MTX对映体耐药A549细胞株中EGFR基因mRNA的表达分析

【摘要】目的探讨表皮生长因子受体（epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR）在氨甲喋呤（methotrexate，MTX）对映体L-（＋）-MTX和D-（-）-MTX耐药A549细胞株中的表达。方法采用RT-PCR方法测定肺癌A549敏感细胞株和15p,moUL、35p,mol／L、55p,mol／L的L-（＋）-MTX和D-（-）-MTXA549耐药细胞株中EGFRmRNA表达情况。结果15μmol／L、35μmol／L、55μmol／LL-（＋）-MTXA549耐药细胞株中EGFR基因表达的mRNA相对含量分别为肺癌A549敏感细胞株的（1．55±0．26）倍、（1．86±0．13）倍、（1．20~0．05）倍。RT—PCR结果显示，A549敏感细胞株和L-（＋）-MTX各浓度A549耐药株均扩增出315bp条带，有EGFR基因表达，而3种浓度的D-（-）-MTX耐药细胞株中EGFR基因不表达。结论MTX诱导耐药后A549细胞株中EGFRmRNA发生变化，且在3种浓度两种对映体细胞株间具有明显的手性差异，MTX可能通过改变EGFR基因启动子的甲基化状态，影响EGFR的表达。     

FQ-PCR技术检测新生儿黄疸患者外周血巨细胞病毒

目的采用实时荧光定量PCR技术同时检测新生儿黄疸患者外周血白细胞和血浆中巨细胞病毒，并分析两者之间的相关性。方法采用0.8％氯化胺（NH4Cl）裂解红细胞法提取新生儿黄疸患者外周血白细胞，然后进行实时荧光定量PCR检测，同时检测血浆中巨细胞病毒。结果79例标本中白细胞和血浆均检出巨细胞病毒7例，阳性率为8．86％；白细胞巨细胞病毒定量平均值为4．16（对数值）；血浆平均值为2．37（对数值），经相关性分析，两者呈正相关（r=0．78）。结论荧光定量PCR检测巨细胞病毒快捷、简便、高效；提取白细胞扩增和血浆水平高度相关。     

实时定量聚合酶链反应动态监测白血病治疗后微小残留病研究

目的建立急性早幼粒细胞白血病(APL)实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测方法,并检测APL治疗后微小残留病(MRD),评价MRD检测的意义。方法应用RQ-PCR对96例APL患者的骨髓标本进行分析,检测PML/RARa融合基因的转录水平。结果 (1)RQ-PCR与传统巢式PCR(RT-PCR)检测结果的差异有统计学意义(P<0.05),提示应用RQ-PCR检测PML/RARa融合基因转录水平的敏感性高于RT-PCR。(2)RQ-PCR可对PML/RARa融合基因进行定量检测,监测患者的PML-RARa融合基因拷贝数水平变化,结果显示初诊时较高,有效治疗后迅速下降,复发时又出现上升,提示若患者在完全缓解(CR)后PML/RARa融合基因拷贝数呈现上升趋势,其复发机率大。结论 RQ-PCR检测作为APL治疗后微小残留病检测的方法,准确可靠,可以判断治疗效果,预测疾病复发,早期给予干预治疗,有重要的临床应用价值。     

细菌性阴道病实验诊断方法的研究进展

细菌性阴道病(BV)是妇科最常见的疾病之一,在健康妇女中BV患病率为18.9%,在妇科门诊有异常阴道分泌物的患者中为43.3%,远远高于阴道滴虫与霉菌感染发病率之和,在性乱人群中检出率为36.7%,在妊娠期患病率为12%～22% [1],但本病患者约10%～50%无临床症状[2],主要依靠实验室诊断.本文参照国内外有关研究文献,就BV的实验诊断方法及其进展作一综述.     

实时荧光定量PCR方法检测乙型肝炎病毒基因型

目的建立一种快速准确的实时荧光PCR方法检测乙型肝炎病毒基因型。用此方法对安徽地区乙肝患者进行检测,了解该地区HBV基因型分布情况。方法首先用实时荧光定量PCR方法对150例安徽地区乙肝患者进行HBVDNA定量检测和分型检测,然后对其中载毒量大于5000IU/mL的113例标本和1例1000IU/mL≤载毒量<5000IU/mL进行测序分型检测,验证所建立方法的准确性,了解安徽地区HBV基因型分布情况。结果150例HBV样本中HBVDNA含量<1000IU/mL30例,分型检测结果均为阴性,对载毒量≥5000IU/mL的样本检出率为97.35%(110/113);对1000IU/mL≤载毒量<5000IU/mL的样本检出率为14.29%(1/7);对全部DNA阳性样本的检出率为92.5%(111/120)。HBV分型检测与HBVDNA测序检测的114例样本中,只要是HBVB基因型、C基因型或B/C混合型,乙型肝炎病毒基因分型检测都能检出来(共111例),其中部分样本经分型检测属于B/C混合基因型,测序结果都是混合基因型中占优势的基因型结果,总体符合率为100%。未能被本法检出的样本共3例,3例样本经测序分型均为D型。120例病毒载毒量≥1000IU/mL乙肝患者中B型病例占51.67%(62/120);C型占29.17%(35/120);B/C混合型占11.67%(14/120)。PCR测序检出为D型3例,占2.5%(3/120)。结论应用TaqMan探针的实时荧光定量PCR方法能快速对我国HBV主要基因型B基因型、C基因型进行检测,结果准确可靠,特异性高。安徽地区的HBV基因型以B型为主,C型次之,亦存在着D型的少数感染病例和B/C的混合感染。     

蛋白质芯片技术在肿瘤标志物筛选及鉴定中的应用

蛋白质芯片技术具有快速、并行、自动化和高通量等特点,能同时对全基因组水平上千种蛋白质进行分析,是蛋白质组学研究的重要手段。蛋白质芯片技术在揭示基因与疾病的关系上优于DNA芯片,已在研究蛋白质的性质、特征、辩识、功能及生物标志物等方面搭起快速准确的桥梁,尤其在肿瘤标志物的筛选和鉴定上取得很大进展。     

实时荧光定量PCR检测巨细胞病毒两种白细胞提取方法对比分析

目的 比较实时荧光定量PCR技术检测巨细胞病毒两种白细胞提取处理方法.方法 对51例新生儿黄疸患者外周血分别进行淋巴细胞分离液法提取白细胞和0.8%氯化胺裂解红细胞法提取白细胞,然后同时进行实时荧光定量PCR检测.结果 51例样本中两种方法均阳性5例,白细胞抽提液法阳性、氯化胺裂解红细胞法阴性2例;白细胞抽提液法阴性、氯化胺裂解红细胞法阳性4例;两者均阴性40例;氯化胺裂解红细胞阳性率法17.64%,淋巴细胞分离液法阳性率13.72%.经统计学分析,两方法阳性率差异无显著性(χ2＝0.5,P＞0.05).结论 氯化胺裂解红细胞法提取白细胞方法简便、可靠,可用于荧光定量PCR检测巨细胞病毒.     

以PCR技术为基础的HPV分型检测研究进展

子宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一,人乳头瘤状病毒（HPV）感染是子宫颈癌发生的必要条件,因而,运用准确高效的人乳头瘤状病毒分型技术进行病毒分型检测,对子宫颈病变的早期发现和预防以及治疗都显得十分重要。目前,HPV分型检测技术几乎完全依赖于以聚合酶链反应（PCR）技术为基础的分子生物学检测手段,其中在国际上被广泛应用的是杂交捕获法、实时荧光定量PCR、直接测序法、HPVDNA基因芯片技术等。     

氨甲蝶呤对映体耐药A549细胞株中叶酰聚谷氨酸合成酶mRNA和蛋白表达

目的 探讨叶酰聚谷氨酸合成酶(FPGS)在氨甲蝶呤(MTX)对映体[L-(+)-MTX和D-(-)-MTX]耐药A549细胞株中的表达.方法 通过FQ-PCR和Western blot法分别测定肺癌A549细胞株和15μmol/L L-(+)-MTX和D-(-)-MTX两种耐药A549细胞株中FPGS mRNA和蛋白表...