MANF蛋白表达水平与肝纤维化程度的相关性研究

目的：探讨中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(MANF)蛋白在慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者肝纤维化发生发展中的作用及其与临床特点的相关性。方法采用相对和绝对定量同位素标记( ITRAQ)蛋白质组学和免疫组化法检测肝脏穿刺组织中MANF蛋白的表达,分析其表达水平与肝脏炎症纤维化分期的关系;采用实时荧光定量PCR技术检测正常对照( NC)、乙肝病毒携带者( ASC)、慢性乙型肝炎患者( CHB)及乙肝后肝硬化患者( LC)外周血白细胞中MANF mRNA的表达水平,分析其与不同阶段慢性HBV感染者的临床病毒学和生化学指标的相关性。结果 MANF蛋白主要在肝细胞质中表达,其表达水平随着肝脏炎症及纤维化的程度加重而升高。 NC 组、ASC 组和 CHB 组分别与LC组比较,MANF mRNA的表达差异均有统计学意义( P<0．01)。 MANF mRNA 的表达水平在乙肝病毒表面抗原(HBsAg)<1．5×106 IU/L、(1．5×106~2．0×107) IU/L和>2．0×107 IU/L 3组间差异有统计学意义(P<0．05);在乙肝病毒e抗原( HBeAg)阳性组与阴性组之间差异有统计学意义(P<0．01);在胆红素正常组与异常组之间差异有统计学意义( P <0．01)。结论 MANF 蛋白可能参与了慢性HBV感染者肝纤维化的发生发展,并与其临床特点相关。     

人SAMHD1基因核心启动子区域的初步鉴定和分析

目的 鉴定人不育-α-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1 (SAMHD1)基因的核心启动子区域,研究SAMHD1的转录调控机制.方法 从HepG2细胞中提取基因组DNA,PCR扩增SAMHD1基因翻译起始位点上游937、667、553、399 bp片段.将扩增出的4个片段连入pMD19-T载体,双酶切鉴定后将DNA条带切胶回收,再连入pGL3-Basic载体中,双酶切及DNA测序鉴定.将包含有4个片段的荧光素酶表达载体与pRL-TK共转染HepG2细胞,荧光素酶报告基因活性检测并分析4个片段的启动子活性.5'RACE鉴定SAMHD1在HepG2细胞中的转录起始位点.结果 电泳结果显示已经从HepG细胞中提取出基因组DNA.PCR扩增后电泳结果显示已经扩增出937、667、553、399 bp片段.双酶切后电泳结果显示成功将扩增出的4个片段连入pMD19-T载体.双酶切及DNA测序鉴定已成功构建荧光素酶表达载体pGL3-937、pGL3-667、pGL3-553和pGL3-399.荧光素酶报告基因活性检测显示SAMHD1核心启动子区域位于0～-399区域(ATG前一个碱基为-1).5'RACE结果显示SAMHD1在HepG2细胞中转录起始位点位于-101.结论 SAMHD1的核心启动子位于翻译起始位点上游-101～-399区域,为深入研究肝细胞中SAMHD1转录调控机制奠定了基础.     

几种中药有效部位抗炎作用的比较

目的比较研究木瓜总苷、白芍总苷(TGP)、雷公藤多苷(TWH)以及青藤碱对角叉菜胶诱导大鼠足肿胀及大鼠棉球肉芽肿的影响.方法用角叉菜胶诱导大鼠足肿胀;足爪容积测定法测定足爪肿胀度;棉球包埋法诱导大鼠棉球肉芽肿并测定肉芽肿的净重.结果治疗给药木瓜总苷120、240 mg/kg分别在致炎后5 h、3 h开始起效;TWH 40 mg/kg在致炎后3h开始起效,TGP 50 mg/kg和青藤碱50 mg/kg在致炎后5 h发挥疗效,四种中药有效部位疗效都持续到致炎后7h.木瓜总苷60、120、240mg/kg、TWH 40mg/kg、青藤碱50 mg/kg治疗给药对大鼠棉球肉芽肿均有抑制作用,TGP 50 mg/kg治疗给药对大鼠棉球肉芽肿无抑制作用.结论木瓜总苷、TWH、TGP、青藤碱都具有抗炎作用,但作用特点不同,表现在剂量和起效时间等不尽相同.     

反相高效液相色谱法测定原料药及注射剂中丹皮酚的含量

目的　建立反相高效液相色谱法 (RP HPLC)测定原料药及注射剂中丹皮酚 (paeonol,Pae)的含量。 方法　采用LichrospherC18柱 (4 6mm× 2 5 0mm ,粒径 5 μm) ;以甲醇乙腈水 (30∶4 0∶30 )为流动相 ;流速为 0 8ml·min-1;检测波长为 2 74nm ;柱温为 2 5℃ ;进样量为 2 0 μl。结果　Pae的线性范围为 0 0 2～ 2 5 6 0mg·L-1,回归方程为 ^Y =3772 5 2 5 8X - 0 74 74 ,r =1 0 0 0 0 ,n =5 ;平均回收率为99 87% ;日内、日间变异均小于 4 %。结论　该法简便、快速 ,可用于Pae及其制剂的含量测定。     

重组人内抑素对大鼠佐剂性关节炎继发性炎症的抑制作用

目的　观察重组人内抑素对大鼠佐剂性关节炎 (AA)继发性炎症是否有抑制作用。方法　用足容积测量仪检测足爪容积并对关节炎症程度进行目测评分 ;HE染色检测非致炎侧膝关节的病理改变。结果　福氏完全佐剂 (CFA)致炎后d 1 0 ,继发性炎症出现 ,同时给予不同剂量的内抑素(0 1、0 5、2 5mg·kg- 1 ·d- 1 ,sc) ,连续 7d。结果发现 ,内抑素 2 5mg·kg- 1 对AA大鼠的继发性足肿胀有明显的抑制作用 ;致炎后d 30病理检查显示AA大鼠的关节内滑膜增厚 ,滑膜衬层细胞增生并伴有新生血管形成 ,滑膜细胞有不同程度的脂肪变性 ;软骨及骨遭到破坏 ,且透明软骨内基质降解及新生血管形成。给予不同剂量的内抑素对AA大鼠关节组织的上述病理改变有不同程度的改善作用 ,内抑素 2 5mg·kg- 1 对AA大鼠的关节病理损伤有完全的抑制作用 ,同时可见滑膜组织内大量胶原沉积和滑膜细胞的脂肪变性。结论　重组人内抑素对大鼠佐剂性关节炎的继发性炎症有显著的抑制作用 ,并能阻止关节炎的病理改变     

白芍总苷对小鼠系统性红斑狼疮样改变的保护作用

目的　观察白芍总苷 (TGP)对空肠弯曲菌CJ S13 1诱导的小鼠SLE样改变的保护作用。方法　采用空肠弯曲菌CJ S13 1和CFA混合免疫动物 ,诱导小鼠SLE样改变。结果　TGP 5 0 ,10 0 ,2 0 0mg·kg-1·d-1× 2 8d ,ig能部分或完全拮抗血清IgG型自身抗体水平的升高 ,抑制ConA及LPS诱导的淋巴细胞增殖反应的增强和IL 1生成的增多。结论　一定剂量的TGP对小鼠SLE样改变具有一定的保护作用     

β-淀粉样多肽25～35片段诱导的大鼠学习记忆功能障碍

目的　诱导能模拟人类Alzheimer病 (AD)的大鼠病理模型 ,用于该病的病理机制和治疗药物的研究。方法　采用双侧海马内一次性注射 β 淀粉样多肽 2 5～ 35片段(Aβ2 5～ 35)诱导大鼠AD模型 ;行为测试采用跳台法、穿梭法和Morris水迷宫法 ;病理检测采用HE染色、刚果红染色和银染。结果　跳台法、穿梭法和Morris水迷宫法试验结果提示海马内注射Aβ2 5～ 35可引起大鼠主动和被动回避性反射及空间分辨力降低 ;病理检查发现皮质和海马神经元数量减少、退变 ,皮质下血管淀粉样变及脑内出现纤维蛋白丝状物。结论　海马内注射Aβ2 5～ 35诱导的大鼠学习记忆功能低下模型在功能和形态上类似于AD     

松果体切除及褪黑素对垂体─肾上腺轴的影响

松果体切除后ｄ１４，大鼠垂体促肾上腺皮质激素细胞呈现功能活跃状态：核仁明显，粗面内质网扩张，高尔基复合体池变宽，囊泡增大；肾上腺皮质束状带细胞出现功能受抑制表现：胞体变小，线粒体及滑面内质网减少，并伴有血清皮质酮水平下降。褪黑素（１０μｇ·ｋｇ－１·ｄ－１，×７ｄ）对肾上腺皮质束状带细胞有刺激作用：胞体变大，线粒体及脂滴增多，滑面内质网更丰富；并且能使血清皮质酮水平升高，对松果腺切除引起的皮质酮水平下降有拮抗作用。提示松果体对垂体─肾上腺轴有调节作用。     

松果体对正常及佐剂性关节炎大鼠免疫细胞的影响

采用松果体切除（ＰＸ）及腹腔注射外源性褪黑素（ＭＴ）的方法，观察松果体对正常及佐剂性关节炎（ＡＡ）大鼠免疫细胞的影响。结果发现，ＰＸ后，ＣｏｎＡ及ＬＰＳ诱导的淋巴细胞增殖反应在正常及ＡＡ大鼠明显降低；正常大鼠ＬＰＳ诱导的腹腔巨噬细胞产生的白细胞介素Ｉ（ＩＬ－１）减少，而ＡＡ大鼠的ＩＬ－１明显增加。ＭＴ（１０μｇ·ｋｇ－１）作用则与此相反，并能使ＰＸ引起的免疫指标的改变恢复正常。上述结果表明；松果体对免细胞的功能有调节作用。