一步法实时荧光RT-PCR在快速检测甲型流感病毒中的应用

目的建立一种能快速检测甲型流感病毒的一步法实时荧光PCR方法,对样本进行准确检测。方法以甲型流感病毒特异M基因的保守区为靶区域设计特异引物和TaqMan荧光探针,建立一步法实时荧光RT-PCR方法,并对乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒Long株、冠状病毒OC43及229E、副流感病毒1、2、3型以及季节性流感病毒H1、H3进行检测,验证该方法的特异性和灵敏度,并对临床样本进行检测应用。结果所建立的一步法实时荧光RT-PCR可对甲型流感病毒进行特异扩增,操作方便快速,对H1和H3亚型的最低检出限可达0.01TCID50/ml;对384例临床咽拭子样本的检测准确度达99.5%。结论本研究建立的一步法实时荧光RT-PCR方法可实现对甲型流感病毒快速准确的检测,有助于对临床流感病例的快速诊断。     

毛细管动态涂渍区带电泳模式对DNA分子定量方法的建立及应用

目的在毛细管电泳仪上建立一种定量DNA的方法。方法在聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的"动态"涂渍作用前提下,用pUC19DNA/Mspl(HpaⅡ)为DNA标准品,荧光染料SYBR Green I为DNA嵌合染料,建立了一种定量DNA的方法。结果在0.5~500 ng/mL范围内方法具有良好的线性,相关系数r2为0.991 8,按信噪比S/N=3,本方法最低检测限为0.5 ng/mL。利用本方法好的线性、灵敏度和重现性,我们成功定量了外周血中提取的游离RNA的逆转录产物,试验结果显示,肺癌患者血循环中提取的RNA的逆转录产物的量明显高于健康者。结论本方法不需要价格昂贵且寿命短的涂层柱,只需将含PVP的缓冲液充柱,再用不含PVP的缓冲液冲出即可,非常有潜力在临床和生物化学领域得到广泛应用。     

淫羊藿苷逆转耐甲氨蝶呤肺癌A549细胞转移表型

目的:研究中药淫羊藿苷(icariin,ICA)作用甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)耐药肺癌A549细胞后对细胞转移表型的影响,初步探讨ICA逆转A549/MTX耐药细胞转移表型的作用机制及对肺癌的治疗价值.方法:采用MTT法检测ICA对A549/MTX耐药细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC_(50)).采用双层软琼脂克隆形成实验检测A549/MTX 组和A549/MTX+ICA组细胞的克隆形成率,并观察其集落形态.细胞划痕实验检测A549/MTX组和A549/MTX+ICA组细胞的迁移能力.Transwell小室实验检测细胞侵袭能力的变化.结果:MTT结果显示,无毒剂量的ICA与MTX联合应用后A549/MTX细胞的IC_(50)值为35.50±1.85 μmol/L,比单独应用MTX(同等剂量)后A549/MTX细胞的IC50值(52.17±2.25 μmol/L)有了一定程度的下降.软琼脂实验发现,A549/MTX+ICA组细胞克隆形成率为0.94±0.09,小于A549/MTX组细胞的1.56±1.07(P<0.05).划痕实验显示,72 h后A549/MTX组细胞的迁移能力大于A549/MTX+ICA组细胞(P<0.05).Transwell实验显示,A549/MTX组细胞的穿膜细胞数明显多于A549/MTX+ICA组细胞(P<0.05),说明A549/MTX+ICA组细胞的侵袭浸润能力小于A549/MTX组细胞.结论:中药ICA具有逆转A549/MTX耐药细胞转移表型的作用.     

DNA甲基化与肿瘤的侵袭和转移

肿瘤的侵袭和转移是肿瘤的重要特性，也是肿瘤致死的主要原因。近年来对肿瘤侵袭和转移的机制作了大量的研究，发现DNA的甲基化在肿瘤侵袭和转移中发挥重要的作用。DNA甲基化是表观遗传学分子机制之一，参与基因表达的调控。在肿瘤侵袭和转移过程中，DNA甲基化可以通过调节肿瘤转移相关基因的表达从而影响肿瘤的侵袭和转移。     

肿瘤循环RNA的研究进展

外周血循环RNA具有和肿瘤相一致的分子变化,它可能是以RNA-蛋白质复合体的形式存在,直径为0.2μm的微孔滤器可将其浓缩,利用分子生物学技术（RT-PCR）定量检测血清/血浆中RNA分子,可有助于肿瘤的早期诊断、鉴别诊断、有效观察及预后监测.     

外泌体在移植物抗宿主病中的作用及其miRNA作为生物标志物北大核心CSCD

移植物抗宿主病(GVHD)是在异基因造血干细胞移植后发生的一种免疫性疾病,致死率较高,目前治疗方式存在不足,需要新的治疗方案和靶点改进GVHD的治疗效果。免疫细胞分泌的外泌体具有免疫调节作用使其备受关注,能够传递信息从而调节免疫应答。miRNA由于其独特的生物学特性,可能作为各种疾病的生物标志物,且包含在外泌体的脂质双层囊泡结构中使其更为稳定,作为GVHD的生物标志物具有良好研究前景。本文就来自不同免疫细胞及间充质干细胞(MSC)的外泌体在GVHD中的作用进行综述,并总结目前研究中GVHD来自血液及外泌体的miRNA标志物,提示外泌体来源miRNA作为生物标志物具有广阔前景。     

肿瘤基因启动子区异常甲基化与肿瘤的发生

肿瘤的发生和发展是一个与多基因、多步骤的致癌因素相关的复杂过程,包括了原癌基因及肿瘤抑制基因的改变、错配修复基因的突变、DNA甲基化和微卫星不稳定性。癌基因的低甲基化与抑癌基因的高甲基化在肿瘤发生、发展中的基因表达调控、基因结构的稳定等方面发挥重要作用。DNA甲基化是指生物体在DNA甲基转移酶的催化下,以S-腺苷甲硫氨酸（SAM）为甲基供体,将甲基转移到特定碱基上的过程。甲基化异常被认为是肿瘤的一个特征,是基因组中一种重要的表观遗传修饰,与肿瘤的发生、浸润及转移相关。基因局部甲基化模式的改变已成为令人瞩目的研究领域。本文就DNA甲基化及肿瘤基因启动子区甲基化研究的相关进展作简要综述。     

非小细胞肺癌患者hnRNPA2／B1检测的临床意义

目的本研究的目的是通过非小细胞肺癌肿瘤组织和外周血hnRNPA2／B1的检测探讨临床预后。方法采用实时荧光定量RT-PCR方法分别对30例NSCLC患者肿瘤组织和外周血及8例非恶性肿瘤患者的正常肺组织进行hnRNPA2／B1检测。随访一年后对无复发患者外周血hnRNPA2／B,复查。结果30例NSCLC患者经过一年随访复查,死亡和复发组的肿瘤组织hnRNPA2／B1与正常肺组织组和无瘤生存组比较有显著差异（P〈0．05）,而外周血在死亡和复发组与无瘤生存组间无差异（P〉0．05）,同样TNM临床分期之间也无差异（P〉0．05）。但一年后复查无瘤生存组外周血hnRNPA2／B1明显降低,与死亡和复发组以及无瘤生存组手术前的血hnRNPA2／B1比较有显著差异（P〈0．05）。结论NSCLC患者肿瘤组织的hnRNPA2／B1明显增高,显著增高预示预后极差,但外科手术治疗后预后好的患者外周血hnRNPA2／B1则明显降低,因此NSCLC患者的肿瘤组织和外周血hnRNPA2／B1检测可以用来指导术后的进一步治疗和判断预后。     

高效毛细管电泳法在血清氨甲蝶呤浓度检测中的应用

目的建立快速检测人血清中氨甲蝶呤药物浓度的方法。方法用高效毛细管电泳技术，选用直径75μm，总长60cm，有效长度50．5cm熔融石英毛细管，以75mmoL／L，pH7．4的磷酸盐为电泳缓冲液，检测波长为306nm，在25kV电压下的快速分离检测氨甲蝶呤，并对此方法进行方法学评价。结果氨甲蝶呤的出峰时间在10min内，线性范围在1.1—1100．0μmol／L间，最低检出浓度为0．55μmoL／L，回收率为88．2％-98．2％，批间精密度为5．4％，批内精密度为4．2％。结论高效毛细管电泳方法具有快速、准确且成本低的特点，为临床和科研中测定血清氨甲蝶呤提供了一种有效的手段。     

肿瘤细胞对氨甲蝶呤产生耐药生化机制的研究进展

氨甲蝶呤(MTX)作为一种广泛使用的抗肿瘤药物,几十年来人们一直在不断探讨其耐药的具体机制。随着相关检测技术的发展,最近几年对其耐药的理解更加深入,涉及谷氨酰合成酶(分胞浆型cFPGS和线粒体型mFPGS两种异构体)与MTX耐药机制、多药耐药相关蛋白与耐药、二氢叶酸还原酶与耐药间作用的机制。现从药物转运、谷氨酸化以及合成代谢途径认识引起MTX耐药的生化机制,并探讨其在临床的应用前景和意义。