实时荧光定量PCR检测大肠癌患者外周血鸟苷酰环化酶C基因及其临床意义

目的:建立人鸟苷酰环化酶C(GC-C)含量实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)检测的新方法,观察大肠癌患者外周血单个核细胞(PBMC)GC-C mRNA表达水平并探讨其临床意义.方法:在GC-C基因高保守区设计了特异性的引物和探针,RT-PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立的标准曲线,由软件自动计算出待测样本(30例健康献血员、11例大肠良性病变和37 例大肠癌)中GC-C mRNA准确含量,并以GC-C mRNA和β2微球蛋白 mRNA含量的比值作为评价GC-C表达水平的指标.结果:本法检测GC-C mRNA含量的线性范围为101 ～109 pg/ml,样本批内和批间变异系数(CV)值分别为6.87%～11.12%和8.86%～15.19%.30例健康献血员和11例大肠良性病变样本的PBMC中均未检出GC-C mRNA表达,大肠癌患者外周血GC-C mRNA的检出率为83.8%(31/37).大肠癌患者外周血PBMC GC-C mRNA表达水平为0.88±0.06,与Duke分期、淋巴结转移和肝转移密切相关,与年龄、性别、肿瘤大小等无关.结论:GC-C mRNA RFQ-PCR检测外周血大肠癌细胞具有较好的检测灵敏度、特异性和重复性,GC-C mRNA表达水平可能对指导大肠癌Duke分期、判断淋巴结转移和肝转移、指导术后综合治疗均有一定价值.     

鸟苷酸环化酶C和尾型同源盒转录因子2在胃癌及癌前病变组织中的表达及意义

目的 研究鸟苷酸环化酶C(GC-C)和尾型同源盒转录因子2(CDX2)基因与蛋白在胃癌及癌前病变组织中的表达并探讨其临床意义.方法 收集30例手术切除的胃癌及相应癌旁5 cm胃黏膜组织,另32例非胃癌患者胃镜下取活检标本,其中23例肠上皮化生、9例异型增生.应用逆转录(RT)-PCR检测GC-C和CDX2 mRNA在胃癌及癌旁组织中的表达,Western印迹和间接免疫荧光组化技术检测GC-C和CDX2蛋白的表达,同时检测两者在肠上皮化生和异型增生中的表达.结果 RT-PCR显示GC-C和CDX2 mRNA在胃癌中的表达率分别为20/30和19/30,显著高于癌旁组织(0/30和0/30,P值均=0.000).Western印迹检测GC-C和CDX2蛋白在胃癌组织中表达率分别为19/30和17/30,显著高于癌旁组织(0/30和0/30,P值均=0.000).免疫荧光检测GC-C和CDX2在癌旁组织中不表达,在肠上皮化生组织中表达率为39.1 %和39.1%、异型增生组织为55.6%和55.6%、胃癌组织为56.7%和60.0%,与癌旁组织间差异有统计学意义(P值均=0.000).但在肠上皮化生、异型增生和胃癌间阳性率比较差异无统计学意义(P值均＞0.05).两者在肠型胃癌中的表达高于弥漫型(P值分别=0.009和0.024),但与年龄、性别、病灶大小、临床病理分期、分化程度和淋巴结转移等因素无关(P值均＞0.05).在肠上皮化生和胃癌中GC-C与CDX2的表达呈正相关(r分别=0.4524和0.3845,P分别=0.0371和0.0408).结论 GC-C和CDX2的异常表达与胃黏膜癌变的发生有关,可能参与人胃腺癌致癌过程的调节,检测GC-C与CDX2有助于早期胃癌和胃癌前病变诊断.     

消化系肿瘤增殖诱导配体高表达细胞株的筛选

目的筛选出增殖诱导配体（APRIL）mRNA高水平表达的人消化系肿瘤细胞株．为进一步探讨APRIL基因在消化系统肿瘤发生、发展以及转移过程中的作用机制奠定基础。方法选择2株人胃癌细胞（AGS、SGC7901）和3株人胰腺癌细胞（PANC1、CFPAC-1、BxPC3）培养提取mRNA后，逆转录成cDNA作PCR模板。以APRIL基因高保守区设计特异性的引物．以磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）为内参，PCR扩增目的片段．通过计算机图像扫描系统分析各株细胞的APRIL mRNA的表达量．以表达量最高的1株作为1-获得各细胞株的APRIL mRNA表达量的相对值。结果5株细胞APRIL mRNA的相对值分别为：AGS．0．09；SGC 7901．0．61；PANC 1．0．45：CFPAC 1.1；BxPC3．0．57．按表达量高低顺序为：CFPAC 1〉SGC 7901〉BxPC3〉PANC 1〉AGS。结论在不同肿瘤细胞中APRIL的表达有高有低．提示APRIL基因在肿瘤发生、发展过程中起一定作用。     

SHOX2和RASSF1A基因甲基化在消化道肿瘤诊断和预后预测中价值的研究进展

消化道肿瘤发病率较高,由于其早期诊断较为困难,导致患者预后较差,因此对高危人群的筛查、早期诊断和及时治疗尤为重要。近年来,表观遗传学在肿瘤发病机制中的作用受到了广泛关注并取得了突破性研究进展。促癌基因矮小同源盒基因2(SHOX2)和抑癌基因Ras相关结构域家族1A(RASSF1A)甲基化作为生物标志物在消化道肿瘤诊断和预后预测中的敏感度和特异度较高,有较高的应用价值。该文就SHOX2和RASSF1A基因甲基化在消化道肿瘤诊断和预后预测中价值的研究进展作一综述。     

粪便标志物检测在大肠癌筛查中的应用

大肠癌早期发生中常伴随基因突变、蛋白质和酶等分子代谢异常,通过检测粪便中基因、蛋白质和酶等标志物有助于大肠癌早期诊断。其中粪便K-ras、APC、p53、长片段DNA、DNA甲基化、钙卫蛋白(CPT)、微型染色体维持蛋白-2、促衰变因子、癌胚抗原(CEA)、Adnab-9和端粒酶、环氧合酶2 (COX-2)、肿瘤M2型丙酮酸激酶(TU M2-PK)等在筛选大肠癌中取得了较大进展。     

人胃癌细胞株CDX2基因表达与其启动子区甲基化的关系

目的:探讨人胃癌细胞株CDX2基因表达与其启动子区甲基化的关系.方法:不同浓度5-aza-CdR处理MKN45细胞株,甲基化特异性PCR(MSP)检测用药前后CDX2启动子甲基化状态;实时荧光定量RT-PCR和Western Blot分别检测CDX2和DNMT1 mRNA和蛋白表达.结果:MKN45细胞株CDX2基因启动子区域高甲基化,CDX2 mRNA表达极低,蛋白不表达;经3种浓度5-aza-CdR处理MKN45细胞72 h后,细胞中CDX2 mRNA和蛋白表达均出现上调,而DNMT1表达出现下调.结论:CDX2基因表达下调与其启动子CpG岛高甲基化有关,DNMT1可能参与该过程的调节.