临床化学质量控制方法的选择和设计

使用设计的质量控制选择格子来帮助临床化学实验室的检验人员选择和设计质量控制方法。格子是一个3×3分级表，其确定了与具有不同过程能力和测定过程稳定性相应的控制测定值个数和控制规则。在过程的能力基础上选择格子的行，在过程稳定性基础上选择格子列。格子相交的小方块即是具有之当误差检出和假失控概率的控制方法。为了提供过程能力的定量指数，可计算医学上重要系统误差的大小；以及从经验或从质控记录中定量地估计医学上重要误差的发生率（f）。建立了单规则固定限方法，其能在Levey－Jennings控制图上执行；以及在Westgard多规则控制方法上改编多规则控制方法。     

亲和毛细管电泳法测定甲氨蝶呤对映体与二氢叶酸还原酶反应动力学参数

目的 建立一种测定氨甲蝶呤(MTX)两种对映体与二氢叶酸还原酶(DHFR)结合反应动力学参数的方法.方法 建立DHFR反应体系,采取亲和毛细管电泳技术,以含0.2%Brij-35的pH 9.50的50mmol/L硼砂为电泳缓冲液,检测波长为254 nm,在25 kV的电压下,分离反应体系中各组分.观察酶反应前后的电泳图谱并根据反应生成物峰面积的变化计算相关反应动力学参数,将不同浓度的氨甲蝶呤两种对映体L-(+)-MTX和D-(-)-MTX分别作用于所建立的DHFR反应体系,测定两种对映体的半数抑制浓度(IC50).结果 建立了亲和毛细管电泳法对氨甲蝶呤对映体与DHFR反应动力学参数的测定方法,在30 min内实现DHFR反应体系中反应物和生成物的分离,并根据反应生成物峰面积的变化计算得出D-(-)-MTX的IC50为3.17×10-7mol/L,L-(+)-MTX的IC50为2.48×10-8mol/L,两者相差13倍左右.结论 亲和毛细管电泳的方法可以快速准确地用于DHFR反应动力学参数的研究,通过检测MTX对映体对DHFR的抑制能力的差异,首次发现MTX对映体对DHFR有立体选择性作用.     

荧光定量PCR检测Rh阴性孕妇外周血浆游离DNA中胎儿RhD血型

目的 探讨荧光定量PCR(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)技术对Rh阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行非创性产前诊断胎儿RhD血型的可行性.方法 选取78份妊娠11～40周、B超确诊为单胎的Rh阴性孕妇血浆.采用9个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)多态性位点及Y染色体性别决定区基因(sex-determining region Y chromosome,SRY)确定胎儿DNA的存在;运用FQ-PCR技术对血浆中游离胎儿DNA进行RHD基因外显子5、7、10和内含子4定量分析,以确定胎儿RhD血型的基因型;其基因型结果与产后新生儿脐血血清学检测结果进行对比分析,回顾性评价胎儿基因定型结果的准确性.结果 78份标本中,41份检测到SRY基因,平均浓度为(214.7±120.9)拷贝/ml,产后证实皆为男性.70份FQ-PCR基因定型结果与血清学结果相符,另有5份确定为假阳性,3份基因定型结果不可确定,检测结果总符合率为90%(70/78).5份假阳性标本通过检测RHD1227A等位基因鉴定了4份RhD放散型,FQ-PCR最终结果准确率达到95%(74/78).结论应用FQ-PCR方法进行非创性胎儿RhD血型检测可用于新生儿溶血病的预防和诊断.     

氨甲蝶呤获得性耐药和DNA甲基化的相关性研究

目的 研究氨甲蝶呤(MTX)获得性耐药与DNA甲基化的相关性.方法 采用浓度递增结合低剂量持续诱导的方法 诱导细胞发生MTX耐药.通过高效毛细管法检测非小细胞肺癌A549细胞和非小细胞肺癌A549/MTX细胞内整体DNA甲基化水平.结果 MTT法分析显示A549细胞对MTX发生耐药.A549细胞发生MTX耐药时,其甲基化水平明显降低,且随着MTX耐药浓度增加,耐药细胞株DNA甲基化程度依次降低.A549/MTX细胞和A549细胞整体DNA甲基化水平差异有统计学意义.结论 MTX获得性耐药引起细胞内整体DNA甲基化水平降低,MTX获得性耐药机制可能与DNA甲基化相关.     

毛细管电泳免疫-激光诱导荧光术测定甲氨蝶呤对映体耐药A549细胞株中叶酰聚谷氨酸合成酶

目的 为观察甲氨蝶呤(MTX)对映体诱导肺癌A549细胞株耐药后叶酰聚谷氨酸合成酶(folylpolyglutamate synthetase,FPGS)含量变化,建立一种用毛细管电泳免疫-激光诱导荧光术(CEIA-LIF)测定FPGS的方法,以便为深入探讨肿瘤耐药机制提供新的实验手段.方法 实验分别选用耐药浓度为25 μmol/L的L-(+)-MTX和D-(-)-MTX肺癌A549耐药细胞株,以MTX敏感的细胞株作对照,培养获取上述3株细胞,并粗提取FIGS做CEIA-LIF和免疫印迹(WB)实验;用异硫氰酸荧光素(FITC)标记FPGS抗体,与提取的FPGS进行免疫反应;然后采用CEIA-LIF,根据不同分子量蛋白具有不同的迁移时间,分离检测标记蛋白,检测L广(+)-MTX和D-(-)-MTX作用耐药前后3株肺癌A549细胞株中FPGS表达含量;同时用WB作对照,以评价CEIA-LIF的特异性和FPGs定量的准确性.结果 CEIA-LIF分离标记FPGS抗体与免疫复合物的分离时间分别为7.1、8.9 min,分离度(R)=4.5,在10 min内即完成蛋白的分离和检测.经WB鉴定3株细胞液氮冻融裂解后离心提取液中组分与FPGS抗体无非特异性条带出现.CEIA-LIF测定敏感细胞株的检测下限为0.68 mg/μl细胞;而其检测25 μmol/L L(+)-MTX和25 μmol/L D-(-)-MTX诱导耐药细胞中FPGS的表达含量分别为对照组敏感细胞的46.59%和48.36%.结论 本研究建立的CEIA-LIF检测FPGS法具有高效快速的特点,且具与WB类似的特异性;同时提高了检测的敏感度.L-(+)-MTX和D-(-)-MTX诱导耐药后细胞株中FPGS表达含量较敏感细胞株明显减少,证明MTX耐药细胞株FPGS表达含量受损.     

毛细管电泳在临床微生物学检验中的应用

毛细管电泳(CE)技术是一种新型高效液相分离技术,具有快速、高效、无污染、可自动化等优点,被广泛用于许多领域。本文分别从CE在细菌、真菌、病毒以及其他微生物分析方法的作用,对CE在临床微生物学检验中的应用进行综述。     

高效毛细管电泳法快速测定血清中游离氨基酸

目的建立快速测定人血清中游离氨基酸的方法。方法用高效毛细管电泳法检测了４０例健康人，３２例肾病患者血清氨基酸。结果在８分钟内分离１６种氨基酸，线性在１０～７００μｍｏｌ／Ｌ范围，最低检出限为２．５～７．９μｍｏｌ／Ｌ，回收率为８６３％～１０７．４％，批内精密度为２．８％～１０．３％，批间精密度为３．５％～１１．６％。对３２例肾脏病患者血清中氨基酸测定结果与４０例正常人对照组氨基酸测定值进行统计分析。结论高效毛细管电泳法具有快速、准确、灵敏等特点，为临床及科研工作中测定氨基酸提供了一种有效的方法     

外周血中hnRNP A2/B1含量及其在肺癌诊断中的意义

目的用FQ-RT-PCR技术检测外周血中hnRNPA2/B1表达水平及在肺癌诊断中的意义.方法用FQ-RT-PCR技术定量分别检测18例健康体检者、12例肺部良性疾病和30例肺癌患者外周血中hnRNPA2/B1 mRNA,并用β-actin对hnRNPA2/B1表达水平进行标化.结果 hnRNPA2/B1与β-actin的比值在正常对照组和良性肺部疾病组间差异无显著性(P>0.05),而肺癌组均高于前两组(P<0.05);hnRNPA2/B1基因在低分化鳞癌中的表达水平很低,与其它类型肺癌差异有显著性(P<0.05).结论 hnRNPA2/B1在血中表达水平的差异在肺癌诊断中具有一定临床应用价值,并与肺癌的病理分级有一定相关性.     

BLM基因的研究进展

BLM是RecQ DNA解螺旋酶家族成员之一. RecQ DNA解螺旋酶家族在抑制人类肿瘤发生及早衰方面发挥着重要作用.本文介绍了BLM基因的结构与生物学特性,并在此基础上对BLM基因突变及其蛋白表达作一综述.