hTRX PR39融合基因cDNA克隆的构建及鉴定

目的研究人硫氧还蛋白（hTRX）和抗菌肽PR39基因在脑缺血疾病治疗中的作用,构建hTRX PR39cDNA融合基因。方法设计合成PR39、hTRX正向和反向引物,采用PCR方法,扩增获得两端具有BamHI和Ecor721、Eco721和EcoI酶切位点的PR39 cDNA和hTRX cDNA片段,并分别克隆到pGEM T easy中,转化细菌,筛选阳性克隆,酶切鉴定并测序。BamH I和EcoR721双酶切pGEM T hTRX和pGEM T PR39,将获取的PR39/BamHI,EcoR721片段克隆到pGEM T hTRX/BamHI,EcoR721载体中,构建pGEM T hTRX PR39载体。结果经DNA测序证实,修饰过的hTRX cDNA、PR39 cDNA片段的核酸序列和推导的氨基酸同数据库资料一致。重组质粒pGEM T hTRX PR39酶切图谱证实hTRX PR39融合肽cDNA已克隆到pGEM T表达载体中。结论成功克隆出具有EcoR721和EcoRI、BamH I和EcoR721酶切位点的hTRX cDNA和PR39 cDNA片段,并构建pGEM T hTRX PR39载体。     

脑宁康颗粒对脑出血大鼠的脑保护作用

目的研究依据清热解毒法制成的脑宁康颗粒对脑出血大鼠脑组织的保护作用及机制。方法将大鼠随机分为5组：假手术组、脑出血模型组、脑宁康小、中、大剂量组,采用胶原酶Ⅶ诱导大鼠脑出血模型,术后2h各治疗组给予不同剂量脑宁康颗粒灌胃,余组给予等容量生理盐水,连续用药3天和7天后取脑组织,采用HE染色观察脑组织病理形态学改变,免疫组织化学法和TUNEL法分别检测脑出血周围组织凝血酶受体-1（PAR-1）的表达和神经细胞凋亡情况,干湿比重法测定脑组织水肿情况。结果脑出血大鼠脑组织PAR-1表达增强,各脑宁康治疗组脑组织病理形态明显改善,脑组织PAR-1表达减少,TUNEL阳性细胞数减少,脑水肿减轻,与模型组比较差异有显著性（P〈0.05,P〈0.01）。结论脑出血后的脑组织PAR-1高表达可能介导了神经细胞凋亡和脑水肿,脑宁康颗粒对出血脑组织有保护作用,可能与其抑制脑出血后脑组织PAR-1表达、减少细胞凋亡,从而减轻脑水肿相关。     

低频超声辅助尿激酶溶栓对大鼠脑梗死基质金属蛋白酶9的影响

目的观察低频超声辅助尿激酶静脉溶栓治疗大鼠急性脑梗塞后基质金属蛋白酶 9(MMP 9)的变化,探讨其在低频超声助溶脑缺血再灌注损伤及出血性转化中的作用。方法应用血栓栓塞法制备Wistar大鼠脑梗塞模型,分别给予尿激酶、低频超声照射,采用NSS评价治疗前后神经功能,采用红四氮唑染色法测定脑梗塞体积,采用免疫组化法监测MMP 9 的表达。结果梗塞组用药前后NSS评分差异不明显（t=0.85,P>0.05）;尿激酶组、低频超声加尿激酶组给药后24?h NSS评分明显低于溶栓前（t=12.59, t=15.31,　P均<0.01）。3组梗塞灶体积有显著性差异（F=125.99, P<0.01）, 尿激酶组、低频超声加尿激酶组梗塞灶体积显著小于梗塞组（q=18.02,P<0.01;q=20.62,P<0.01）,两组之间差异不显著（q=2.59,P>0.05）。尿激酶组和低频超声加尿激酶组MMP 9表达阳性率及光密度值均显著高于梗塞组（F=78.92, F=209.14,P<0.01）,两组之间差异不明显（q=2.86,2.47,P>0.05）。结论尿激酶在脑梗死超早期有显著溶栓作用,低频超声波具有显著的协助尿激酶溶栓作用,可以减少尿激酶用量,MMP 9可能在脑梗塞后溶栓的出血转化中起着重要作用。     

酶酚酸酯对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠神经功能的影响

目的观察酶酚酸酯(MMF)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠神经功能改善及脑脊髓组织的影响。方法用豚鼠全脊髓匀浆和完全弗氏佐剂制成的完全抗原免疫Wistar大鼠,制备EAE大鼠模型,以生理盐水和完全弗氏佐剂注射的Wistar大鼠作为对照。对照组大鼠7只,造模成功且存活的大鼠为25只,随机分为MMF大剂量组（n=8只）,MMF小剂量组（n=8只）,模型组（n=9只）。连续给药14d,每天观察记录神经功能评分及体重变化,14d后HE染色观察脑、脊髓组织病理变化。结果EAE大鼠的造模成功率为72.1%。与对照组相比,各组EAE大鼠神经功能评分明显增加,体重明显下降(P＜0.01),脑脊髓组织病理学变化主要表现为血管周围有大量炎细胞浸润;与模型组相比,用MMF治疗后神经功能评分有所下降,体重增加,病理表现有不同程度的减轻,且大剂量MMF疗效优于小剂量MMF(P＜0.01)。结论MMF能改善EAE大鼠的症状,促进神经功能恢复,并具有剂量依赖性。     

传导性失语患者复述行为的分析

语言是人类进行思想和感情交流独有的高级心理活动 ,常用的形式为口语和文字 ,复述是口语表达的基本功能之一。不同类型的失语症 ,语言损害的表现亦不相同。传导性失语 (ｃｏｎｄｕｃｔｉｏｎＡｐｈａｓｉａ ,ＣＡ)以其复述功能严重障碍 ,而自发谈话、口语理解、命名以及朗读等其他语言功能障碍较轻 ,与复述功能不成比例的受损为特征。我们在以往研究的基础上 ,对 10例ＣＡ患者汉语复述行为及其特征进行了详细的研究分析。资料与方法一、10例ＣＡ患者均为脑卒中后失语病例 ,男 8例 ,女 2例 ,年龄 46～ 6 8岁 ,平均 (5 9.32± 9.13)岁。右利…     

β-七叶皂甙钠对大鼠脑出血后血SOD、NO、TNF-α的影响

目的:观察β-七叶皂甙钠对大鼠脑出血后血中超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,探讨其治疗作用的机制。方法:将实验大鼠随机分为假手术1、2组;模型1、2组;七叶皂甙1、2组,采用胶原酶诱导大鼠形成脑出血模型,术后2h七叶皂甙1、2组腹腔注射β-七叶皂甙钠(2.8mg/kg),另4组注射生理盐水,分别在3、7d后取血,测定血SOD、NO、TNF-α含量。结果:与假手术组比较,模型组血SOD、NO、TNF含量明显下降和升高(P<0.01),与模型组比较,七叶皂甙组血SOD、NO、TNF含量明显升高和下降(P<0.01)。结论:β-七叶皂甙钠对脑出血后神经细胞损伤具有保护作用,其机制可能与抗自由基抑制NO和TNF毒性作用有关。     

大豆异黄酮对β-淀粉样蛋白诱导海马S100β表达的影响

越来越多的证据显示,阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD) 脑内存在免疫炎症反应及外周细胞免疫低下。植物雌激素是指提取自天然植物中的雌激素,可与人体内雌激素受体(estro- gen receptor,ER)结合,对机体的细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫功能均有不同程度的影响。大豆异黄酮是大豆生长中形成的一类次生代谢产物,也是一种植物雌激素。本研究通过建立大鼠AD炎症病理模型,观察大豆异黄酮对S100β表达的影响,探讨其对AD的作用及可能的机制。1 资料1.1 实验动物及分组:健康雌性Wistar大鼠60只,10-12月龄, 体重350-400 g。每组12只,随机分为:对照组、Aβ25-35组、大豆异黄酮低剂量组(简称低剂量组)、大豆异黄酮高剂量组(简称高剂量组)、苯甲酸雌二醇组(简称雌激素组)。术后次日起,低剂量     

交感神经在椎动脉型颈椎病发病中的作用

颈椎病是中老年常见病、多发病，国内报道显示其患病率为3．8％～17．6％。另有资料显示50岁以上人群中97％出现椎间盘退变。1984年全国颈椎病会议上提出颈椎病(eelwical spondylosis，CS)定义为：由于颈椎间盘退行性病变本身及其继发改变所致失稳，压迫邻近组织而引起一系列症状和体征者。该会议还同时确定了颈椎病的诊断标准，颈椎病可分为颈型、神经型、脊髓型、椎动脉型、交感型和其它型。     

大豆异黄酮对Aβ25～35诱导的Alzheimer病模型大鼠海马组织形态及超微结构的影响

目的研究大豆异黄酮对Aβ25～35诱导的Alzheimer病（AD）模型大鼠海马组织形态及超微结构的影响。方法采用Aβ25～35双侧海马注射的AD模型大鼠,分组后给予不同剂量大豆异黄酮,HE染色及透射电镜观察大豆异黄酮对海马组织形态及超微结构的影响。结果HE染色显示,模型组大鼠海马CA1～CA4区及齿状回神经元数量较假手术组明显减少,可见较多的神经细胞胞质浓染,核固缩。大豆异黄酮治疗组及雌激素治疗组神经元数量较模型组增多,胞质浓染神经元少见。透射电镜下,模型组海马CA1区神经元较少,可见部分神经细胞膜皱缩,胞体缩小,核膜完整,核染色质电子密度增强。大豆异黄酮治疗组大鼠海马CA1区异常神经元较模型组明显减少。结论大豆异黄酮能有效地改善Aβ25～35所致AD大鼠海马神经元丢失。     

hTRX-PR39重组腺相关病毒载体的构建

目的 探讨hTRX-PR39融合基因在脑缺血疾病中的治疗作用。方法 将已经构建好的hTRX-PR39融合基因插入到具有相应酶切位点的pSSCMV病毒载体质粒中,得到重组腺相关病毒载体质粒,酶切电泳鉴定。将已构建的重组腺相关病毒载体质粒、腺病毒辅助质粒PFG140和包装质粒pAAV/Ad,三质粒磷酸钙共沉淀法转染293细胞系,通过同源重组获得hTRX-PR39重组腺相关病毒载体, 收集病毒, 斑点杂交（Dot blot）法测定病毒滴度。结果 成功构建重组腺相关病毒质粒pSSCMV/ hTRX-PR39。包装、回收病毒后,Dot blot法测定重组病毒滴度为3.46×(1012~1013)PFU/mL。结论 成功构建pSSCMV/ hTRX-PR39重组腺相关病毒载体,并包装较高浓度的重组病毒。