上柱前样品萃取与浓缩技术在毛细管电泳法测定微量氨基酸中的应用

目的建立一种上柱前样品萃取与浓缩技术测定生物样品中微量氨基酸的方法.方法氨基酸与2,4-二硝基氟苯衍生化反应完成后,用10 ml叔丁基甲醚抽提2次,每次5 ml,以除去多余衍生化试剂.然后用6 mol/L盐酸2滴酸化,再用6 ml乙酸乙酯萃取两次,每次3 ml.最后合并上层萃取液,50°C水浴吹干,剩下含氨基酸的残留物用水和乙腈重组,用毛细管电泳法分析定量.结果本法具有操作简单、萃取效率高的特点,平均萃取产率可达99.3%.若用水和乙腈重组残留物至原来体积的十分之一,则柱前浓缩效果可达10倍.结论柱前萃取和浓缩技术操作简单,是一种可用于提高毛细管电泳法测定微量氨基酸灵敏度的方法.     

肿瘤循环RNA的研究进展

外周血循环RNA具有和肿瘤相一致的分子变化,它可能是以RNA-蛋白质复合体的形式存在,直径为0.2μm的微孔滤器可将其浓缩,利用分子生物学技术(RT-PCR)定量检测血清/血浆中RNA分子,可有助于肿瘤的早期诊断、鉴别诊断、有效观察及预后监测。     

合肥地区急性呼吸系统感染病原体的流行病学调查

目的 了解合肥地区急性呼吸道感染(ARI)病原体分布情况和影响其病原体分布的因素.方法 入选2006年5月-2007年4月急性呼吸道感染患者530例,咽拭子法取鼻咽部分泌物和咳出的深部痰标本,采用直接免疫荧光法检测急性呼吸道感染常见病毒抗原,应用荧光定量PCR法检测肺炎支原体、肺炎农原体核酸.结果 530例急性呼吸道感染患者病原体阳性例数421例,检出阳性率为79.43%;腺病毒抗原阳性例数最多为73例,占受检人群13.77%,其后依次为流感病毒A 68例(12.83%),流感病毒B 56例(10.56%),呼吸道合胞病毒48例(9.05%),副流感病毒1 47例(8.86%),副流感病毒3 42例(7.92%),副流感病毒2 33例(6.22%),肺炎支原体32例(6.03%),肺炎衣原体22例(4.15%);冬季病原体检出阳性率最高(85.07%).结论 合肥地区急性呼吸道感染以急性上呼吸道感染多见,约75%是由病毒引起,其中以腺病毒感染最为多见,一年中又以冬、春季节多发,非典型病原体感染不容忽视.     

三种不同血细胞分析仪检测系统检测常规血标本结果的分析

目的通过同一临床实验室不同血细胞分析系统对新鲜血检测结果的比较,了解它们之间对同一标本检测结果的偏差是否在允许误差范围内。方法按照EP9-A文件的要求,以CoulterACT-diffⅡ型血细胞分析仪为比对仪器,以Sys-mexXE-2100型血细胞分析仪、CoulterGen-s型血细胞分析仪为实验仪器,用门诊病人的新鲜血对WBC、RBC、HB、MCV、PLT等项目进行检测,计算相关系数和直线回归方程,对它们之间的预期偏差和相对偏差进行评估。结果在所检测的5个项目中,检测结果的相对偏差都在允许误差范围内。结论当同一实验室内有不同系统的血细胞分析仪,尤其是系统不匹配的情况下,应以其中一台结果可靠的仪器为比对仪器,定期进行比对,了解检测结果的偏差,并进行校准,才能保证实验室内检测结果的准确稳定。     

聚乙烯吡咯烷酮无胶筛分毛细管电泳法分离鉴定DNA片段

目的在非涂层无胶筛分毛细管电泳中探讨一种简便快捷的分离鉴定DNA片段的新方法，以期更好的用于基因诊断。方法在非涂层无胶筛分毛细管电泳中，以聚乙烯吡咯烷酮（PVP）为筛分介质，用pUC19DNA／Mspl（HpaⅡ）标准DNA片段为实验对象，通过调节分离缓冲液中筛分介质的浓度、电泳缓冲液的pH值、运行电压及毛细管的温度，优化出分离26～501bpDNA片段的最适条件。在此条件下分离了Y染色体无精症因子（AZF）区域4个位点的多重聚合酶链反应（PCR）扩增产物。结果PVP作为筛分介质在非涂层无胶筛分毛细管电泳中对于长度〈501bp的短链除了110和111bp外均获得良好的分离效果，且迁移时间与碱基对数目呈良好线性关系。不但对多重PCR扩增产物实施了好的分离，而且依据碱基对数目与迁移时间之间的线性关系，对其大小也进行了精确的推断。结论PVP是一种良好的筛分介质，运用其进行无胶筛分毛细管电泳对于遗传性疾病的诊断将更加快速、准确、简便、灵敏。     

NLR和CRP在疱疹性咽峡炎合并肺炎支原体感染患儿中的应用价值

目的探究中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、C反应蛋白(CRP)在疱疹性咽峡炎合并肺炎支原体(MP)感染患儿中的应用价值。方法选取2017年4月—2019年6月亳州市人民医院疱疹性咽峡炎患儿67例为实验组,同期体检的健康儿童44名作为对照组,根据患儿血清8种呼吸道病原体谱IgM检测结果,将实验组分为MP阳性组和MP阴性组,回顾性分析患儿治疗前后CRP、血常规检测结果。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析NLR和CRP的诊断价值。结果疱疹性咽峡炎患儿治疗后CRP、白细胞(WBC)计数、中性粒细胞百分比(NEUT%)以及计算得出的NLR结果均低于治疗前;而治疗后淋巴细胞百分比(LYMPH%)检测结果高于治疗前;治疗前以上各检测结果以及治疗后CRP、NEUT%、NLR检测结果与对照组相比,差异均有统计学意义(P0.05)。对患儿发病过程中8种血清呼吸道病原体IgM抗体进行检测,发现MP阳性率最高。MP阳性组与MP阴性组相比较治疗前、后NEUT%、LYMPH%、NLR的检测结果差异有统计学意义(P0.05)。NLR和CRP对疱疹性咽峡炎合并MP感染指示作用的ROC曲线的曲线下面积(AUC)分别为0.732和0.527(P0.05)。结论 NLR、CRP不仅在疱疹性咽峡炎合并MP感染患儿的临床诊断中起辅助作用,还可以评价疱疹性咽峡炎患儿的临床疗效。     

临床氨甲蝶呤血药浓度监测及其制剂中对映体成分分析

目的 建立快速检测血清中氨甲蝶呤(MTX)浓度的方法及其对映体在药品制剂中的拆分方案。方法 应用高效毛细管电泳技术,选用直径75μm、总长60cm,有效长度50.5cm未包被的石英毛细管,以75mmol／L的磷酸盐为电泳缓冲液,检测波长为306nm,在25kV电压下快速分离检测MTX;另外利用手性包容剂一环糊精拆分了几种MTX药物制剂中对映体。结果 MTX的出峰时间在10分钟以内,线性范围在1．1～1100．0μmol／L间,最低检出浓度为0．55μmol／L,回收率为88．2％～98．2％,批间精密度为5．4％,批内精密度为4.2％;另在在电泳缓冲液中添加了有机改性剂和环糊精后能将MTX对映体完全拆分。结论 高效毛细管电泳法检测MTX血药浓度具有快速、准确及成本低廉等特点,并可用于其手性对映体的拆分和分析。     

毛细管电泳竞争免疫分析法测定异体干细胞移植患者尿液中小肽分子

目的制备人类白蛋白来源一段小分子多肽的多克隆抗体,建立毛细管电泳检测该小肽方法,为临床早期诊断GVHD提供新的手段.方法人工合成序列为LVRYTKKVPQVSTPTL的16个氨基酸残基的人来源多肽,按兔100μg/kg体重肽抗原标准制成免疫原.按常规方法,每次取2.5 ml抗原悬液,在脊柱两侧皮下和腹股沟处多点注射,分3次免疫动物,制备多克隆抗体.采用异硫氰酸酯荧光素(FTTC)标记小肽抗原,用获得的抗体通过LIF-CE-IA建立该肽的检测方案.结果获得该肽的多克隆抗体的效价为1∶1000,且它与正常人血清、尿液以及牛血清间没有交叉反应;标记抗原出峰时间为5.93 min,抗原-抗体复合物分离时间为6.47 min,所建立的检测方法的线性范围为16～512 ng/ml,最低检出限为10 ng/ml.结论实验所获得的多克隆抗体具有较高的滴度和特异性,所建立多肽的检测方法简便、快速,可为今后临床早期诊断GVHD提供一种新的手段.     

甲氨蝶呤对映体诱导的肺癌A549耐药细胞株中VEGF及其受体表达差异的研究

目的:通过探讨甲氨蝶呤(methotrexate, MTX)对映体耐药细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体表达的差异,以反映MTX对映体耐药细胞在肿瘤中血管形成能力的不同.方法:采用实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)技术分别检测D-(-)-MTX/A549组、L-(+)-MTX/A549组以及亲本细胞组中VEGF、血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR) - 1和VEGFR - 2 mRNA的表达水平;皮下接种裸鼠,成瘤后取瘤体切片,行CD34免疫组织化学检测,新生微血管密度(microvessel density,MVD)计数;采用双层软琼脂克隆形成实验检测D-(-)-MTX/A549组、L-(+)-MTX/A549组细胞的克隆形成率.结果:RFQ-PCR检测结果显示,D-(-)-MTX/A549组VEGF、VEGFR-1和VEGFR-2 Ct值/β-actin Ct值分别为1.668±0.127、1.872±0.133和1.919±0.107,L-(+)-MTX/A549组的比值分别为2.035±0.185、2.221 ±0.157和2.255 ±0.140,亲本细胞组的比值为2.057±0.123、2.291±0.138和2.354±0.131;3种细胞植入裸鼠成瘤后切片免疫标记CD34统计MVD显示亲本细胞为3.29±1.11,L-(+)-MTX/A549细胞为8.00±2.14,D-(-)-MTX/A549细胞为57.88±13.87;软琼脂实验检测克隆形成率发现D-(-)-MTX/A549组为(0.625±0.088)%,L-(+)-MTX/A549组为(1.050±0.095)%,亲本细胞组为(1.250±0.248)%.研究结果显示D-(-)-MTX/A549组和L-(+)-MTX/A549组以及亲本细胞组之间差异均有统计学意义(P<0.05),而L-(+)-MTX/A549组与亲本细胞组之间则差异无统计学意义(P>0.05).结论:D-(-)-MTX诱导肺腺癌A549耐药细胞在肿瘤血管形成上的能力大于L-(+)-MTX诱导的细胞.