升高(P＜0.01).当以BNP＞100 ng/L为截断点时,BNP诊断心源性呼吸困难的灵敏度为97.1%,特异性为94.3%;BNP＜100 ng/L排除心力衰竭的阴性预测值为95.7%.结论 BNP对心源性和肺源性呼吸困难的早期诊断和鉴别诊断具有重要的意义,有助十提高呼吸困难患者的诊疗水平.