人肺腺癌细胞系中SIRT1表达与奈达铂敏感性的关系

目的探讨5株人肺腺癌细胞系HCC827、H1650、H1975、A549和H1299中沉默信息调节因子1(Sirtuin 1,SIRT1)与奈达铂(Nedaplatin,NDP)药物敏感性的关系。方法采用实时定量PCR及western blot检测5株人肺腺癌细胞系SIRT1 m RNA及蛋白质表达水平;NDP作用于细胞后,用CCK-8法检测细胞活力并计算半数生长抑制浓度值(the half growth inhibition concentration,IC50);通过si RNA干扰技术下调A549、H1299、H1650和H1975细胞系中SIRT1的表达,采用CCK-8法和流式细胞术分别检测NDP对细胞存活率和细胞凋亡的影响。结果与HCC827细胞(m RNA和蛋白质相对表达量分别为1.00和0.11±0.02)相比,H1650、H1975、A549和H1299细胞中SIRT1 m RNA(分别为4.53±0.74、3.11±0.64、15.76±2.28和18.09±1.17)和蛋白质表达水平(分别为0.23±0.03、0.21±0.02、0.52±0.11和0.56±0.08)均明显上调,差异有统计学意义(F分别为122.10和26.50,P0.01);A549和H1299细胞对NDP的敏感性[IC50值分别为(7.38±1.59)μmol/L和(8.14±1.43)μmol/L]明显高于HCC827、H1650和H1975细胞[IC50值分别为(26.16±4.35)μmol/L、(22.29±3.26)μmol/L和(24.41±2.58)μmol/L],差异有统计学意义(F=30.86,P0.01)。A549和H1299细胞转染并经NDP处理后,si SIRT1组细胞存活率明显高于NC组(F分别为235.10和39.20,P0.01),细胞凋亡率明显低于NC组(t分别为7.29和6.68,P0.05);而在H1650和H1975细胞中,si SIRT1组细胞存活率明显低于NC组(F分别为185.40和60.09,P0.01),细胞凋亡率明显高于NC组(t分别为6.15和31.36,P0.01)。结论在SIRT1高表达的A549和H1299细胞中SIRT1表达增加了细胞对NDP敏感性,而SIRT1中表达的H1650和H1975细胞中SIRT1表达降低了细胞对NDP的敏感性,提示在人肺腺癌细胞中SIRT1可能在铂类耐药发挥双重作用。     

非小细胞肺癌患者胸腔积液中EGFR基因突变的检测及临床意义

目的:探讨采用非小细胞肺癌患者胸腔积液标本肿瘤细胞进行表皮生长因子(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变检测的可行性及其临床意义.方法:采用Sanger测序法检测17例非小细胞肺癌患者胸腔积液及对应的17例手术或肺部穿刺组织标本EGFR基因18～21外显子基因突变,并进行统计分析.结果:胸腔积液标本17例共检出5例突变,检出率29.41％.手术或穿刺组织标本17例共检出7例突变,检出率41.18％.胸腔积液标本EGFR基因突变检出率略低于手术或穿刺组织标本.结论:采用Sanger测序法进行非小细胞肺癌患者胸腔积液中EGFR基因突变的检测,方法可行,尤其适用于无法获取手术或肺部穿刺组织标本的患者.     

三氧化二砷诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的机制。方法建立大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖模型。通过透射电镜、流式细胞仪观察As2O3作用后细胞凋亡形态学和细胞胞浆游离钙离子(Ca^2 )浓度的变化。结果经As2O3处理的VSMCs电镜下呈现凋亡的特征性改变,形态学上表现为细胞胞膜完整、染色质固缩及核碎裂。流式细胞仪分析显示,VSMCs在As2O3作用后出现凋亡峰,而As2O3能通过促进细胞外Ca^2 内流和细胞内Ca^2 池的释放提高胞浆游离Ca^2 浓度。结论As2O3可诱导VSMCs凋亡,并可能与胞浆游离Ca^2 浓度升高有关。     

VITROS 350全自动干式生化分析仪的应用评价

目的观察VITROS 350全自动干式生化分析仪对多项生化指标检测结果,并作出方法学评价。方法选取50例无溶血、无黄疸、无脂血的血清标本,分别用VTTROS 350与OLYMPUS AU2700生化分析仪检测钾（K^＋）、钠（Na^＋）、氯（CI^-）、葡萄糖（GLU）、尿素（Urea）、肌酐（Cr）、尿酸（UA）、淀粉酶（AMS）、谷草转氨酶（GOT）、乳酸脱氢酶（LDH）等十项生化指标,对二种测定结果进行比较;同时用VITROS 350分析仪检测低、高定值血清中以上十项生化指标,对其准确度与精密度进行评价。结果VITROS 350与OLYMPUS AU2700生化分析仪相关性好,准布鲁诺与精密度高。结论VITROS 350全自动干式性化分析仪适用于临床检验科急诊生化的检测。     

应用PCR方法检测致病微生物研究进展

致病微生物常规检测方法(如分离培养、生化鉴定等),操作复杂、特异性不强、所需时间长。自从 1985年PCR技术问世以来,这一技术已被应用到生命科学的各个领域。上世纪80年代末,研究人员将其应用于微生物的检测,因其特异性强、敏感性高、操作简便、所需时间短等优点,目前已被广泛用     

miR-21联合CA19-9检测诊断胰腺癌临床价值分析

目的探究微RNA 21(miR-21)联合糖类抗原19-9(CA19-9)检测诊断胰腺癌的临床价值。方法回顾性选择2013年2月至2017年10月间于宜兴市人民医院和中国人民解放军第四一一医院确诊的胰腺癌患者66例(胰腺癌组),并选择同时期、同年龄段的良性胰腺疾病患者66例(良性疾病组)以及健康体检者66例(对照组)。比较三组患者miR-21和CA19-9的水平差异,并以临床诊断作为金标准,绘制受试者工作曲线(ROC)并评价miR-21和CA19-9单独和联合诊断胰腺癌的诊断效能(包括诊断准确率、敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值等)。结果三组患者的miR-21和CA19-9水平间有显著的统计学差异(P0.05);其中,胰腺癌组患者的miR-21和CA19-9水平均显著高于对照组和良性疾病组,差异均有统计学意义(P0.05)。ROC曲线显示,miR-21和CA19-9联合诊断胰腺癌的曲线下面积(AUC)显著高于miR-21和CA19-9,其中,miR-21的最佳截点为5.78×10~5拷贝/μl,CA19-9的最佳截点为46.85 U/L。应用上述最佳截点,miR-21和CA19-9联合诊断胰腺癌的敏感度和阳性预测值均明显高于miR-21和CA19-9单独诊断(P0.05)。结论 miR-21联合CA19-9检测诊断胰腺癌具有较高价值,其中miR-21≥5.78×105拷贝/μl和/或CA19-9≥46.85 U/L可以作为胰腺癌筛查的最佳截点。     

5种尿液隐血分析方法的比较

尿液分析仪的使用大大提高了尿液检测的准确性和灵敏度,为克服尿液隐血检测的“假阳性”、“假阴性”,本文联合应用免疫法、干化学法、加热煮沸法、UF-100沉渣计数法及显微镜镜检法分析尿液标本隐血。结果如下。[第一段]     

LXR异常激活上调p27蛋白致胰岛β细胞周期阻滞

目的探讨肝X受体(liver X receptors,LXR)激动剂对小鼠胰岛β细胞系MIN6的作用。方法 LXR激动剂T0901317作用于MIN6细胞后,CCK-8法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞周期变化;实时定量RT-PCR法检测S期激酶相关蛋白2(Skp2)和p27 mRNA的表达水平;western blot检测Skp2和p27蛋白的表达情况。结果与control组相比,1、5和10μmol/L药物处理后的细胞存活率分别为(98.54±0.94)%、(87.03±0.93)%和(75.57±1.85)%,各组间差异有统计学意义(F=301.90,P0.01)。与control组G1期(35.93±2.25)%和S期(52.87±1.19)%相比,1、5和10μmol/L药物处理组G1期细胞比例分别为(38.45±0.91)%、(45.46±1.34)%和(53.28±1.14)%,差异有统计学意义(F=80.83,P0.01)。S期细胞比例分别为(48.65±0.85)%、(36.31±1.37)%和(31.45±1.22)%,差异有统计学意义(F=221.30,P0.01)。10μmol/L T0901317处理组p27蛋白表达水平(2.84±0.14)明显高于control组(2.28±0.10),差异有统计学意义(t=4.54,P0.05)。但两组间p27 mRNA水平差异无统计学意义(t=0.28,P0.05)。10μmol/L T0901317下调Skp2 mRNA(0.52±0.02,t=29.22,P0.01)和蛋白质水平(相对灰度值为0.98±0.12,control组为1.89±0.01,t=10.98,P0.01)。以对照组(100%)为参照,转染组、药物处理组和干扰组的细胞存活率分别为(100.97±1.08)%、(75.03±1.83)%和(86.67±2.45)%,与对照组比较,转染组间差异无统计学意义(t=1.542,P0.05),药物处理组细胞活力下降(t=23.58,P0.01);药物处理组和干扰组间差异亦有统计学意义(t=7.77,P0.01)。结论 LXR异常激活可导致胰岛β细胞增殖抑制,p27蛋白表达量增加,其机制可能为降解调控p27蛋白的Skp2 mRNA和蛋白质表达水平下降。     

类风湿关节炎患者CD4+T细胞亚群4-1BB和CD28分子的表达及临床意义

目的 探讨类风湿性关节炎(RA)患者CD4+T细胞4-1BB和CD28的表达及其与疾病的关系.方法 根据DAS积分将RA组分为活动期组和稳定期组,用多色荧光流式细胞技术检测CD28、4-1BB在RA组和正常对照组外周血T细胞上的表达.结果 与对照组比较,RA组CD4+T细胞增高,CD8+T细胞降低,CD4+CD28-T细胞频数增高(P<0.05).RA组4-1BB在CD4+T细胞和CD4+CD28-T细胞上的表达明显高于对照组(P<0.05).活动期组CD4+CD28-T细胞频数和4-1BB在CD4+T细胞上的表达高于稳定期组(P<0.05).结论 共刺激分子CD28在RA患者自身免疫性T细胞中表达减少,而4-1BB表达相应增高,这可能与此类自身免疫反应细胞组织损伤活性增强.