常用病毒载体的基础研究及临床应用

分子生物学的发展已引领现代医学进入分子医学时代,其中病毒载体的研制成功从根本上推动了基因治疗的发展。本文浅析了逆转录病毒载体、腺病毒载体、慢病毒载体、腺相关病毒载体近年的基础研究、临床应用及前景。随着载体学研究的深入,病毒载体的应用范畴将不断拓展。     

多西环素调控的重组杆状病毒载体Ac-EGFP及Ac-HGF的构建

目的将Tet-On系统与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)或肝细胞生长因子(HGF)共同构建于一新型重组杆状病毒载体,并以不同浓度的多西环素(DOX)调控EGFP及HGF表达。方法酶切重组质粒pFast-Tet、pTRE-EGFP和pTRE-HGF,回收目的片段后连接pFast-Tet,分别转化含有AcMNPV Bacmid和helper质粒的DH10Bac感受态细胞,筛选后提取Bacmid DNA并鉴定(命名为Ac-EGFP和Ac-HGF)。将Ac-EGFP和Ac-HGF转染骨髓间充质干细胞,加入不同浓度的DOX调控EGFP(DOX浓度为0、200、500、1000ng/mL)和HGF(DOX浓度为0、10、100、500、1000、1200ng/mL)的表达。在荧光显微镜下观察EGFP的表达,用ELISA法检测HGF的表达量。结果经鉴定EGFP、HGF与Tet-On系统成功构建在同一杆状病毒载体,且在骨髓间充质干细胞中具有较高的转染率。在较高浓度DOX调控下改造后的重组杆状病毒可高表达EGFP和HGF,低浓度或无DOX时表达量逐渐减低。结论本研究证实可将Tet-On系统与EGFP或HGF共同构建于一新型重组杆状病毒载体,改造后的重组杆状病毒能稳定、高效转染骨髓间充质干细胞,不同浓度的DOX可调控EGFP及HGF的表达,无DOX时呈低本底。     

IFNα1b联合阿德福韦酯治疗慢性乙型病毒性肝炎疗效观察

【目的】观察干扰素αlb（IFNαlb）联合阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎（CHB）的效果。【方法】CHB患者80例,分为联合治疗组42人和对照治疗组38人。观察两组患者的肝功能、HBVDNA水平、乙肝病毒标志物的变化及不良反应,所有患者均随访1年。【结果】联合治疗组的完全应答率、HBeAg的阴转率及HBV-DNA阴转率均明显高于对照治疗组;随访结束时联合治疗组的完全应答率、HBeAg的阴转率及HBV-DNA历转率仍明显高于对照治疗组;不良反应一般不需作特殊处理,并能很快恢复正常。【结论】】FNαlb联合阿德福韦酯对HBV的复制有明显的抑制作用,可加速乙肝患者HBeAg自然阴转过程,是治疗慢性乙型藕毒性肝炎有效且安全的方法。     

放射性核素全身骨显像诊断多发性骨髓瘤的临床意义

目的探讨放射性核素全身骨显像在诊断多发性骨髓瘤中的应用，为临床诊断提供指导性建议。方法研究对象为2004年～2008年在我院就诊的48例MM患者，对所有患者同时进行核素骨显像和X线摄片检查，比较两者之间的差别并进行统计学分析。结果在所有48例多发性骨髓瘤患者中，骨显像阳性者为43例，阳性率89．6％，X线检查阳性者39例，阳性率为81．3％，差别没有统计学意义（P〉0．05）。骨显像检查共发现病灶148处，其中放射性浓聚灶135处，占91．2％，放射性稀疏或缺损区13处，占8．8％。骨显像发现肋骨异常的概率为20．12％，高于X线的14．08％，差别有统计学意义（P〈0．05），其他异常部位两种检查方法比较差别无统计学意义（P〉0．05）。结论骨显像作为一种全身性的显像方式，具有灵敏度高等优点，可以做到对MM早发现、早治疗。值得在临床上进一步推广应用。     

α干扰素治疗慢性乙型病毒性肝炎疗效的临床观察

目的观察α-2b干扰素治疗慢性乙型肝炎(CHB)的疗效。方法 CHB患者123例,分为干扰素治疗组和保肝治疗组。观察2组患者的肝功能、乙肝病毒标志物的变化及α-2b干扰素的不良反应。结果α-2b干扰素治疗组的完全应答率、ALT复常率、HBeAg的阴转率及HBV-DNA阴转率均明显高于保肝对照组;治疗前高ALT水平、HBV-DNA≤106copies/mL的患者疗效更好;年龄、性别与疗效也有关系;α-2b干扰素不良反应一般不需作特殊处理,并能很快恢复正常。结论α-2b干扰素对HBV的复制有一定的抑制作用,可加速乙肝患者HBeAg自然阴转过程,是治疗慢性乙型病毒性肝炎有效且安全的药物。     

杆状病毒介导肝生长因子在兔骨髓间充质干细胞中的调控表达

目的：建立转染高效可调控的携带肝生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）为目的基因的重组杆状病毒vAcrtTA2s-Ptight-HGF,并探寻其在转染骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs）后的最佳诱导浓度。方法：用转基因的方法构建重组杆状病毒vAcrtTA2s-Ptight-HGF,随后转染BM-MSCs,用ELISA和Western blot检测不同浓度强力霉素（doxycycline,DOX）诱导体外培养兔BM-MSCs分泌的HGF浓度。结果：构建了高效可调控重组杆状病毒vAcrtTA2s-Ptight-HGF,并且成功转染兔BM-MSCs,用系列浓度DOX诱导时ELISA和Western blot均检测到BM-MSCs中HGF的表达有DOX诱导剂量依赖关系并且连续7 d持续表达,且实验组的HGF的表达量明显高于对照组（P<0.001）。结论：成功构建一次性转染、高效可调控的重组杆状病毒vAcrtTA2s-Ptight-HGF,并实现对HGF表达的调控,当DOX诱导浓度为1 μg/ml时为其体外最佳诱导浓度。