脑红蛋白在内毒素脑损伤大鼠模型中的表达变化

Objective To investigate the expression of neuroglobin(Ngb) in frontal cortex, cere-brospinal fluid (CSF) and serum in rats with brain injury induced by LPS and to elucidate its significance. Methods Seventy adult Sprague-Dawley rats were randomly divided into LPS (n = 60, with injection of 0.1 mg/kg LPS into cistern) and control (C, n =10, with injection of equal volume of isotonic saline into cistern) groups, with 10 rats in each group. The plasma, CSF as well as frontal cortex from sacrificed rats were collected in LPS group at 3, 6, 12, 24, 48, 72 post injection hour (PIH), with 10 rats at each time point. The protein expression of Ngb was measured by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) and Western blot. Expression of Ngb in frontal cortex was determined by SP. Water content of frontal cortex was assessed by drying method. The correlation among Ngb contents in serum, CSF, frontal cortex and water con-tent of frontal cortex was analyzed with multiple comparison. Results Ngb expression ( by ELISA) : Ngb expression of frontal cortex, CSF, and serum in LPS group was higher than that in C group at each time point, and it peaked at 48 PBH (35.4±3.9, 22.7±3.1, 14.4±2.8 ng/mL, respectively, P <0.01). Ngb ex-pression ( by Western blot) : Ngb protein with relative molecular mass of 17×103 was observed in each group. Ngb expression detected by Western blot was similar to that detected by ELISA. Brain water content was significantly greater in LPS group than that of C group at 6-72 PIH ( P<0.01) , and it peaked at 48 PBH ( 83.3±1.9) %. Ngb contents in serum, CSF, frontal cortex, and water content of frontal cortex were positively correlated with muhipie comparison (γ=0.631-0.719, P<0.01). Conclusions Up-regu-lation of Ngb expression in brain injury induced by LPS is correlated with duration after challenge of LPS.     

丙戊酸钠对APP/PS1双重转基因AD模型小鼠脑内老年斑和神经元的影响

目的 探讨丙戊酸钠 (valproic acid sodium salt,VPA)处理对淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)/早老素1(presenilin1,PS1)双重转基因阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠是否发挥神经保护作用.方法 对APP/PS1双重转基因AD模型种鼠交配后产下的子代进行基因分型,运用VPA 30 mg/(kg·d)和等量生理盐水腹腔注射APP/PS1双重转基因小鼠4周.药物处理后采用免疫组化、甲硫素S染色检测VPA对老年斑(senile plapues,SP)的影响,用Nissl染色、Tunel染色观察脑内神经元的变化,并采用ELISA定量检测小鼠脑内β-淀粉样蛋白(amyloid β peptide,Aβ)水平.结果 免疫组化及甲硫素S染色结果显示:VPA治疗组较生理盐水组的小鼠大脑皮质及海马区域的老年斑数量明显减少(t ＝ 7.78,P ＜ 0.01).Nissl染色发现VPA治疗组小鼠皮质及海马内的神经元数目较生理盐水组增加;Tunel染色显示VPA治疗组小鼠脑内凋亡神经元明显减少(t ＝ 5.95,P ＜ 0.01);ELISA结果提示VPA治疗组小鼠脑内Aβ40(t ＝ 4.23,P ＜ 0.01)和Aβ42(t ＝ 7.51,P ＜ 0.01)水平显著低于对照组.结论 VPA处理能显著减少AD模型小鼠减少脑内Aβ的沉积和老年斑的形成,通过减少神经元的凋亡来增加神经元的数量.     

大麻素HU-210对APP/PS转基因小鼠学习记忆及脑内老年斑的影响

目的：研究大麻素HU-210对APP/PS转基因小鼠空间学习记忆能力和脑组织中老年斑表达变化的影响。方法：3.5月龄APP/PS转基因小鼠随机分为HU-210处理组和生理盐水对照组,每组10只,用大麻素HU-210[100 μg/（kg·次）]和等量生理盐水分别腹腔注射1个月。应用Morris水迷宫和恐惧实验检测各组小鼠学习记忆能力的变化;采用免疫组化染色以观察小鼠脑内老年斑的变化。结果：水迷宫实验显示,与对照组相比,HU-210处理组小鼠找到平台的潜伏期及搜索路程显著缩短;HU-210处理组小鼠穿越平台次数（5.40±1.52）明显高于对照组小鼠（1.60±1.14,P<0.01）;恐惧实验显示,电击后HU-210处理组小鼠出现Freeze次数（电击后即刻：38.30±15.16;电击后24 h：99.89±5.71）明显高于生理盐水对照组（电击后即刻：17.84±5.33;电击后24 h：56.00±4.78,P<0.01）。免疫组化显示,与对照组（3.90±2.51）相比,HU-210处理组小鼠脑内老年斑数量（9.70±5.67）明显减少（P<0.05）。结论：在老年斑形成初期使用大麻素可明显减少痴呆模型小鼠脑内老年斑的形成,从而改善痴呆模型小鼠的认知功能。     

脊髓压迫性损伤神经纤维溃变和髓鞘碱性蛋白的表达变化

目的　观察脊髓压迫性损伤中白质神经纤维溃变及MBP的表达变化。 方法　采用自行设计的压迫装置制作脊髓压迫性损伤模型,运用luxol fast blue（LFB）、免疫荧光和western blot等方法来检测脊髓受压1、3、7 d后的白质纤维变化及MBP表达变化。 结果　脊髓受压后,白质髓鞘化神经纤维出现水肿,排列疏松、髓鞘缺失等退行性溃变;髓鞘化纤维数目逐渐减少。蛋白MBP表达随着压迫时间进行性下降。 结论　脊髓压迫性损伤可导致神经纤维溃变,MBP表达下调是神经纤维溃变的原因之一。     

大鼠脊髓硫酸软骨素蛋白多糖4细胞的生后发育特征

 目的 研究大鼠脊髓中硫酸软骨素蛋白多糖4（NG2）细胞生后发育特征。方法 采用免疫组织化学及Western blot,观察生后不同发育阶段的脊髓中NG2细胞形态变化。结果 免疫组织化学染色显示,在大鼠生后各发育阶段的脊髓内均有NG2细胞表达;脊髓内NG2细胞胞体逐渐增大,其形态由圆形或卵圆形变为不规则形,突起数目和长度随之增加。与同时期大脑皮层的NG2细胞形态比较,脊髓内的NG2细胞胞体要大,突起短而少。Western blot显示,P1d,脊髓内NG2表达水平最高, P7d开始下降,P21d最低,P60d回升。结论 在大鼠不同发育阶段的脊髓内,NG2细胞形态数量不同, P7d到P21d是脊髓内神经纤维髓鞘主要形成期;脊髓内NG2细胞可能处于少突胶质细胞系发育的早期阶段。     

外科系列专业学位研究生应用解剖学教学的思考

分析外科系列专业学位研究生应用解剖学基础薄弱的原因,提出搭建外科系列专业学位研究生应用解剖学实验和研究平台,建立双导师培养模式,将应用解剖学的教学贯通于基础课程学习、临床能力训练、科研能力培养三个阶段,切实提高外科系列专业学位研究生的培养质量。     

丙戊酸钠对APP/PS1转基因小鼠自主活动及脑形态结构的影响

目的研究丙戊酸钠(valproic acid,VPA)对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠自主活动及脑组织形态结构的影响,探讨VPA对AD的保护作用及可能机制。方法将3月龄APP/PS1双转基因小鼠及同窝野生型小鼠分为VPA处理组和生理盐水对照组,运用VPA[30 mg/(kg.d)]和等量生理盐水腹腔注射4周。旷场实验观察各组小鼠的自主活动能力;尼氏染色、透射电镜观察各组小鼠脑组织的病理改变。结果行为学结果显示:与野生型小鼠相比,AD模型小鼠自主活动明显减少(P<0.05);野生型小鼠VPA处理组与对照组自主活动无明显差异(P>0.05);而AD模型小鼠VPA处理组比对照组的自主活动明显减少(P<0.05)。尼氏染色显示:AD模型小鼠脑内神经元密度显著低于野生型小鼠。AD模型小鼠中,对照组脑内神经细胞明显肿胀,尼氏小体明显减少而致细胞质淡染,神经细胞密度降低(85.2±13.3);而VPA处理组脑内神经元肿胀程度明显减轻,神经元数量显著回升(116.9±16.2,P<0.05),但VPA不影响野生型小鼠脑内的神经元数量及形态(VPA处理组:142.2±24.4 vs生理盐水对照组:136.7±23.1,P>0.05)。电镜结果显示AD模型小鼠对照组脑内神经元细胞核、线粒体及神经毡肿胀明显,突触结构稀松;而AD模型小鼠VPA处理组脑内神经元细胞核、线粒体及神经毡的水肿明显减轻,突触结构清晰。结论 VPA可显著减少APP/PS1双转基因AD模型小鼠的自主行为,显著减轻躁狂症状;VPA可改善APP/PS1双转基因小鼠脑内神经细胞的形态结构,减少肿胀的神经元并抑制神经元数量的减少。     

蛋白酶体抑制剂处理神经细胞系后Nicastrin的表达变化及其与Aβ的关系

目的 探讨蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内Nicastrin(NCT)的表达变化,及其与γ-分泌酶活性和Aβ生成的关系.方法 运用亚细胞器分级分离技术、免疫共沉淀、Western blot和ELISA等检测神经细胞内NCT的表达及Aβ水平.结果 正常情况下NCT主要分布于内质网和高尔基复合体,极少量分布于溶酶体,蛋白酶体抑制剂Lactacystin处理后NCT水平升高(P<0.001),且细胞内增多的NCT也主要聚集在内质网和高尔基复合体;NCT与泛素在细胞内共存;NCT的蛋白降解不受PS的影响;NCT降解受阻可引起细胞内γ-分泌酶的底物C99、C83显著减少,而γ-分泌酶的产物Aβ40、Aβ42的生成显著增多(P<0.01).结论 NCT的降解可通过泛素-蛋白酶体途径实现,蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内NCT水平升高,且增多的NCT可促进APP的代谢及Aβ的生成.     

镉对雄性大鼠颌下腺颗粒曲管细胞损伤的光镜和电镜观察

目的研究镉对雄性大鼠颌下腺颗粒曲管(GCT)细胞的损伤。方法小剂量氯化镉(2mg/kg体质量)腹腔内注射后,观察光镜下GCT细胞的形态改变及计数各种细胞的数量变化;并用透射电镜动态观察GCT细胞的超微结构改变。结果①光镜下见镉注射后4h～60d,各组GCT细胞胞质染色变浅,分泌颗粒减少,无颗粒细胞数量显著减少,少颗粒细胞数量明显增多。②电镜下见镉注射后4h,GCT细胞胞质内髓样结构形成,部分线粒体肿胀,管周毛细血管内皮细胞微吞饮小泡增多;7d时,GCT细胞的损伤最为显著;30d时,细胞的超微结构损伤有所减轻;60d时,GCT细胞内线粒体仍有少数肿胀,毛细血管内皮细胞微吞饮小泡数量减少。结论镉对雄性大鼠GCT细胞的生物合成功能有损伤,其早期超微结构损伤与镉的直接作用有关。     

LCD教学模式在解剖实验教学中的实践探索

结合本校教学实际,重庆医科大学解剖学教研室在解剖实验教学过程中建立了LCD（learning, communication & discussion）教学模式。该模式包括3个基本环节;L指学习（learning）,包括在教学大纲的指导下进行学习（syllabus orientated learning）、拓展性学习（extended learning）以及基于专题的自主学习（topic based learning）;C和D（communication & discussion）是指在学习的基础上进行交流和讨论。LCD教学可提高学生学习解剖学知识的兴趣,加深其对基础知识的理解,促进基础和临床的结合,使学生的自主学习和创新学习等能力得到提高。