脑源性神经生长因子促进成年大鼠脑海马神经干细胞定向分化的浓度选择

目的：探讨培养基中表皮生长因子与血清两者浓度一定的条件下，不同浓度的脑源性神经生长因子对成年大鼠脑海马神经干细胞向神经元分化的影响。 方法：实验于2007—08在中国医科大学神经解剖研究室完成。①材料：清洁级雄性成年SD大鼠1只，由中国医科大学实验动物部提供，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。实验过程中应用的表皮生长因子、脑源性神经生长因子均由R＆D公司提供：（多实验方法：无菌条件下分离大鼠脑海马组织，剪碎后胰蛋白酶消化，过滤、离心、弃上清，加入含2％B27、20μg／L表皮生长因子、20μg／L碱性成纤维生长因子的DMEM／F12无血清条件培养基体外培养神经干细胞，传至第4代时利用有限稀释法进行单克隆培养，100倍镜下克隆球直径约为200μm时制备单细胞悬液，稀释后滴加于96孔板内，设立两组，全量新鲜培养基组加入刚配置未使用过的DMEM／F12无血清培养基100μL，半量条件培养基组加入上述曾用于神经干细胞培养且含有其代谢产物的1／2DMEM／F12无血清培养基100斗L。（劲实验评估：观察神经干细胞的单克隆培养增殖情况。对克隆球行巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶、胶质原纤维酸性蛋白免疫细胞化学染色。按培养基中脑源性神经生长因子终浓度的不同将所培养细胞设立0，50，100，150，200μg／L组，各组均加入20μg／L表皮生长因子和体积分数为0．1的胎牛血清，1周后行神经元特异性烯醇化酶免疫细胞化学染色，检测神经干细胞向神经元分化情况。 结果：①神经干细胞单克隆培养结果：单克隆培养开始时神经干细胞增殖缓慢，半量条件培养基组细胞增殖速度快于全量新鲜培养基组，随着细胞数的增多，两组细胞增殖速度也相应加快，分别在培养后第12天、第15天形成直径为200μm的克隆球。②神经干细胞免疫细胞化学染色结果：单克隆培养后克隆球表达巢蛋白，诱导分化后神经元特异性烯醇化酶、胶质原纤维酸性蛋白均呈阳性表达：③各组神经干细胞分化为神经元的比例：与0μg／L脑源性神经生长因子组比较，50，100μg／L脑源性神经生长因子组的神经干细胞分化为神经元比例均明显增高（t=2．502～5．025，P〈0．05）；而浓度为150，200μg／L时均无明显变化（t=0．420～1．857，P〉0．05）。 结论：向含有B27、表皮生长因子、碱·性成纤维生长因子的DMEM／F12条件培养基中加入20μg／L表皮生长因子和体积分数为0．1胎牛血清的情况下，脑源性神经生长因子促使神经干细胞向神经元分化的较佳浓度为50μg／L。     

表皮生长因子对脑源性神经生长因子诱导体外培养大鼠脑海马神经干细胞向神经元分化的影响

目的:获得大量神经干细胞并且能够控制其向神经元定向分化可为进一步修复损伤大脑和治疗退行性神经系统疾病奠定种子细胞基础,实验观察了表皮生长因子对脑源性神经生长因子诱导神经干细胞向神经元分化过程中的影响.方法:实验于2007-08在中国医科大学神经解剖研究室完成.①材料:清洁级雄性成年SD大鼠3只,由中国医科大学实验动物部提供,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:无菌条件下分离大鼠脑海马组织,胰蛋白酶消化后采用无血清培养技术体外培养神经干细胞,传至第4代克隆球直径约为200 μ m时,滴加DMEM/F12 2?7 20μg/L表皮生长因子 20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子 条件培养液(细胞原代培养第7天的上清液的过滤液),进行单细胞克隆培养,传代的神经干细胞分成空白对照组、表皮生长因子组、脑源性神经生长因子组、表皮生长因子 脑源性神经生长因子组.空白对照组培养液为含体积分数0.1胎牛血清的DMEM/F12,其余3组培养液在此基础上分别加入各自对应的细胞因子培养1周,表皮生长因子浓度为20 μg/L,肺源性神经生长因子浓度为50 μg/L.③实验评估:传代后的克隆球进行神经干细胞免疫细胞化学染色鉴定.计数神经元特异性烯醇化酶阳性细胞率,检测神经干细胞向神经元的分化情况.结果:①单细胞克隆培养后,克隆球细胞表达巢蛋白,诱导分化后神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白均呈阳性表达.②与空白对照组神经干细胞分化为神经元的比例比较,表皮生长因子组有所降低:脑源性神经生长因子组、表皮生长因子 脑源性神经生长因子组均明显提高(t=2.309～2.779,P＜0.05),且后者提高幅度尤为显著(t=2.309,P＜0.05).结论:表皮生长因子可以提高脑源性神经生长因子诱导成年大鼠脑海马神经干细胞向神经元分化的比例.     

TENOR系统在腰椎峡部裂性滑脱复位治疗中的应用

BACKGROUND:Application of Tenor system and is to decompress nerve root,reduction of olisthe,internal fixation and autografts are to restore anatomic structure and stability of spinal column.     

超声骨刀椎板成形椎板植骨在椎管肿瘤手术中的应用

目的探讨超声骨刀切开、棘突椎板复合体回植、钛板固定、椎板植骨在椎管内肿瘤切除术中的应用价值。方法 2014年7月~2016年7月,在88例颈、胸、腰椎椎管内肿瘤(长1~11 cm,平均3.2 cm)手术中,采用超声骨刀沿关节突内侧2~3 mm切开两侧的椎板,将棘突椎板复合体完整取下,处理完椎管内肿瘤后再将棘突椎板复合体原位回植,钛板固定,完成椎管成形,并在椎板切开部位植骨融合。结果肿瘤全切除81例,次全切除7例。切除椎板数1~5个,平均2.5个。未出现因超声骨刀椎管开窗、钛板置入所致的硬脊膜破损、脊髓和脊神经根损伤等并发症。随访3~12个月,中位数3个月,未见回植组织移位、塌陷、畸形愈合及椎管狭窄,未见不稳定或畸形,可见植骨融合。结论椎管内肿瘤术中采用超声骨刀椎管后路切开钛板固定棘突椎板复合体的方法简便、安全、可靠,辅以植骨融合有利于保持脊柱的完整性及稳定性,近期效果满意。     

圆锥马尾常见胚源性肿瘤的显微手术治疗（附23例分析）

目的分析影响圆锥马尾常见胚源性肿瘤发病情况及预后的因素,寻找提高疗效的途径。方法回顾性分析1997年1月至2007年3月收治的23例圆锥马尾常见胚源性肿瘤患者的临床资料,重点了解各临床因素与术前神经功能状态及预后的相关性。结果术后病理结果为表皮样囊肿11例,畸胎瘤9例,皮样囊肿3例。术前感觉运动功能与发病时间相关,术前大小便功能与肿瘤纵径相关。均显微手术治疗,术后随访3月。术后感觉运动功能恢复较好,其恢复程度与术前功能状态和发病时间相关。大小便功能恢复欠佳,与术前大小便功能状态相关。术前神经功能及术后恢复情况均与病理类型无关。结论影响预后的主要因素是术前的神经功能状态,早期诊断早期手术能显著改善患者的预后。     

温州市综合性医院人力资源配置调查分析

通过对2007年温州市8家综合性医院人员配置情况的调查和分析,发现温州市综合性医院内部的人力配置存在专业结构、学历、职称比例不合理、护士缺编、行政后勤人员比例过高等问题。并针对这些问题提出了相应的解决办法。     

雷帕霉素增强大鼠脊髓损伤后神经元自噬对凋亡影响的观察

目的探讨雷帕霉素(Rapamycin)对急性脊髓损伤后神经元的保护作用及其可能机制。方法 150只SD大鼠按随机分成假手术组、损伤组和治疗组,Allen法[1]建立大鼠脊髓损伤模型,于损伤后8h、24h、3d、7d、14d取损伤脊髓组织,免疫荧光双标观察神经元LC3表达及凋亡情况,Western blot检测LC3及Caspase-3表达,电镜观察神经元显微结构变化。结果与损伤组相比,治疗组相同时相点LC3阳性神经元增多,凋亡细胞减少(P<0.05);Western blot示LC3Ⅱ损伤后第3天达高峰,治疗组表达较明显,Caspase-3损伤第7天后开始下降,治疗组表达较少(P<0.05);电子显微镜下损伤组及治疗组神经元内均可见自噬小体及自噬溶酶体。结论雷帕霉素增强大鼠脊髓损伤后神经元自噬,减少神经元细胞凋亡,对神经元具有保护作用。     

骶髂螺钉微创治疗骶骨骨折

目的 应用骶髂螺钉微创治疗骶骨骨折及疗效评价.方法 牵引复位后,透视下行骶髂螺钉内固定术27例,男22例,女5例;年龄19～38岁,平均28岁;致伤原因:坠落伤15例,交通伤7例,其他损伤5例.结果 平均每根空心钉植入时间约45分钟,出血约10毫升.骨盆区前方的损伤另作耻骨支及耻骨联合内固定.麻醉清醒后开始在床上功能锻炼,1周后下地扶拐行走.20例骨折复位良好,11例已拆除内固定;无骶髂疼痛17例,轻微疼痛4例,1例术后骨折对位尚可,后发生移位,经切开复位时发生医源性损伤,出现下肢麻木.结论 经皮骶髂关节螺钉固定术是一种安全、有效地治疗方法,手术创伤小,并发症少,手术时间短,康复快.     

ACL重建股骨隧道定位及固定方法研究

目的探讨关节镜下应用半腱肌、股薄肌肌腱重建膝前交叉韧带时股骨隧道定位及固定方法。方法经临床及膝关节镜检查诊断的膝前交叉韧带损伤者86例采取镜下修复,分别应用经由内向外及由外向内2种定位方法行股骨隧道定位;股骨隧道固定分别应用Endobutton、Rigidfix及可吸收挤压螺钉3种方法。结果经随访10～26个月,Lachman征、前抽屉试验均为阴性,Lysholm评分从28分到70分,平均56.65分。结论股骨端隧道由内向外定位方法（通过胫骨隧道）创伤略小,适用于Endobutton、Rigidfix等,但受胫骨隧道位置及角度影响,要使股骨端隧道定位点与前交叉韧带股骨外髁解剖止点完全吻合,必须建立精确位置及角度的胫骨隧道。而股骨端隧道由外向内定位方法创伤略大,适用于股骨端挤压螺钉固定,定位点不受胫骨隧道影响,与前交叉韧带股骨外髁解剖止点较易吻合;而各种股骨端固定方法各有利弊,选择最佳的股骨隧道及固定方法将有助于减少术后并发症。     

缺氧对新生大鼠海马神经干细胞增殖和分化的影响

目的探讨单纯性缺氧对新生大鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响。方法将36只新生1d大鼠随机均分为N组(正常对照组)、Q2组(缺氧2h组)、Q5组(缺氧5h组)。将海马组织在无血清培养液(均含有碱性成纤维生长因子bFGF、表皮生长因子EGF和白细胞抗原B27)中,分别进行原代培养、单克隆培养和传代培养,单克隆培养细胞进行巢蛋白(Nestin)和Hoechst33342免疫荧光双标染色;传代培养的细胞传三代诱导分化,诱导分化3d的细胞分别行神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Hoechst3342免疫荧光双标染色,计数NSE阳性细胞比例,进行统计学分析。结果单克隆培养的细胞均呈Nestin阳性表达,诱导分化的细胞部分呈NSE或GFAP阳性表达。Q2组、N组、Q5组细胞原代培养克隆球直径达2μm的时间分别为7d、10d、13d。传3代后,对各组细胞进行诱导分化,Q2组细胞诱导分化为神经元的比例明显高于N组,Q5组的细胞诱导分化为神经元的比例明显低于N组。结论短时间缺氧可促进在体海马神经干细胞增殖和诱导其向神经元分化,长时间缺氧则抑制在体神经干细胞增殖和向神经元分化。