全长hlrp分子在多种细胞系中的表达及其分析

目的克隆分析全长hlrp基因,观察分析hlrp蛋白在不同细胞的表达情况并进行相对定量。方法以LPS刺激HEK293细胞,利用RT-PCR方法,克隆得到全长hlrp分子。用生物信息学进行hlrp分子染色体定位和蛋白功能位点分析。采用免疫荧光细胞化学染色,在激光扫描共聚焦显微镜下观察hlrp蛋白在不同培养组织系HepG2、HeLa、PDC和HEK293中的表达情况。利用实时定量RT-PCR方法,量化比较hlrp基因在不同细胞系中的表达。结果克隆得到全长为2045bp的hlrp分子。该分子染色体定位在Xp22.2。蛋白功能位点分析表明该分子包含2个相互重叠的亮氨酸拉链结构。运用激光扫描共聚焦显微镜可以观察到hlrp蛋白在所用细胞系中均有表达。实时定量RT-PCR结果表明,hlrp分子在HEK293细胞株和PDC细胞株中高表达,并且在PDC细胞株表达高于HEK293细胞株。在HepG2细胞株和HeLa细胞株未见表达。结论克隆分析全长hlrp分子,并研究该分子在不同细胞株的表达情况,为进一步研究该基因的生物学功能奠定基础。     

医学科研与医学伦理关系的思考

临床医学科研与人的健康和生命息息相关,因此医学伦理问题是医学科研中不可回避的问题。本文辩证地分析了临床医学科研和医学伦理的冲突问题,二者之间的关系不是矛盾的、而是辩证统一的,二者在不断合作中,相互促进、相互发展。因此,临床实践中既应给予医学科学研究宽松的环境,同时也须关注临床医学科研中医学伦理问题,完善医学伦理对医学科研的指导与规范作用,促进医学技术的快速、健康发展。     

广东汉族原发性高血压患者CYP2C9和ACE基因多态性的分布特征

目的:观察沙坦类药物代谢酶细胞色素氧化酶P450 2C9(CYP2C9)基因的多态性和血管紧张素Ⅰ转换酶(angiotension I-coverting enzyme,ACE)基因的多态性在广东汉族原发性高血压(essential hypertension,EH)患者中的分布特征。方法:应用PCR、基因测序及琼脂糖凝胶电泳等方法,对206例EH患者CYP2C9和ACE基因型进行检测分析。结果:广东汉族EH患者中CYP2C9基因的1075位C等位基因的频率为3.2%,广东汉族EH患者中CYP2C9*3等位基因的频率与广东人群相比,无显著性差异;ACE基因D、I等位基因的频率分别为56.3%和43.7%。ACE基因的D等位基因频率显著高于广东及国内其他地区正常人群中的频率(P0.05)。结论:在广东汉族EH患者中,未发现CYP2C9*3等位基因与EH有关,而ACE基因的D等位基因可能和EH有关,同时,对EH患者进行CYP2C9和ACE基因的基因型的检测,可能对临床个体化降压治疗具有一定的指导意义。     

MⅡ期卵子分级对卵母细胞胞浆内单精子注射临床妊娠率的影响

①目的　从MⅡ期卵子的第一极体、卵周隙和胞浆形态三方面综合探讨卵子质量对卵母细胞胞浆内单精子注射 (ICSI)后胚胎种植率、临床妊娠率的影响 ,从而将卵子质量作为胚胎移植选择优质胚胎的重要依据。②方法　对ICSI中去除颗粒细胞后的MⅡ期卵子在光镜下从第一极体、卵周隙和胞浆形态三方面按形态综合表现进行分级。分别比较由各级卵子发育来的胚胎种植率和临床妊娠率。③结果　移植全部由Ⅰ级卵子发育来的胚胎组与移植由至少含有 1个Ⅰ级卵子发育的胚胎组比较 ,胚胎种植率和临床妊娠率差异有显著性 (χ2 =4 .2 9、5 .4 0 ,P <0 .0 5 )。移植全部由Ⅰ级卵子发育来的胚胎组与全部由异常形态卵子发育来的胚胎组相比 ,胚胎种植率和临床妊娠率比较差异有极显著性 (χ2 =11.2 2、15 .10 ,P <0 .0 1)。④结论　根据MⅡ期卵子的第一极体、卵周隙及胞浆形态三方面综合因素进行的卵子分级方法可预测ICSI后胚胎种植率以及临床妊娠率。胚胎移植时选择Ⅰ级卵子发育的优质胚胎进行移植 ,可获得较高的胚胎种植率和临床妊娠率。选择Ⅰ级卵子发育的优质胚胎可进行单胚移植     

多囊卵巢综合征卵泡发育障碍的内分泌调控研究进展

<正>多囊卵巢综合征(PCOS)是一种生殖功能障碍与糖代谢异常并存的内分泌紊乱综合征[1],其内分泌特征是雄激素过多、黄体生成素(LH)/卵泡刺激素(FSH)比值增大、胰岛素(INS)抵抗,其临床特征是卵泡募集亢进和持续不排卵。在育龄妇女中PCOS的发病率为4%～12%,不孕症中约1/3无排     

PCOS患者卵泡液内IGF-Ⅰ的水平对卵母细胞成熟的影响

目的:探讨PCOS患者卵泡液内胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)的水平与卵母细胞发育成熟的关系。方法:选取因PCOS接受IVF治疗的患者41例为PCOS组、同期因输卵管因素接受治疗的患者37例为对照组。在取卵日根据卵泡直径进行分组,分为≤14mm组和>14mm组,每例患者留取不同直径3～4个卵泡的卵泡液。分别检测PCOS组和对照组患者卵泡液内IGF-Ⅰ的水平,并分析其与卵母细胞成熟和受精的关系。结果:PCOS组IGF-Ⅰ、雌二醇(E2)、睾酮(T)的水平显著高于对照组(P<0.05),与卵泡直径不相关。在卵泡直径≤14mm组,PCOS患者卵母细胞成熟率和受精率明显高于对照组(P<0.05)。在卵泡直径>14mm组,PCOS组与对照组间卵母细胞成熟率和受精率无差异性。PCOS组卵泡液内IGF-Ⅰ水平和E2、T呈正相关(P<0.05)。结论:PCOS患者促排卵过程中卵泡液内IGF-Ⅰ水平的升高与卵泡直径无相关性,而卵泡液内高IGF-Ⅰ水平可影响PCOS患者小于14mm卵泡的卵母细胞成熟和受精。     

双膦酸盐诱导骨巨细胞瘤细胞凋亡的实验研究

目的　探讨双膦酸盐（唑来膦酸）对骨巨细胞瘤多核巨细胞和基质细胞的诱导凋亡作用。方法　对我院收治的７例唑来膦酸治疗前后患者的肿瘤组织切片进行透射电镜观察和ＴＵＮＥＬ凋亡染色及图像分析。另１０例未予唑来膦酸治疗的患者,取术中切除的骨巨细胞瘤新鲜组织进行细胞原代培养,分别给予５、３０、１５０μｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸诱导肿瘤细胞凋亡４８ｈ,倒置相差显微镜观察细胞形态,Ａｎｎｅｘｉｎ-ＶＦＩＴＣ凋亡染色及流式细胞仪定量分析。结果　唑来膦酸治疗后的肿瘤组织切片透射电镜观察到多核巨细胞和基质细胞呈明显的凋亡表现;ＴＵＮＥＬ染色呈强阳性;基质细胞凋亡率治疗前为１.３１％,治疗后３３.４２％（Ｐ＝０.０１８）;多核巨细胞凋亡率治疗前为８.４１％,治疗后５６.８３％（Ｐ＝０.０１８）。在原代培养的骨巨细胞瘤基质细胞中予不同浓度的唑来膦酸诱导凋亡４８ｈ后,细胞数量减少,部分细胞形态有显著变化;Ａｎｎｅｘｉｎ-ＶＦＩＴＣ凋亡染色及流式细胞仪定量分析结果显示,对照组以及５、３０、１５０μｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸诱导组的凋亡率分别为（１０.６７±２.１５）％、（２０.４７±３.７７）％、（４４.２１±８.３４）％和（５６.９６±９.６８）％,各诱导组显著高于对照组（Ｐ＜０.０５）,且凋亡率呈剂量依赖性（ｒ＝０.７７５,Ｐ＝０.０００）。结论　双膦酸盐能够诱导骨巨细胞瘤基质细胞和多核巨细胞的凋亡,且骨巨细胞瘤基质细胞的凋亡率呈剂量依赖性,因此,双膦酸盐可以作为骨巨细胞瘤辅助治疗的方法之一。     

神经纤维瘤组织中致纤维化生长因子和胶原的表达

目的：观察结缔组织生长因子（CTGF）在神经纤维瘤组织中的表达情况及与其上、下游效应基因表达的关系,探讨CTGF在神经纤维瘤组织中的促纤维化机制。方法：收集神经纤维瘤组织、瘢痕疙瘩组织及正常皮肤组织标本,免疫组化检测CTGF的表达,逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测组织CTGF、TGF-β1、Ⅰ型胶原（ColⅠ）及Ⅲ型胶原（ColⅢ）mRNA表达,Western blotting检测组织CTGF蛋白的表达。结果：免疫组织化学染色发现,CTGF在瘤细胞中有强阳性表达,在汗腺和皮脂腺细胞中有阳性表达。神经纤维瘤组织及瘢痕疙瘩组织中CTGF、TGF-β1、ColⅠ和ColⅢ的mRNA过表达,而正常皮肤组织无或仅有极弱表达。Western blotting结果显示神经纤维瘤组织有明显的CTGF蛋白表达条带。结论：在神经纤维瘤发病过程中,CTGF可能是重要的调控因子之一,与TGF-β1协同促进细胞外基质合成。