人I型丙氨酸氨基转移酶的可溶性表达及抗血清反应模式

目的克隆表达重组人I型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)蛋白及制备抗血清,探讨建立ALT1特异性检测方法思路.方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人ALT1 cDNA,插入pGEX-2T,构建原核表达载体pGEX-2T-ALT1,并转入大肠杆菌进行表达.SDS-PAGE,活力测定和活性染色鉴定表达产物.表达产物免疫小鼠所得抗血清对天然ALT1, 重组ALT1及重组ALT2进行Western blot分析.结果重组质粒测序和酶切结果显示ALT1基因已经成功克隆到pGEX-2T载体.SDS-PAGE和活性染色表明所表达蛋白具有天然活性.抗ALT1血清除识别重组ALT1外,还可识别天然蛋白和重组ALT2. 结论重组人ALT1得到高效可溶性表达.用目前方法制备的抗血清特异性不高,如建立ALT1的免疫学检测方法需要采用特异性识别ALT1的抗体,以避免交叉反应引起的假性升高.     

儿童进行性脊肌萎缩症的分子诊断(附10例报告)

目的 对10例儿童进行性脊肌萎缩症(SMA)患者进行分子诊断.方法 提取10例SMA患者和其19例家系成员(患者的父母)以及20例健康正常人对照的基因组DNA.常规PCR扩增SMN基因第7外显子(E7),PCR产物经Dra I酶切后,行琼脂糖凝胶电泳.同时行特异性PCR扩增SMN1和SMN2的E7.结果 常规PCR中,所有10例SMA患者的SMN1 PCR产物(189bp)全部被Dra I切割,所有39例对照组成员(包括19例家系成员和20例健康正常人对照)的SMN1 PCR产物仅有部分可被Dra I切割.在位点特异性PCR中,所有10例SMA患者只有SMN2的E7扩增,所有39例对照组成员既有SMN1、也有SMN2的E7扩增产物.结论 所有10例SMA患者可见SMN1纯合性缺失.所有39例对照组成员未见SMN1纯合性缺失.本研究采用PCR-RFLP和位点特异性PCR相结合,相互佐证,形成一套特有的分子诊断方法,确保了诊断的准确性.     

常染色体异常三个家系

家系1 患儿，男，1岁．面容特殊：斜视，眼眶深陷，睑裂倾斜，跟距过宽．瞳孔偏心靠近虹膜的内缘。眉毛紧皱，嘴向下倾斜：颧骨前突，不能坐立，不能行走，手掌与手指相比过长，指间关节异常。智力发育迟缓，语言发育迟缓最为明显。父母非近亲婚配，结婚3年．孕期无毒物及有害物质接触史，细胞遗传学检查：分别取患儿及其父母外周血行染色体核型分析，     

一种提高ENA抗体检测灵敏度的方法

<正> 可提取性核抗原(ENA)抗体的检测有助于诊断结缔组织病,尤其是其中的抗Smith(Sm)抗体和抗核糖核蛋白(RNP)抗体的检测,对系统性红斑狼疮和混合结缔组织病的鉴别诊断很有价值。目前,ENA抗体的检测多采用对流免疫电泳法(CIE),该法敏感度较低。我们对CIE法作了改进,采用琼脂糖加聚乙二醇(PEG)和染色法,沉淀线清晰可辨。阳性率比原法有了明显的提高。现介绍如下。 材料和方法 一、抗原:ENA抗原为小牛胸腺提取     

三个家系两代人常染色体异常

例1 患男，1岁。面容特殊。斜视，眼眶深陷。睑裂倾斜，眼距过宽，瞳孔偏心靠近虹膜的内缘。眉毛紧皱。嘴向下倾斜。额骨前突，不能坐立。不能行走，手掌与手指相比过长，指间关节异常。智力发育迟缓，语言发育迟缓最为明显。父母非近亲婚配，结婚3年，孕期无毒物及有害物质接触史。细胞遗传学检查：分别取患儿及其父母外周血行染色体核型分析。     

肾上腺脑白质营养不良的产前分子诊断

肾上腺随白质营养不良（adrenoleukodystmphy，ALD）是一种主要侵犯大脑白质、肾上腺等器官的X-连锁隐性遗传病。根据临床表现和发病时间，可将ALD分成儿童随型、肾上腺脊髓神经病型等7种表型。各型的共同特征是极长链饱和脂肪酸（very long chain fatty acids,VLCFA）在体内蓄积，引起大脑白质脱髓鞘、肾上腺功能不全等病理改变。其致病基因定位于染色体xq28，称ABCD1基因。ALD的病程呈进行性发展，预后不良，尤以儿童大脑型为甚，患者发病后的平均生存时间仅为3年左右。到目前为止，对ALD尚无效果确切的治疗手段，也无法逆转中枢神经系统损害。因此，对ALD携带者所怀胎儿进行产前诊断。防止携带ABCD1突变的婴儿出生，提高人口素质，有重要的意义。我们于2003年和2004年分别对2个ALD家系实施了产前分子诊断。     

断离鼻锥再植成功1例

患者 ,女 ,37岁。因被人咬掉鼻子 1ｈ伴疼痛、出血 ,于 2 0 0 0年 1 1月 1 0日急诊入院。约 2 0ｍｉｎ后由他人送离体鼻组织来院。检查 :鼻尖、鼻柱、左右各一半鼻翼缺如 ,鼻部皮肤、鼻腔粘膜断裂 ,断缘不整齐 ,断面有活动性出血 ,无异物 ,无明显感染征象 ,鼻背皮肤齿状裂痕。鼻中隔软骨及鼻翼软骨撕断 ,部分裸露。离体鼻组织呈不规则棱形 ,约 1 .5ｃｍ× 1 .6ｃｍ× 1 .7ｃｍ× 1 .9ｃｍ ,边缘不整齐 ,与残留鼻创缘吻合 ,断面粉红色 ,皮肤及粘膜色白 ,局部青紫色 ,温度低于正常。鼻腔无脓性分泌物及新生物 ,有新鲜血痂附着 ,通气可。迅速、…     

三个肾上腺脑白质营养不良家系的产前分子诊断

目的对3名来自不同家系的肾上腺脑白质营养不良(ALD)携带者所怀胎儿进行产前分子诊断。方法在采用STR位点分析方法排除母体基因组DNA污染后,分别应用变性高效液相色谱和DNA测序方法对3个胎儿的羊水基因组DNA进行分析。结果胎儿1和携带者1的分析结果完全一样,均出现洗脱双峰,并经DNA测序证实,该胎儿为S108X突变携带者；胎儿2、胎儿3和正常对照一致,均为洗脱单峰,经DNA测序证实,这两个胎儿的基因组DNA上均不存在基因突变(R617C突变和1801．02del AG突变)。结论胎儿1带S108X突变,为ALD携带者；胎儿2不带R617C突变,为正常纯合子；胎儿3不带1801—02del AG突变,为正常半合子。     

10例性腺发育不良患者细胞遗传和分子遗传学研究

目的为了分析10例性腺发育不良患者细胞遗传学和分子遗传学特征。方法采用染色体核型分析和多重PCR技术,扩增Y染色体长臂AZF区域序列标签位点（STS）即AZFa区sY84、sY86,AZFb区sY127、sY134,AZFd区sY152．AZFc区sY254、sY255,Yq12sY160（DYZ1）和短臂sY14（SRY）9个位点。结果1例染色体核型分析为46,X．del（X）（q13）的女性和1例45,X／46,X,min的女性,均未扩增出SRY及Y染色体AZFa、b、c区域位点。1例染色体核型为46,XX男性和1例46,X,-Y,＋min的男性患者仅SRY基因扩增阳性,AZFa、b、c区域位点均缺失;2例染色体核型分析为46,XY女性和1例染色体核型分析47,XYY的女性患者不仅SRY基因扩增阳性,而且Y染色体AZFa、b、c区域多个位点扩增阳性。1例染色体核型为46,X,del（Y）（q11）的男性患者,Y染色体AZFb、c区域多个位点的缺失,1例染色体核型为46,X,de1（Y）（q12）,Yq12sY160（DYZ1）缺失。结论染色体核型分析和Y染色体微缺失检测是辅助诊断性腺发育不良的重要方法。     

AZF缺失患者Y染色体断裂点定位分析

目的 分析导致无精子因子区域(azoospermia factor,AZF)缺失的Y染色体断裂的特点.方法 在272例无精子症、240例严重少精子症患者进行Y染色体AZF微缺失筛查基础上,对筛查发现大片段缺失的49例患者,选择AZFa、AZFb、AZFc区23个序列标签位点(sequence tagged site,STS),对断裂点进行定位分析.颖有无精子症缺失基因家族(deletedin azoospermia,DAZ)、基因部分拷贝缺失病例进行单核苷酸多态性(single nuecleotide varians,SNV)缺失分析以确定DAZ基因的拷贝数.结果 6例AZFb+C缺失患者,1例为sY98/sY1206缺失,4例为P5/P1远端重组,1例为P4/P1远端重组.3例筛查发现AZFb区缺失患者,1例为P5/P3缺失,2例为P5/P1近端重组,伴有DAZ1、DAZ2拷贝缺失.40例AZFc区全缺失患者,均为b2/b4同源重组.部份AZFb、AZFb+c缺失患者,睾丸穿刺活检发现精子生成减少或精子成熟障碍.结论 对Y染色体AZF大片段缺失断裂点的大致定位有利于判断缺失发生机制,进而分析丢失的生精相关基因拷贝性质与数量,以评价其与生精障碍表型之间的关联.