LAMP和PCR法检测痢疾志贺菌的特异性和灵敏性比较

目的建立环介导等温扩增技术（LAMP）快速检测痢疾志贺菌,并对其特异性、灵敏度与传统PCR进行比较。方法以痢疾志贺菌侵袭性质粒抗原H基因（ipaH）为靶序列,设计6条特异性引物（内引物、外引物和环引物各2条）,优化LAMP反应体系及反应条件,检测LAMP反应的灵敏度、特异性及模拟样品,同步与PCR进行比较。结果 LAMP法和PCR均能特异性地扩增出志贺菌靶DNA,而其他非志贺菌均未扩增出特有条带。检测细菌纯培养物和模拟食品的灵敏度LAMP法分别为5.3×101cfu/ml、6.8×101cfu/ml,PCR法分别为5.3×102cfu/ml和6.8×102cfu/ml。结论利用LAMP技术,可快速、灵敏、简便地检测痢疾志贺菌,与PCR方法比较,特异性强、操作简便、检测成本低、耗时短,有望发展成为快速检测痢疾志贺菌的有效手段。     

抗人CD25嵌合抗体的稳定表达及鉴定

目的:构建抗人CD25嵌合抗体稳定细胞株,并对表达产物进行相关鉴定。方法:构建CD25嵌合抗体稳定表达质粒VEC-VTacH和3.3-VTacL并稳定转染CHO-DHFR-细胞,经选择性培养、有限稀释法克隆和MTX加压选择后扩大培养构建的工程细胞,Protein A纯化回收目的抗体后分别进行质谱分析、蛋白质N端测序和平衡解离常数(Kd)的测定。结果:CD25嵌合抗体稳定细胞株的抗体表达水平约为3.74～7.07μg/ml,质谱分析结果表明其含有鼠源成分和人源成分,蛋白质N端测序表明其与亲本抗体N端序列完全一致,其Kd为2.35×10-10mol/L,而亲本抗体的Kd为1.88×10-10mol/L。结论:抗人CD25嵌合抗体保留了亲本抗体的抗原结合活性和亲和力。     

颅内电极脑电图监测对枕叶致痫灶的定位价值

目的：探讨颅内电极埋藏后视频脑电图（V-EEG）监测对枕叶致痫灶的定位价值。方法：对19例经无创方法难以定位致痫灶的药物难治性枕叶癫痫（OLE）病人,开顷埋置硬脑膜下条状、栅格状电极和深部电极,行V-EEG监测,记录发作间期及发作期脑电图（EEG）变化,确定发作起源区,再手术切除致痫灶。结果：16例埋置硬脑膜下电极,3例联合应用硬脑膜下电极和深部电极。颅内电极V-EEG监测36～192h（平均68h）,均记录到发作间期痫样放电及发作期EEG情况。行枕叶致痼灶切除术后,平均随访24个月,13例发作消失（EngelⅠ级）,4例偶发（EngelⅡ级）,2例发作减少75％以上（EngelⅢ级）。结论：在致痫灶定位困难的顽固性OLE中,开颅埋藏硬脑膜下电极、深部电极,行V-EEG监测,根据癫痫发作初始期异常放电的节律和范围,可精确定位致痫灶。     

补肾健脾方干预PPD 诱导小鼠T 细胞耗竭的实验研究

目的:研究结核分枝杆菌抗原持续刺激致T 细胞功能耗竭的机制,探究补肾健脾方对T 细胞功能耗竭的治疗作用。方法:利用BCG 初免,结核菌素纯蛋白衍化物(PPD)持续刺激C57BL/6 小鼠,模拟结核分枝杆菌抗原在病人体内持续存在所造成的慢性感染病理过程,构建T 细胞耗竭模型。在T 细胞耗竭模型基础上,给予补肾健脾方灌胃治疗。治疗3 周后检测不同实验组细胞免疫水平,包括利用流式细胞术检测脾脏CD4+和CD8+ T 细胞数目,以及细胞表面抑制性受体PD-1 的表达水平;利用ELISA 检测脾脏淋巴细胞分泌IL-2 和IFN-酌的水平;利用CFU 菌落计数检测肺脏BCG 攻击后的抗感染免疫能力。结果:与抗原短暂刺激组相比,免疫耗竭未治疗组CD4+和CD8+ T 细胞数目显著下降(P<0.05),细胞表面PD-1 表达水平显著增高(P<0.01);脾淋巴细胞分泌IL-2 和IFN-γ明显降低(P<0.01);小鼠经BCG 攻击后,抗感染保护效果显著下降(P<0.01)。经补肾健脾方治疗后,脾脏CD4+和CD8+ T 细胞数目得到明显恢复(P<0.05),CD4+ T 细胞PD-1 的表达得到显著降低(P<0.01);脾淋巴细胞分泌IL-2 和IFN-酌的水平明显增高(P<0.05);小鼠抗感染的能力显著性增强(P<0.01)。结论:通过结核抗原PPD 持续刺激成功构建T 细胞耗竭模型;补肾健脾方能逆转抗原持续刺激导致的小鼠T 细胞功能耗竭,可为临床治疗肺结核T 细胞功能耗竭提供参考。     

丙型肝炎患者HCV-RNA载量与免疫球蛋白及补体表达水平的相关性

目的 探讨丙型肝炎患者HCV-RNA载量与免疫球蛋白及补体表达水平的相关性.方法 收集2014年6月至2016年5月西安市第九医院收治的丙型肝炎患者132例作为研究对象,对其进行HCV-RNA病毒载量检测,按照检测结果将其分为低载量、中载量以及高载量组,对各组进行免疫球蛋白IgA、IgG、IgM检测以及补体C3、C4检测,分析丙肝患者病毒载量与免疫球蛋白及补体水平的相关性.结果 丙型肝炎患者IgA、IgG、IgM表达量分别为[(3.95±0.72) g/L,(19.33±4.64) g/L及(2.93±0.50)g/L],高于健康对照组的表达量[(2.13 ±0.51) g/L,(11.25±2.63) g/L及(1.21±0.35) g/L],C3、C4表达量分别为[(0.82±0.19) g/L及(0.13±0.08)g/L],低于健康对照组[(1.20±0.31)g/L及(0.27±0.11)g/L],差异有统计学意义(P＜0.05).不同病毒载量患者免疫球蛋白及补体表达水平存在差异(P＜0.05).Pearson相关性分析结果显示,HCV-RNA病毒载量与血清免疫球蛋白表达水平呈正相关,与血清补体表达水平呈负相关(P＜0.05).结论 不同病毒载量丙型肝炎患者具有不同的免疫球蛋白及补体表达水平,应当尽量控制HCV-RNA病毒载量,从而减少免疫损伤.     

抗人CD25嵌合抗体基因的构建及其瞬时表达研究

目的:构建抗人CD25嵌合抗体基因并在哺乳动物细胞中进行瞬时表达和初步鉴定。方法:采用RLM-RACE法克隆WuTac抗体可变区和信号肽序列,并利用基因拼接法构建嵌合抗体基因。用脂质体法瞬时转染三种哺乳动物细胞,并使用ELISA、FCM、WB、Dot blot和免疫荧光法进行检测。结果:成功克隆WuTac抗体可变区和信号肽序列,并构建了抗人CD25嵌合抗体表达质粒。瞬时转染结果表明所表达的嵌合抗体保留了亲本抗体WuTac的抗原结合力。结论:成功构建了抗人CD25嵌合抗体基因,为其进一步研究打下基础。     

红花多糖诱导巨噬细胞M1型极化及抑制黑色素瘤细胞侵袭迁移的实验研究

目的 探讨红花多糖(safflower polysaccharide,SPS)调控巨噬细胞极化对黑色素瘤细胞迁移与侵袭能力的影响与分子机制.方法 SPS作用巨噬细胞后的上清作为条件培养基(conditioned medium,CM)用于对黑色素瘤细胞活力变化、迁移与侵袭影响的实验.CCK-8法检测SPS及CM的细胞毒性...     

量子点在病毒检测中的应用研究进展

病毒检测在临床疾病诊断、食品安全、进出口检验检疫和生化武器检测等领域都有着广泛应用,现代分子诊断技术通过对蛋白、核酸或多肽等靶标生物分子进行检测实现对病毒的微量、快速检测,而生物标记技术是分子诊断不可或缺的研究手段…,常见的生物标记物有放射性标记物、酶标、显色标记物和荧光标记物等,其中荧光标记物检测灵敏度高、易于定量检测而备受关注,传统的有机荧光染料易于淬灭,荧光稳定性差等原因,限制了其应用范围。     

橙皮素调控miR-182-5p对口腔鳞癌BcaCD885细胞迁移和分泌IL-6、IL-8的影响

目的:研究橙皮素调控miR-182-5p对口腔鳞癌BcaCD885细胞迁移和分泌IL-6、IL-8的影响.方法:以0、20、40、80、160 μmol/L橙皮素处理口腔鳞癌BcaCD885细胞,CCK-8实验检测细胞增殖活性.以0、40、80、160 μmol/L橙皮素处理口腔鳞癌BcaCD885细胞,Transwe...     

PET／CT显像的图像融合精度测试研究

目的:通过模拟和临床实际应用状态,测试3D全身显像方式PET/CT显像图像融合精度.方法:用测试模型及其配套的22Na固体点源,模拟人体宽度和厚度,采集点源PET/CT图像数据;然后将相同的点源置于检查床两测的床垫下,在检查床无负重和负重85 kg时,分别采集PET/CT图像数据.重建图像后,在PET/CT融合图像的三个断层面分别寻找CT和PET点源图像的中心,测量二者中心偏差的mm数,即PET/CT图像融合精度.结果:PET和CT两种模态融合图像肉眼可见较明显的错位.模型点源PET/CT融合图像最大偏差为(4.25±0.26)mm、检查床无负重时为(3.96±0.26)mm,检查床负重85 kg时为(5.36±0.26)mm.结论:本研究方法可以比较精确地测量PET/CT图像融合精度,并有效地指导PET/CT仪器的验收和故障检测等.