周期性张应力对骨性关节炎软骨细胞p38 MAPK表达及其磷酸化的影响

目的: 观察周期性张应力(cyclic tensile strain,CTS)对兔骨性关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)表达及其磷酸化的影响,探讨力学载荷在骨性关节炎的病理过程中的作用。方法: 实验动物行一侧前交叉韧带切断术(ACLT)制作OA动物模型,术后10周消化分离兔膝软骨细胞体外培养,非手术侧软骨细胞为正常组, OA细胞随机分为低应力组、高应力组以及对照组,分别加载0.1 Hz、1.0 Hz、0 Hz的周期性张应力。加载应力24 h、1周和2周后RT-PCR和Western blotting测定各组p38 MAPK及其磷酸化产物表达水平。结果: 在各时点各组p38 MAPK均有不同程度的表达,其中加载CTS前,正常组与OA对照组相比差异非常显著(P<0.01);加载CTS 1周后,高应力组与低应力组差异有统计学意义(P<0.05);加载CTS 2周后,低应力组与对照组差异非常显著(P<0.01)。Western blotting显示p38 MAPK磷酸化产物在对照组和OA+高应力组持续表达,而OA+低应力组在24 h、1周、2周3个时点的表达逐渐下降。结论: 力学载荷可影响p38 MAPK的表达及磷酸化程度,骨性关节炎的发展发生与应力在细胞分子水平上相互影响。     

E-cadherin表达与胃癌浸润转移的关系

【目的】探讨E-cadherin（E-cad）表达与胃癌浸润转移的相关性。【方法】应用免疫组织化学检测32例胃癌手术标本及同一病例正常胃粘膜组织中E-cad表达水平。【结果】胃癌E-cad表达阳性率显著低于正常胃粘膜（P〈0.001）,E-cad表达与胃癌的分型、细胞分化程度、胃壁浸润深度、淋巴结转移、TNM分期具有明显相关性（P〈0.05）。【结论】E-cad表达情况水平可作为较早期预测胃癌浸润、转移程度,评价预后的有效指标。     

纤溶酶原激活剂及其抑制因子1在大鼠脊髓急性损伤时的表达

观察大鼠脊髓急性损伤时组织型纤溶酶原激活剂和纤溶酶原激活剂抑制因子１表达的变化,了解ｔ－ＰＡ、ＰＡＩ－１在脊髓急性损伤后所起的作用。方法３５只Ｗｉｓｔａｒ大鼠用改良Ａｌｌｅｎ法制成脊髓中度急性损伤模型伤后２,６,２４,７２,１６８,２４０小时取材分别进行组织学,免疫组化,图像分析。     

人基质金属蛋白酶组织抑制剂1腺相关病毒表达质粒的构建及检测

目的构建含人基质金属蛋白酶组织抑制剂1（tissue inhibitor of metalloproteinases1,TIMPl）的腺相关病毒（adenoassociatedvirus,AAV）表达质粒并观察其在人胚肾293（HEK293）细胞中的表达,为进一步逆转椎间盘退变提供依据。方法以含有人TIMP1基因序列的质粒pBLAST49-hTIMP1为模板,通过PCR的方法扩增出TIMP1基因,再采用分子克隆的方法,把TIMP1克隆到AAV表达质粒pSNAV2．0构建重组质粒pSNAV2-TIMP1。把重组质粒转染HEK293细胞,用免疫荧光和Westernblot的方法对重组质粒的表达进行研究,ELISA法检测细胞培养上清液中TIMP1蛋白的含量。结果PCR、酶切、DNA测序等方法均证实成功构建了含有完全正确的TIMP1基因序列的AAV表达质粒pSNAVz-TIMP1。体外成功转染入HEK293细胞,免疫荧光、Westernblot及ELISA的结果表明重组质粒能够高表达TIMP1蛋白。结论成功构建了表达TIMP1的重组质粒pSNAV2-TIMP1,并证实在蛋白质水平获得了表达,为进一步逆转椎间盘退变研究奠定了基础。