小干扰RNA沉默鸟苷酰环化酶C基因促进胃癌细胞的凋亡

目的:利用RNA干扰技术,研究靶向鸟苷酰环化酶C(Guanylyl cyclaseC,GC-C)的小干扰RNA(siRNA)在体外对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响。方法:利用pSilencerTM4.1-CMV neo通过siRNA表达载体法制备GC-CsiRNA,将GC-CsiRNA转染胃癌SGC-7901细胞,流式细胞检测技术及原位末端标记(TUNEL)法检测转染前后细胞的凋亡。结果:流式细胞仪结果分析示转染组平均凋亡率为5.48%±0.10%(48h)和5.63%±0.11%(72h),较对照组0.50%±0.09%明显增加(P<0.05)。TUNEL检测见特有的凋亡征象,对照组则无明显变化。结论:沉默鸟苷酰环化酶C基因可促进胃癌细胞凋亡,可能为临床探索胃癌生物治疗提供新的靶点。     

上调CDX2基因表达对人胃癌SGC-7901细胞miRNA表达谱及生物学功能的影响

目的:筛选上调尾型同源盒基因2(caudal type homeobox gene 2,CDX2)基因表达时人的胃癌细胞SGC-7901中差异表达的miRNA并预测其靶基因,并观察其对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:提取瞬时转染48 h后空载体组(转染P E G F P-N1组)和转染组(转染P E G F P-N1-C D X2组)细胞的总R N A,应用m i R N A芯片检测差异表达的miRNA,并通过Miranda、TargetScan、Mirtarget2软件预测其靶基因,通过Gene Ontology(GO)和KEGG pathway分析了解靶基因功能.CCK8法检测细胞增殖能力,划痕试验、Transwell小室、细胞黏附实验检测各组细胞体外迁移黏附能力.结果:PEGFP-N1-CDX2组较空载体组有59种差异表达的miRNA,其中25种miRNA发生2倍以上表达上调,34种miRNA发生2倍以上表达下调.通过Gene Ontology(GO)和KEGG pathway分析得到部分miRNA靶基因功能,这些靶基因参与了肿瘤的发生、发展、转移及预后.与对照组相比,PEGFP-N1-CDX2组的胃癌细胞生长、迁移和黏附能力均明显受到抑制(P<0.05).结论:上调CDX2基因表达可明显抑制人胃癌细胞SGC-7901的生长,抑制其迁移黏附能力,CDX2基因的抗肿瘤作用可能与miRNA有关.     

增殖诱导配体及其受体在肿瘤组织中的表达与意义

目的分析增殖诱导配体（APRIL）及其受体在不同肿瘤组织及肿瘤发展不同阶段的表达水平,探讨其与肿瘤发生的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ-PCR）检测了临床上常见肿瘤组织中APRIL及其受体mRNA的准确含量,并以靶基因和内参mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果肿瘤组织中APRIL表达水平显著高于交界组织（P〈0．05）和正常组织（P〈0．05）;B细胞成熟抗原（BCMA）和穿膜蛋白活化物（TACI）表达水平在大多数肿瘤组织中与正常组织差异无统计学意义（P〉0．05）;APRIL在肠上皮化生、异型增生和胃癌组织中表达水平显著高于正常黏膜（P〈0．05）,APRIL在胃癌组织中表达水平显著高于肠上皮化生和异型增生（P〈0．05）,而其受体BCMA和TACI在各组胃黏膜病变之间表达水平无统计学意义（P〉0．05）。结论成功建立RFQ-PCR检测APRIL及其受体mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性;APRIL在肿瘤发生、发展过程中可能起了重要作用;除了BCMA和TACI外,肿瘤细胞可能还存在APRIL未知受体;APRIL在某些类型肿瘤有可能主要是通过受体BCMA而不是TACI发挥作用。     

胃黏膜癌变过程中增殖诱导配体及其受体表达水平分析

目的 分析胃癌发生各阶段组织中增殖诱导配体（APRIL）及其受体mRNA的表达水平。方法 在APRIL及其受体基因的高保守区设计相应引物和荧光探针，实时检测PCR产物的荧光强度，根据标准品建立标准曲线，由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA的准确含量，并以靶基因和内参β2微球蛋白（β2M）mRNA含量比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果 采用实时荧光定量PCR（RFQ-PCR）检测靶基因mRNA含量的线性范围为10^1～10^9pg／ml，批内和批间重复性测定的变异系数（d）分别为6．52％～12．02％和8．76％～14．16％。APRIL在肠上皮化生、异型增生和胃癌组织中的表达水平显著高于正常胃黏膜（P〈0．05）．在胃癌组织中的表达水平又显著高于肠上皮化生和异型增生（P〈0．05），而其受体B细胞成熟抗原（BCMA）和穿膜蛋白活化物（TACI）在各种胃黏膜病变之间表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 RFQ-PCR检测APRIL及其受体mRNA含量，具有较好的灵敏度和重复性。APRIL在胃癌病变演进过程中呈现累积和渐进趋势，可能在胃癌发生、发展过程中起重要作用．有可能成为胃癌早期诊断和抗癌治疗的靶分子。肿瘤组织可能还表达APRIL未知受体。     

实时荧光定量PCR检测鸟苷酰环化酶C基因表达方法的建立

目的建立实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)检测鸟苷酰环化酶C(GC-C)基因表达的方法。方法在GC-C基因高保守区设计了特异性的引物和探针,RT-PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中GC-C mRNA含量,并以GC-C mRNA和β2M mRNA含量的比值作为评价GC-C表达水平的指标。结果本法检测GC-C mRNA含量的线性范围为101pg／ml-109pg／ml,样本批内和批间CV值分别为6．87％一11．12％和8．86％- 15．19％。30例健康献血员和11例大肠良性病变患者的外周血单个核细胞(PBMC)中均未检出GC-C mRNA表达,大肠癌患者PBMC的GC-C mRNA检出率为83．8％(31／37),表达水平为0．88±0．06。10例大肠癌组织和T84细胞株均检出GC-C mRNA,表达水平分别为每μg组织(0．86±0．07)和每个细胞0．0082。结论成功建立RFQ-PCR检测GC-C mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度、特异性和可重复性。     

人胃腺癌细胞株AGS、SGC-7901增殖诱导配体mRNA的表达

目的:比较人AGS、SGC-7901两种胃癌细胞株中增殖诱导配体(APRIL)mRNA的表达水平。方法:通过半定量RT-PCR检测APRIL mRNA,筛选出APRIL mRNA高表达细胞株。结果:以GAPDH为内参,通过计算机图像扫描系统分析各株细胞APRIL mRNA的表达量,获得人胃腺癌细胞株APRIL mRNA表达量的相对值,AGS0.09,SGC-79010.61。结论:SGC-7901为APRIL mRNA高表达细胞株。     

胃癌患者术前外周血鸟苷酸环化酶C mRNA表达与术后复发的关系

目的 探讨胃癌患者术前外周血鸟苷酸环化酶C信使RNA(guanylate cyclase C,GC-C mRNA)表达与术后复发的关系。方法 收集60例胃癌患者术前外周血和同期门诊15例肠上皮化生、21例异型增生患者以及20例健康体检者外周血标本,应用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)检测GC-C mRNA的表达,并分析其与临床病理参数及胃癌术后复发的关系。结果 健康体检者外周血中未检测到GC-C mRNA表达,肠上皮化生和异型增生患者外周血GC-C mRNA表达阳性率分别为9.5%(2/15)和20.0%(3/21);而胃癌患者术前外周血阳性率为48.3%(29/60),高于健康体检者及肠上皮化生、异型增生患者(P<0.05)。胃癌患者术前外周血GC-C mRNA表达与肿瘤Laurén分型、临床TNM分期、浸润深度、淋巴结转移和分化程度等均有关(P<0.05,P<0.01)。GC-C阳性胃癌患者术后1~4年的累计肿瘤复发率分别为41.4%、79.3%、96.6%和100.0%;GC-C阴性患者术后1~4年的累计肿瘤复发率分别为16.1%、41.9%、67.7%和80.6%,且GC-C阳性患者术后中位复发时间短于GC-C阴性患者。两组患者术后1~4年的累计肿瘤复发率、中位复发时间和总体生存期差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 胃癌患者术前外周血GC-C mRNA阳性者预后更差,且更易出现术后短期复发。     

超声内镜在急性胰腺炎中的应用进展

急性胰腺炎(AP)是临床上常见的胰腺疾病,早期诊断和正确治疗AP及其并发症对缓解患者的症状及改善预后十分重要.超声内镜(EUS)对胰腺实质、胰胆管的分辨率较高,近年来EUS在AP中的应用逐渐增多,其在病因诊断、重症急性胰腺炎(SAP)的早期预测和内镜下治疗,以及预后预测和随访等方面发挥着重要的作用.该文就EUS在AP中...     

稳定干扰鸟苷酸环化酶C基因表达的人胃腺癌细胞株的筛选和建立

背景：正常胃黏膜组织不表达肠上皮细胞特异性受体鸟苷酸环化酶C（GC-C）,但肠化生、异型增生和胃腺癌组织存在GC-C异位表达。目的：筛选并建立GC-C特异性短发夹RNA（shRNA）稳定转染的胃腺癌细胞株。方法：构建靶向GC-C基因的shRNA表达载体,以脂质体法转染胃腺癌细胞株SGC-7901．实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测GC—CmRNA和蛋白表达。G418筛选阳性克隆并建立GC—CshRNA稳定转染的SGC．7901细胞株．并行RT-PCR鉴定。结果：GC—CshRNA可抑制SGC-7901细胞株的GC—C基因表达．以GC—Csh3的抑制效果最佳．转染48h后的GC—CmRNA和蛋白沉默率分别为77．0％和62．2％。有效筛选并建立了GC-CshRNA稳定转染的SGC-7901细胞株．GC-CmRNA沉默率为65-3％。结论：成功建立了GC-CshRNA稳定转染的SGC-7901细胞株．为下一步研究奠定了基础。     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷诱导CDX2基因表达对人胃癌细胞株MKN45增殖和凋亡的影响

背景：DNA甲基化导致基因表达沉默是胃癌发生的重要步骤。近年发现肠表型调节因子CDX2在胃癌中具有抑癌基因的作用。目的：探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-aza—CdR）对人胃癌细胞株MKN45中CDX2基因表达的影响及其对细胞增殖和凋亡的作用。方法：以不同浓度5-aza—CdR（2．5、5、10μmo]／L）处理胃癌细胞株MKN45,甲基化特异性PCR（MSP）检测CDX2启动子区甲基化状态;实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测CDX2mRNA和蛋白表达：CCK8法检测MKN45细胞增殖活性,AnnexinV．FITC／PI检测细胞凋亡和Hoechst33258染色观察其凋亡形态：比色法检测caspase-3活性。结果：MKN45细胞中CDX2基因启动子区高甲基化．CDX2mRNA表达极低且蛋白不表达：经3种浓度5-aza-CdR处理72h后．MKN45细胞CDX2基因启动子区高甲基化发生逆转．CDX2mRNA和蛋白表达均上调。与对照组相比,5-aza-CdR呈剂量依赖性地抑制MKN45细胞增殖和促进凋亡（P〈0．05）：Hoechst33258染色示细胞核致密浓染、细胞核碎裂;caspase-3活性随着5．aza．CdR浓度的增加而升高（P〈0．05）。结论：MKN45细胞中CDX2基因表达缺失可能与其启动子区CpG岛高甲基化有关;5-aza—CdR能有效逆转CDX2基因的异常甲基化．诱导其再表达．并抑制MKN45细胞增殖和促进凋亡．该作用可能与caspase-3活性有关．