粒细胞集落刺激因子动员正常供者外周血造血干细胞研究

目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员正常供者外周血造血干细胞的效果、影响因素及不良反应。方法:对20例造血干细胞正常供者采用中位剂量G-CSF10.9μg/(kg·d)皮下注射3～5天后,使用COBESpectra血细胞分离机采集外周血干细胞。采用流式细胞仪检测采集物中CD34 细胞数。结果:第一次采集的单个核细胞(MNC,个)及CD34 细胞量(个)分别为(1.12～13.06,中位数3.10)×108/kg供者体重及(1.14～10.42,中位数3.8)×106/kg供者体重。MNC及CD34 细胞采集总量分别为(2.21～13.60,中位数5.80)×108/kg受者体重及(2.30～14.00,中位数6.40)×106/kg受者体重,均达到移植要求。男性CD34 细胞总量显著高于女性。不良反应较为轻微。供者年龄、体重、G-CSF剂量、采集前白细胞数等与采集所得MNC及CD34 细胞量无明显相关性。结论:G-CSF作为正常供者动员剂安全有效。     

正常供者外周血造血干细胞动员效果及影响因素

 目的　探讨粒细胞集落刺激因子（G-CSF）动员正常供者外周血造血干细胞的效果、毒副作用及影响因素。方法　对59名异基因造血干细胞正常供者采用G-CSF 皮下注射3 ~ 5 d,使用COBE Spectra血细胞分离机采集外周血干细胞,流式细胞术检测采集物中CD+34细胞数。结果　所有供者第一次采集的单个核细胞（MNC）及CD+34细胞量平均值分别为4.4（1.12～13.06）×108／kg供者体重及3.78（1.14～12.92）×106／kg供者体重。患者不良反应轻微。男性供者、年龄小于45岁者及采集前白细胞计数高者采集所得CD+34细胞数较高。结论　G-CSF作为正常供者动员剂安全有效。患者性别、年龄及采集前白细胞计数可作为预测因素。     

利用杆状病毒载体高效表达人胰岛素样生长因子-1及其纯化的研究

目的:利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中研制有生物学活性的重组人胰岛素样生长因子-1(rhIGF-1).方法:将15kDhIGF-1前体cDNA基因插入家蚕核型多角体病毒(BmNPV)转移载体pBakPAK8中,构建重组病毒BmNPV/IGF-l.用BmNPV/IGF-1感染家蚕幼虫,提取家蚕血淋巴液,采用亲和层析法纯化rhlGF-1,ELISA法测定rhIGF-1含量,用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定rhIGF-1纯度及免疫学活性,MTF法观察其对MCF-7细胞增殖的影响.结果:ELISA测定显示,BmNPV/IGF-1感染家蚕幼虫120h rhIGF-1含量达最高值(23.36μg/ml).rhIGF-1纯度为40%,Westem-blot分析发现主要纯化产物为7.5 kD成熟hIGF-1.细胞活性刺激实验显示,纯化后rhIGF-11对MCF-7细胞促增殖能力明显优于来源于大肠杆菌的rhIGF-1产品.结论:实现了具有免疫学活性及生物学活性rhlGF-1在杆状病毒表达系统的高效表达,并使rhIGF-1得到初步纯化.     

自体骨髓间充质干细胞和单个核细胞移植治疗冠心病的临床研究

目的　研究自体骨髓间充质干细胞 (BMSCs)和单个核细胞 (BMMNCs)经冠状动脉 (冠脉 )移植对冠心病、心肌梗死患者心功能的影响及其安全性。方法　 10例冠心病伴心肌梗死患者 ,通过冠脉转运将BMMNCs植入心肌梗死区 ,术前和术后 6个月分别行99mTc MIBI心肌灌注显像、二维超声心动图及动态心电图检查。结果　 3例患者因心肌梗死罪犯血管狭窄小于 5 0 %未行经皮冠状动脉介入术 (PCI) ,仅移植干细胞。余 7例患者在梗死相关冠脉开通后注入干细胞。 10例患者二维超声心动图检查示左心室射血分数 (LVEF)较术前平均增加 10 5 % (4 0 %～ 18% ) ,左心室舒张末期内径(LVDd)较术前平均减少 2 2mm(- 4mm～ 8mm) ,99mTc MIBI显示梗死部位心肌灌注明显改善。术中及术后随访 6～ 12月均无心律失常和其它合并症发生。结论　自体BMSCs和MMNCs经冠脉移植治疗冠心病心肌梗死 ,可以抑制左心室重构 ,改善心脏功能。     

胰岛素样生长因子-Ⅰ基因表达异常与糖尿病外周病变的关系

目的　研究胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因表达异常及其与糖尿病外周病变的关系。方法　用四氧嘧啶诱发糖尿病大鼠模型。逆转录-聚合酶链反应半定量分析坐骨神经IGF-ⅠmRNA含量;酶联免疫吸附法分析组织IGF-Ⅰ肽含量;诱发肌电图测定坐骨神经电生理指标;光镜、电镜下观察坐骨神经形态学改变。结果　病程早期,非严格控制糖尿病组大鼠坐骨神经电生理指标与正常非糖尿病对照组差异显著,神经组织IGF-ⅠmRNA含量（0.430±0.031vs0.370±0.016、0.280±0.010,P值<0.01,<0.001）、肽含量(IGF-Ⅰng/mg总蛋白)均下降(38.44±3.60vs30.06±3.60、23.71±2.70,P值<0.01,＜0.001),程度均随糖尿病控制状态而异,且随病程进展逐渐下降(IGF-ⅠmRNA0.320±0.021～0.230±0.060;IGF-Ⅰ肽28.80±3.30～19.51±1.80),与坐骨神经功能（感觉神经传导速度r=0.714,P＜0.001;诱发电位波幅r=0.716,P＜0.001）、组织形态异常(轴突面积r=0.81,P＜0.001)关系密切,血糖正常糖尿病组大鼠与正常对照组间上述指标差异无显著性。结论　糖尿病早期即出现组织IGF-Ⅰ基因表达下降,程度依糖尿病严重状态而异并随疾病进程加重,这种表达异常可能经神经自分泌或旁分泌途径导致外周神经病变发生和发展。     

胰岛素样生长因子-1研究进展

胰岛素样生长因子 1(IGF 1)是一类促进细胞生长、具有胰岛素样代谢效应的因子。IGF 1受营养状态、激素、遗传等多因素的调节 ,在心血管疾病、内分泌代谢病及肿瘤等的病理生理过程中发挥重要作用。研究和利用这一因子 ,解决与之密切相关的多种疾病 ,将为临床医学提供新的思路     

AO/EB荧光染色法测定HHT诱导的HL-60细胞凋亡

吖啶橙／溴乙啶（ＡＯ／ＥＢ）染色法为研究细胞凋亡的重要方法，本文介绍ＡＯ／ＥＢ染色法的原理与方法，以及以高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，检测细胞凋亡率，结果显示，在加药后２４小时凋亡率最高，该法经济、简便，在基层单位可推广使用。     

骨髓间充质干细胞培养及向神经细胞诱导分化的实验研究

目的：体外培养骨髓间充质干细胞(BM—MSC)，诱导BM—MSC向神经细胞分化。方法：采用DMEM培养液加胎牛血清(DMEM／FBS)或无血清培养基体外培养人BM—MSC，测定细胞倍增时间；免疫组织化学法分析BM—MSC的表面标记；纤维母细胞集落形成(CFU—F)试验检测BM—MSC增殖能力；应用二甲基亚砜／羟丁苯甲酯(DMS0／BHA)化学因子诱导BM—MSC向神经细胞分化。结果：BM—MSC为单层贴壁生长，呈现规则的集束辐射状排列。在对数生长期，细胞倍增时间约为46h。CFU—F试验表明，体外培养的MSC的集落形成能力为正常骨髓单个核细胞(MNC)的15000倍以上。免疫组化分析表明，BM—MSC为CDl3和CDl05阳性，CD34阴性。DMS0／BHA化学因子能诱导BM—MSC分化为神经细胞，但是分化后即失去增殖能力，并于48h后逐渐死亡。结论：通过体外培养可以获得大量高度均一的BM—MSC。BM—MSC可向神经细胞诱导分化，但尚缺乏实际应用的可能性。     

B*48与B*1568难以应用SSP方法确定低分辨分型的分析

目的分析SSP方法难以确定B* 48与B* 1568低分辨分型的原因。方法应用基因克隆和DNA测序技术对受检标本HLA-B基因第1-3外显子(Exon1-3)作核苷酸序列分析,通过序列比对寻找SSP分型困难的原因。结果该标本HLA-B基因Exon1序列与B*4801Exon1序列完全相同,与已公布的B* 15Exon1序列相比,第5位碱基由G→T,第11位碱基由C→T,第44、45位碱基由GA→CG。Exon3序列则与B* 1568完全相同,按WHOHLA命名该标本为B* 1568。结论部分PCR-SSP引物序列涉及Exon1区域,但有些等位基因在此区域的序列并未公布,因此可能出现分型困难。分析SSP分型中引物发生的疑难问题,有助于提高HLA分型水平。     

胰岛素样生长因子Ⅰ基因治疗对糖尿病大鼠血糖调节的研究

本研究以基因治疗的方法 ,将胰岛素样生长因子Ⅰ (IGF Ⅰ )基因导入实验性糖尿病 (DM)大鼠体内 ,使IGF Ⅰ在动物模型体内得到高效表达 ,DM大鼠血糖显著降低 ,血IGF Ⅰ升高