高效毛细管电泳技术及其在医学检验中的应用

高效毛细管电泳是90年代最重要的分离分析手段之一,当今分析化学和分析生物化学的公认前沿。该技术十年前首先由Mikkers等采用,随后由Jor-genson和Lukacs进一步发展,现已在生物工程、医药、环保、食品检验及生命科学和化学很多其他领域显示了极其重要的应用前景,是人类进入纳米时代一种有重要潜在价值的手段。 高效毛细管电泳主要由5个部分组成,即毛细管柱、进样系统、高压系统、检测系统和数据收集系统。 与通常分析方法相比,高效毛细管电泳有很多优点,如分析速度快、准确,操作简便,灵敏度高,分析成本低等。其中最显著的特点是该技术分析范围广泛,从小分子或离子到生物大分子均可分析。到目前为止,高效毛细管电泳可以分成7种分离模式:(1)毛细管区带电泳,(2)胶束电动色谱,(3)毛细管凝胶电泳,(4)毛细管等电聚焦,(5)毛细管等速电泳,(6)毛细管电色谱,(7)亲和毛细管电泳。 高效毛细管电泳已开始对医学检验产生显著的影响,该技术不仅用于常规项目的分析,而且用于某些特殊项目的检验。其自动化、快速及高效分离的特性使其开始替代某些繁琐的常规方法和作为高效液相色谱的补充。 本文简要回顾高效毛细管电泳的发展史,仪器结构、特点,分离模式及目前在医学检验中的应用情况,     

一种检测细菌性阴道病方法的建立及临床评价

目的评估一种国内自主建立利用唾液酸酶检测细菌性阴道病（BV）方法的临床应用价值。方法比色法探索研发试剂与酶标准品的最佳反应条件,包括底物溶液的pH值和反应的最适温度及时间。采用研发试剂、BV BLUE、临床现用国产试剂盒对临床标本进行检测,判断研发试剂的临床应用价值。结果研发试剂在pH值6.0-6.2、37℃10 min时与酶标准品达到最佳反应,与BV BLUE相比,检出限相同时研发试剂底物用量仅为BV BLUE的1/2.78。临床实验中,研发试剂与BV BLUE对BV的检测效果差异无统计学意义（P=1.000,Kappa=0.905）,符合率为96%。而国产试剂盒与BV BLUE对BV的检测效果差异有统计学意义（P=0.000,Kappa=0.362）,符合率为65%。结论研发试剂可以达到与BV BLUE相同的检出效果,其快速、方便、可信度高且成本较低,优于国内类似产品,更有利于在临床推广和使用。     

毛细管电泳在临床微生物学检验中的应用

毛细管电泳(CE)技术是一种新型高效液相分离技术，具有快速、高效、无污染、可自动化等优点，被广泛用于许多领域。本文分别从CE在细菌、真菌、病毒以及其他微生物分析方法的作用，对CE在临床微生物学检验中的应用进行综述。     

一种新的氨基酸测定衍生化方法

采用２，４－二硝基氟苯作为衍生化试剂，１６种常见人体生理性氨基酸为分析对象区带毛细管电泳为分离模式，建立一种新的氨基酸衍生化方法。系统研究了反应时间、反应温度和ＰＨ值对衍生化反应的影响。同时观察了４℃和２５℃室温下衍生化产物的稳定性情况，结果发现，无论是在４℃冰箱，还是２５℃室温下，氨基酸衍生化产物保存５天。紫外吸收值无明显２。方法的性能指标测定表明，该不的线性在１０－７００μｍｏｌ／Ｌ范围内良好     

实时荧光PCR监测HBV感染患者拉米夫定治疗病毒YMDD变异

目的 建立一种快速准确的实时荧光PCR方法检测HBV感染患者经拉米夫定治疗后YMDD变异情况.方法 首先用PCR法筛选HBV DNA阳性血清157例,HBV DNA含量为2.0×103～8.0×108拷贝/ml,HBV DNA阴性血清30例,然后采用TaqMan探针技术和选择性引物的实时荧光PCR对其进行YMDD变异检测.通过变异株和对照管的循环阈值(cycle threshold,Ct值)差来计算血清中总HBV中的YMDD变异株含量,并用PCR产物直接测序方法随机对69例HBV DNA阳性标本RT区进行基因序列分析,验证所建立方法的准确性.结果 187例接受拉米夫定治疗患者血清标本中,发生YMDD变异88例,其中YIDD变异39例,YVDD变异38例,YIDD与YVDD混合变异11例.突变株的含量为10%～100%.30例HBV DNA阴性血清的C管循环40次,69例测序结果显示68例两种方法检测结果完全相同,符合率为98.55%.结论 采用选择性引物和TaqMan探针技术建立实时荧光PCR方法能快速准确地检测YMDD变异情况,并能检测患者变异株在HBV总量中的比例,为临床使用拉米夫定治疗乙型肝炎病毒感染监测耐药性提供一种有效方法.     

氨甲喋呤对映体诱导白血病BALL-1、CCRF-CEM细胞系耐药后EGFR信号通路相关基因表达分析

目的建立耐氨甲蝶呤(MTX)对映体的人白血病BALL-1和CCRF-CEM细胞,观察其生物学特性,分析不同MTX对映体耐药细胞表皮生长因子受体(EGFR)信号通路相关基因的表达。方法用浓度递增结合低剂量持续诱导的方法建立L-(+)-MTX、D-(-)-MTX耐药细胞并绘制细胞生长曲线,用流式细胞仪检测细胞周期,用RT-PCR法检测各细胞EGFR、KRAS、TGF、PI3K mRNA的表达情况。结果 L-(+)-MTX、D-(-)-MTX耐药细胞自第4日增殖速度明显较亲本细胞慢,而L-(-)-MTX耐药细胞增殖速度明显较D-(+)-MTX耐药细胞慢。与亲本细胞BALL-1、CCRF-CEM相比,两种耐药细胞周期分布中G0/G1期所占比例增加,S期细胞所占比例减少。L-(+)-MTX/BALL-1、D-(-)-MTX/BALL-1间EGFR、K-Ras mRNA差异有统计学意义(P均0.05)。L-(+)-MTX/CCRF-CEM、D-(-)-MTX/CCRF-CEM组间EGFR、K-Ras mRNA差异有统计学意义(P均0.05)。BALL-1细胞组、CCRF-CEM细胞TGF mRNA表达水平差异均无统计学意义(P均0.05),而两种细胞均无PI3K mRNA表达。结论耐D-(-)-MTX细胞增殖能力大于L-(-)-MTX细胞;耐L-(-)-MTX、D-(-)-MTX细胞EGFR、K-Ras mRNA表达存在差异。     

母体外周血及尿液中胎儿核酸检测在产前诊断中的应用

产前诊断及监测对于预防、控制及治疗新生儿疾病具有十分重要的临床意义，传统上普遍采用一些侵入性诊断方法，如羊膜腔穿刺、绒毛膜活检等，对胎儿有造成一定损伤的风险。近年来，陆续在母体外周血及尿液中发现胎儿游离核酸，其具有妊娠早期出现，量随孕期而增加，分娩后又可以迅速清除，且在体外-20℃能低温保存至少4年等特点。     

十种血红蛋白检测仪的精密度和线性范围的评价

选用性能可靠的Hb仪器,是保证其检测质量的必备条件。所用仪器种类繁多,归纳起来一般可分三类:(1)用分光光度计比色测定;(2)Hb专用机;(3)自动血细胞计数仪。为了评价目前常见的Hb仪器性能,我们根据美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS;National Committee For     

多胺的测定方法及其临床应用

多胺(Polyamine,PA)是指三胺的精脒(Spermidine,Spd,又称亚精胺)和四胺的精胺(Spermine,Spm),习惯上人们往往将其前体物二胺的腐胺(Putrescine,Put)亦包括在多胺的范围内.它们都是一些小分子脂肪族非蛋白质含氮化合物,这些物质广泛地分布在原核和真核细胞体内.研究发现,多胺与细胞内DNA、RNA及蛋白质的合成有密切关系,在细胞生长分化活跃的组织内,它们的含量明显增高.     

毛细管区带电泳法拆分氨甲蝶呤手性对映体

目的建立一种快速拆分氨甲蝶呤手性对映体的方法。方法用毛细管区带电泳技术，以中性环糊精作为氨甲蝶呤拆分选择剂，对环糊精浓度、缓冲液浓度、pH值、电泳温度和改性剂浓度等分离条件进行优化。结果用含25mmol／L的羟丙基-8-环糊精、10％的异丙醇、80mmol／L(pH7．4)的磷酸盐缓冲液，在18kV分离电压，毛细管温度25℃时，可使氨甲蝶呤对映体在25min内达到基线分离，分离度为1．51。结论高效毛细管区带电泳法拆分氨甲蝶呤手性对映体简单、快速、经济。