过氧化物酶体增殖物活化受体γ激动剂对肾病大鼠肾组织nephrin表达的调控

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)对nephrin表达的调控作用。方法建立大鼠氨基核苷嘌呤霉素(PAN)肾病模型,应用实时定量PCR和免疫印迹法检测肾病大鼠不同时间点肾组织中PPARγ和nephrin mRNA和蛋白表达,并观察PPAR-γ激动剂罗格列酮大鼠肾组织中nephrin表达的影响。体外培养HEK293细胞,转染含荧光素酶报告基因的nephrin启动子区,观察罗格列酮对nephrin基因转录活性的影响。结果PAN肾病模型d1 PPARγ、nephrin mRNA和蛋白即出现下降,d3出现明显下降,d7下降到最低点,PPARγ与nephrin表达呈显著正相关,而PPARγ和nephrin蛋白表达与24 h尿蛋白排泄呈负相关;罗格列酮治疗后大鼠尿蛋白排泄明显下降,肾组织中nephrin表达回升;罗格列酮呈时间依赖性诱导nephrin基因的转录活性,3 h达高峰,其后荧光素酶活性有所下降,但刺激24 h仍显著高于对照组。结论nephrin表达受PPARγ调控,PPARγ激动剂通过诱导nephrin表达而减轻蛋白尿。     

姜黄素对脂多糖诱导的系膜细胞单核细胞趋化蛋白1基因及蛋白表达的影响

目的：进一步探讨姜黄素对LPS诱导的系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法：采用不同浓度姜黄素处理体外培养的人肾小球系膜细胞，分别收集上清液及细胞，应用ELISA的方法测定上清液中MCF-1蛋白表达量，逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法测定系膜细胞MCP-1基因的相对表达量。结果：LPS可显著上调系膜细胞MCP-1基因表达，同时刺激系膜细胞分泌MCP-1蛋白；姜黄素则呈浓度依赖性地抑制LPS诱导的系膜细胞MC-1基因及蛋白表达。结论：姜黄素能抑制LPS诱导的肾小球系膜细胞MCP-1基因和蛋白的表达。     

GEM基因在3T_3-L_1脂肪细胞诱导分化过程中的表达变化

目的观察3T3L1前体脂肪细胞诱导分化过程中GEM基因表达水平的变化,探讨GEM基因与肥胖发生的关系。方法体外培养3T3L1前体脂肪细胞,采用RTPCR技术检测分化不同时段的3T3L1脂肪细胞中GEM基因的mRNA表达水平。结果在3T3L1脂肪细胞的诱导分化过程中,GEM基因mRNA表达水平无显著变化(P>0.05)。结论GEM基因在脂肪细胞分化、脂质合成和积聚过程中的作用有待进一步研究。     

CAMKⅡD基因在3T_(3~-)L_1脂肪细胞诱导分化过程中的表达变化

目的　观察 3T3 L1前体脂肪细胞诱导分化过程中Ⅱ型钙调蛋白激酶δ亚基 (CAMKⅡD)基因表达水平的变化 ,探讨CAMKⅡD基因与肥胖发生的关系。方法　体外培养 3T3 L1前体脂肪细胞 ,在诱导 3T3 L1脂肪细胞分化成熟的不同时段 ,采用RT PCR技术检测脂肪细胞中CAMKⅡD基因的mRNA表达水平。结果　诱导剂刺激后 (第 0天 ) ,3T3 L1脂肪细胞中CAMKⅡD基因的mRNA表达于第 1天显著下调 ,与第 0天比较具有显著差异 (P <0 .0 1) ;第 2天 ,该基因表达水平显著上调 ,并明显高于第 0天表达水平 (P <0 .0 1) ;第 2天至 3T3 L1细胞分化为成熟脂肪细胞 (第 10天 ) ,该基因表达一直维持在较高水平 (P >0 .0 5 )。结论　CAMKⅡD基因参与了脂肪细胞分化的调控 ,与肥胖发生相关 ,其在3T3 L1细胞分化过程中的表达变化可能有利于脂肪细胞的分化成熟和脂质积聚     

iNOS激活在过氧化氢诱导胰岛β细胞凋亡中的作用

目的 研究过氧化氢诱导的胰岛β细胞株(RINm5F细胞株)凋亡中iNOS的活性变化趋势.方法 过氧化氢诱导胰岛β细胞凋亡,采用MTT(细胞活性检测)、SRB(活细胞蛋白染色)鉴定细胞凋亡,对凋亡细胞iNOS的活性测定来反应iNOS的激活程度.结果 过氧化氢在0.1mmol/L, 1h能明显诱导胰岛β细胞的凋亡,其细胞活性和活细胞染色均较对照组明显下降,过氧化氢诱导后iNOS活性提高约42%.结论 iNOS的激活可能是过氧化氢诱导的胰岛β细胞凋亡的机制之一.     

迷迭香酸对血小板源生长因子BB诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌的影响

肾小球系膜细胞（GMC）分泌的细胞因子如转化生长因子B1（TGF-β1）及单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）等在引起肾小球疾病进展中起重要作用。迷迭香酸（rosmarinic acid．RA）是从紫苏等唇形科中草药中提取的一种多酚类化合物，具有抗炎、抗氧化及免疫调节等多种活性。有研究报道，RA对体外培养的GMC增殖具有抑制作用，但其作用机制尚不清楚。本实验通过体外培养大鼠GMC．观察RA对血小板源生长因子BB（PDGF-BB）刺激的GMC增殖及分泌MCP-1与TGF-β1的影响。     

β3肾上腺素能受体基因在肥胖大鼠神经肽Y Y5受体反义基因治疗中的作用

目的：探讨β3肾上腺素能受体基因在肥胖大鼠神经肽Y（NPY）Y5受体反义基因治疗中的作用。方法：建立高营养饮食诱导的肥胖大鼠模型，侧脑室插管后注射NPY Y5受体反义，错义寡核苷酸或生理盐水，测定肥胖大鼠的腹腔内脂肪组织湿重与血脂，并采用RT－PCR技术检测腹膜后脂肪组织中β3肾上腺素能受体基因的表达水平。结果：1．高营养饮食诱导下肥胖模型大鼠的腹腔脂肪组织湿重与血脂水平均明显高于正常大鼠，腹膜后脂肪组织中β3肾上腺素能受体基因的表达水平则显著低于正常大鼠；2．经NPYY5受体反义寡核苷酸干预后，肥胖大鼠的腹腔脂肪湿重与血脂水平均明显降低，腹膜后脂肪组织中β3肾上腺素能受体基因的表达水平则显著高于肥胖对照大鼠。结论：侧脑室注射NPYY5受体反义寡核苷可显著降低肥胖大鼠的体脂、血脂，其机制可能与腹膜后脂肪组织β3肾上腺素能受体基因的表达上调有关。     

低密度脂蛋白对体外培养的人肾小球系膜细胞产生活性…

近年来，非特异性物大分子在肾小球系膜区的沉积及其对肾小球的病理损伤的影响，被雠为是导致是有小球硬化形成的重要原因。而脂蛋白正是这类引人注目的分子物质本实验 人低密度脂蛋白对体外培养的人肾小球系膜细胞Ｈ２Ｏ２和Ｏ＾－２产生的影响，并与经ＬＤＬ刺激后ＧＭＣ的增殖水平及乳酸脱氢酶水平相比较。     

盐酸哌甲酯对注意缺陷多动障碍大鼠Homer 1a表达的影响

[目的]研究Homer 1a与注意缺陷多动障碍的关系,为临床治疗提供理论依据.[方法]将20只注意缺陷多动障碍动物模型-幼年自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)随机分为两组,分别给予盐酸哌甲酯(2 mg/kg)或生理盐水,分别利用RT-PCR和Western Blotting技术检测两组大鼠Homer 1a mRNA和蛋白表达差异情况.[结果]盐酸哌甲酯给药组前额叶、海马中Homer 1a mRNA和蛋白的表达较生理盐水对照组显著增加(mRNA t前额叶=2.41,t海马=2.68,蛋白t前额叶=3.21,t海马=4.07,P值均＜0.05).[结论]盐酸哌甲酯单次用药可以引起SHR大鼠前额叶和海马Homer 1a mRNA和蛋白表达的增加,提示Homer 1a可能参与了ADHD的病因及发病机制.     

Rock-Ⅰ激酶在肾间质纤维化大鼠不同阶段肾组织中的激活及意义

目的观察小G蛋白Rho相关激酶———Rock-Ⅰ在单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾组织的表达规律及其活化状态的改变,并探讨其在肾间质纤维化中的意义。方法采用免疫组织化学、RT-PCR、免疫印迹法,从基因、蛋白质水平观察UUO大鼠肾组织Rock-Ⅰ表达规律与定位;免疫印迹法检测其底物肌球蛋白磷酸酶的磷酸化状态,作为该激酶功能活化的标志。结果(1)Rock-ⅠmRNA在肾间质纤维化发生早期即明显上调(F=15.18,P<0.01),其表达较肌成纤维细胞标志α-SMAmRNA提前达到高峰,2者呈显著正相关(r=0.61,P<0.01)。(2)免疫印迹结果显示UUO模型大鼠肾组织中Rock-Ⅰ蛋白表达水平明显高于对照组(F=21.18,P<0.01),并随肾间质纤维化相对面积的扩大而逐渐增加,2者呈显著正相关(r=0.83,P<0.01)。(3)UUO模型组大鼠肾组织肌球蛋白磷酸酶磷酸化水平较对照组显著增高(F=48.87,P<0.01),并且与肾间质纤维化指数呈显著正相关(r=0.54,P<0.05)。结论UUO大鼠肾组织中存在小G蛋白Rho相关激酶Rock-Ⅰ的表达上调与功能活化,提示Rho/Rock信号转导通路在肾间质纤维化的发生机制中具有重要作用。