血管内皮生长因子对关节软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响

目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)对关节软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响.方法 体外培养乳鼠关节软骨细胞,实验分为4组,加入不同因素干预.A组(对照组):不加处理因素;B组:10 ng/mlVEGF;C组:10 ng/ml白细胞介素(IL)-1β;D组:10 ng/ml VEGF+10 ng/ml IL-1β.采用实时荧光定量聚合酶链反应检测Ⅱ型胶原mRNA的表达,采用蛋白免疫印迹法检测Ⅱ型胶原蛋白的表达.采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 各组软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA的相对表达量分别为:A组1.00±0.08,B组0.78±0.07,C组0.67±0.06,D组0.57±0.04,B、C及D组软骨细胞Ⅱ型胶原的mRNA表达量均显著低于A组(P均＜0.01),D组Ⅱ型胶原的mRNA表达水平明显低于B组及C组;与A组(0.95±0.21)比较,B组(0.7 1±.0.14)、C组(0.60±0.11)及D组(0.31±0.09)的Ⅱ型胶原蛋白表达量显著降低(P均＜0.01),D组软骨细胞Ⅱ型胶原的蛋白表达水平明显低于B组及C组(P均＜0.01).结论 在骨关节炎的发病过程中,VEGF可能通过抑制关节软骨细胞Ⅱ型胶原的表达发挥重要作用.     

鹿瓜多肽注射液促进骨折愈合过程中血管内皮生长因子表达的机制

目的:通过观察鹿瓜多肽注射液经肌肉注射后对兔骨折愈合过程中血管内皮生长因子表达的影响,探讨其作用机制。方法:实验于2005-09/2006-03在武汉大学人民医院骨科、病理学教研室完成。①80只新西兰大白兔制成桡骨中段骨折模型,术后随机分为鹿瓜多肽低剂量组、鹿瓜多肽高剂量组、骨肽对照组和空白对照组,每组各20只,分别予以0.1mL/kg鹿瓜多肽注射液(哈尔滨誉衡药业有限公司,主要成分为梅花鹿的骨骼和葫芦科植物甜瓜的干燥成熟种子提取的天然多肽类物质)、0.3mL/kg鹿瓜多肽注射液、骨肽注射液(蚌埠市宏叶生化制药厂,含有多肽类骨代谢因子、有机钙、无机钙、无机盐、微量元素、氨基酸等)0.2mL/kg和不注射任何药液。②术后1,2,3,4周分批处死动物取材行免疫组织化学染色及图象分析测定血管内皮生长因子表达的强度。免疫组织化学染色片显微镜下放大200倍,每个标本取6张切片,随机取5个视野,计算免疫组织化学染色的平均吸光度值和积分吸光度值进行半定量分析。结果:80只兔全部进入结果分析。①血管内皮生长因子免疫组织化学结果:术后1周,鹿瓜多肽高剂量组和低剂量组纤维性骨痂中细胞外间质、成骨细胞、骨折端骨细胞、成软骨细胞和各种炎性细胞均呈阳性染色,骨肽对照组和空白对照组有少量阳性细胞,阳性程度弱。术后2周,鹿瓜多肽高剂量组和低剂量组软骨骨痂及新生骨小梁中成骨细胞、成软骨细胞、成纤维细胞和新生的血管内皮细胞均呈强阳性染色,骨肽对照组和空白对照组阳性程度较弱。术后3,4周,各组呈强阳性表达,各组间着色差别不明显。②图像分析结果:在骨折愈合过程中,鹿瓜多肽高剂量组和低剂量组血管内皮生长因子的表达量一直强于骨肽对照组和空白对照组(第2周平均积分吸光度依次为5.33±0.22,4.71±0.21,3.80±0.25,3.66±0.17,P<0.05或0.01);鹿瓜多肽高剂量组和低剂量组血管内皮生长因子的表达高峰提前出现,约出现在第2周左右。结论:鹿瓜多肽注射液能有效促进骨折愈合过程中血管内皮生长因子的合成分泌,是其促进骨折愈合的重要机制。     

改良Kidner手术治疗先天性副舟骨34例远期疗效分析

目的:观察改良Kidner手术治疗先天性副舟骨的疗效。方法:1985年4月～2003年3月,对34例(55足)先天性副舟骨患者应用改良Kidner手术治疗。结果:所有病人均获随访,随访时间5～21年,平均12年,获得良好疗效。结论:改良Kidner手术是治疗先天性副舟骨的有效方法。     

两种不同内固定在老年股骨粗隆间骨折中的应用比较

目的 探讨动力髋螺钉(DHS)与防旋股骨近端髓内钉(PFNA)在老年股骨粗隆间骨折中的治疗选择和临床疗效.方法 53例老年股骨粗隆间骨折患者,31例行DHS固定,22例行PFNA固定.比较两组手术时间、术中出血量、术后引流量和术后骨折愈合时间与功能恢复情况.结果 PFNA治疗组平均手术时间、术中失血量和术后引流量较DHS治疗组明显减少.两组骨折愈合时间和髋关节功能比较差异无统计学意义.结论 PFNA是治疗老年股骨粗隆间骨折的理想内固定选择.     

血管内皮生长因子在阿托伐他汀干预股骨头缺血性坏死家兔骨组织中的表达

背景:研究证实,体外培养中他汀类药物可显著增加血管内皮祖细胞的数量,同时可以使血管内皮生长因子的含量明显增多.目的:验证阿托伐他汀对家兔股骨头缺血性坏死骨组织中血管内皮生长因子表达的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-09/2008-11在武汉大学人民医院骨关节外科完成.材料:健康成年新西兰大耳白兔45只,体质量2.5～3.5 kg,雌雄不限.随机分成空白对照组、模型组和阿托伐他汀组,每组15只.方法:模犁组和阿托伐他汀组应用液氮冷冻法建立家兔股骨头缺血性坏死模型,阿托伐他汀组于造模成功后2周开始用阿托伐他汀灌胃,空白对照组和模型组灌服等量的生理盐水.主要观察指标:于第4,8,12周每组随机各取5只动物处死,进行大体、X射线及组织学观察;以免疫组织化学法检测股骨头血管内皮生长因子蛋白表达和反转录-聚合酶链反应法检测血管内皮生长因子mRNA水平.结果:模型组和阿托伐他汀组血管内皮生长因子蛋白和mRNA表达明显低于空白对照组,但阿托伐他汀组喂药后的第8,12周血管内皮生长因子蛋白和mRNA表达水平明显高于模型组(P<0.05).结论:阿托伐他汀能够提高家兔股骨头缺血性坏死骨组织中血管内皮生长因子蛋白和mRNA的表达.     

STEMI患者PCI术前预注射尼可地尔对无复流的预防作用

目的:探究冠状动脉(冠脉)靶血管内预先注射尼可地尔对行经皮冠脉介入治疗(PCI)术的急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者术中无复流现象(NRP)的预防效果及对心肌损伤、心功能的影响。方法:选择2016-03-2018-04我院收治的需行急诊PCI术的STEMI患者135例,采用随机数字表法将其分为A组、B组和C组,每组各45例。A组给予0.9%氯化钠溶液治疗,B组给予硝普钠治疗,C组给予尼可地尔治疗,均经冠脉靶血管内预先注射药物后行PCI术。比较3组手术前后TIMI血流分级、PCI术中NRP发生率、心肌损伤指标及心功能水平,并比较3组术后低血压及主要心脏不良事件发生率。结果:术后,3组TIMI血流分级及NRP发生率比较均有明显差异(P0.05);术后7 d,3组血清N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平比较有明显差异(P0.05),且B组、C组血清NT-proBNP水平均明显低于A组(P0.05)。术后,3组血清肌酸激酶同工酶-MB(CK-MB)及肌钙蛋白(cTnI)峰值水平比较均有明显差异(P0.05),且B组、C组血清CK-MB、cTnI水平均明显低于A组(P0.05);术后7 d,3组室壁运动积分指数(WMSI)及左心室射血分数(LVEF)比较均有明显差异(P0.05),且B组、C组LVEF均明显高于A组(P0.05),B组、C组WMSI均明显低于A组(P0.05);术后,3组低血压及主要心脏不良事件发生率比较均有明显差异(P0.05)。结论:冠脉靶血管内预先注射尼可地尔,可有效预防行PCI术的STEMI患者术中NRP的发生,其具有减轻心肌损伤、改善心功能的作用,且术后患者低血压及不良事件的发生率较低。     

透明质酸保护组织工程软骨拮抗硝普钠抑制作用的机制研究

目的 研究透明质酸对壳聚糖复合支架与再分化软骨细胞构建的组织工程软骨的保护作用.方法 藻酸钠微球包被体外单层扩增培养的去分化软骨细胞2周以恢复其表型,Ⅱ型胶原蛋白表达的免疫组织化学监测分化状态.扫描电镜观察再分化软骨细胞在壳聚糖复合支架上的生长,3周后用硝普钠或(和)透明质酸以及β1整合素特异性阻断抗体作用于该组织工程软骨,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westem blot检测软骨特异性的Ⅱ型胶原或聚集蛋白聚糖(aggrecan)的表达.结果 藻酸钠微球包被去分化软骨细胞2周能显著提高Ⅱ型胶原的表达.壳聚糖支架支持再分化软骨细胞的贴附、增殖和迁徙.硝普钠呈剂量依赖性地抑制组织工程软骨上的软骨细胞Ⅱ型胶原和aggrecan mRNA的表达,而透明质酸显著提高Ⅱ型胶原和aggrecan mRNA的表达.当用特异性抗体阻断β1整合素后,透明质酸不能逆转硝普钠对组织工程软骨中Ⅱ型胶原蛋白表达的抑制作用.结论 藻酸钠微球包被去分化的软骨细胞2周能恢复细胞的表型.透明质酸通过β1整合素信号通路拮抗低浓度硝普钠对组织工程软骨的抑制作用,保护软骨组织.     

藻酸钠微球中骨髓间充质干细胞向软骨细胞的定向分化

背景:传统的体外诱导干细胞向软骨细胞定向分化的方法有高密度细胞团块培养和平面培养.细胞团块诱导方式培养过程易损害细胞活性,而平面培养获得的细胞数量有限.目的:观察藻酸钠微球中骨髓间充质干细胞向软骨细胞的定向分化潜力,及其在壳聚糖复合支架上的生长情况.设计、时间及地点:对比观察实验.于2007-03/10在武汉大学口腔医学院口腔生物医学工程教育部重点实验室完成.材料:SPF级1月龄雄性Wistar大鼠7只.壳聚糖复合支架材料由武汉大学资源与环境学院研制.藻酸钠盐、转化生长因子β3、胰岛素样生长因子I均为Sigma公司产品.方法:取Wistar大鼠股骨和胫骨骨髓,体外扩增培养骨髓间充质干细胞.实验组用转化生长因子β3和胰岛素样生长因子I联合定向诱导藻酸钠微球包被的骨髓间充质干细胞3周,对照组培养条件中无转化生长因子β3和胰岛素样生长因子I.诱导3周后,免疫组织化学方法和反转录-聚合酶链反应法检测ii型胶原蛋白和aggrecan的表达.从微球中释放诱导的软骨细胞并接种于壳聚糖复合支架.扫描电镜观察其生长情况.主要观察指标:软骨特异性的Ⅱ型胶原、aggrecan的表达以及软骨细胞的三维形态.结果:实验组藻酸钠微球中的骨髓间充质干细胞表达的Il型胶原和aggrecan明显高于对照组(P<0.05),与原代软骨细胞比较差异无显著性意义(P>0.05).壳聚糖复合支架支持分化软骨细胞的贴壁、伸展、增殖和迁徙,并呈典型的软骨细胞生长形态.结论:转化生长因子β3和胰岛素样生长因子I能诱导藻酸钠微球中的骨髓间充质干细胞定向分化成软骨细胞,并与壳聚糖复合支架表现出良好的组织相容性.     

超声微泡介导白细胞介素-1受体拮抗蛋白基因体外转染兔软骨细胞的研究

目的 观察超声介导下携白细胞介素-1受体拮抗蛋白基因(IL-1Ra)的微泡体外转染兔软骨细胞的效率和表达.方法 体外分离培养兔软骨细胞,分为单纯质粒组(P)、微泡+质粒组(M+P)、超声+质粒组(U+P)和超声+微泡+质粒组(U+M+P),照射后48 h,荧光显微镜和流式细胞术检测转染效率,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测IL-1Ra基因的mRNA和蛋白表达,台盼兰染色检测细胞生存率.结果 U+M+P组转染效率较其他三组明显提高,为(11.6±1.0)%;且eGFP-C1-IL-1Ra质粒经超声微泡介导转染后可表达IL-1Ra的mRNA和蛋白.结论 超声微泡可介导IL-1Ra基因在兔软骨细胞内的转染和表达,可望成为软骨损伤基因治疗的新方法.     

FOLFOX方案对结直肠癌患者外周血微小RNA-429和炎症因子水平的影响

目的探讨FOLFOX方案对结直肠癌患者外周血微小RNA-429(miR-429)表达和血浆炎症因子水平的影响。方法 52例结直肠癌患者(A组)行FOLFOX方案化疗:奥沙利铂85 mg/m²,静脉滴注,第1天;亚叶酸钙200 mg/m²,静脉滴注,第1天;氟尿嘧啶400 mg/m²,第1天,2400 mg/m²,持续静脉滴注46 h;2周1次,2次为1个疗程。化疗后采用实时定量PCR检测结直肠癌患者外周血miR-429的表达,ELISA法检测血浆转化生长因子β(TGF-β)、IL-17、IL-6和TNF-α的水平。另以44例健康人作对照(B组)。结果外周血miR-429的表达与肿瘤分化程度、临床分期和淋巴结转移相关(P<0.05)。与B组相比,A组外周血miR-429表达和血浆TGF-β、IL-17、IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05);与化疗前相比,化疗后A组外周血miR-429表达和血浆TGF-β、IL-17、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05)。结论 FOLF...