腺病毒介导的VEGF启动子-胸苷激酶系统对骨肉瘤细胞的杀伤试验

目的探讨腺病毒介导的VEGF启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)系统(AdVEGF-tk)对体外培养的骨肉瘤细胞的选择性杀伤作用.方法采用2种重组腺病毒载体AdVEGF-tk和AdCMV-tk(CMV启动子调控tk基因表达)体外感染低表达VEGF的成骨细胞系MC3T3-E1和高表达VEGF的骨肉瘤细胞系LM8,并给予不同浓度的丙氧鸟苷(GCV)处理,用MTT法检测感染细胞的增殖情况.结果未感染病毒或感染空病毒的MC3T3-E1细胞和LM8细胞对GCV不敏感,感染AdCMV-tk的MC3T3-E1细胞和LM8细胞对GCV敏感.与感染空病毒的MC3T3-E1细胞相比,感染AdVEGF-tk的MC3T3-E1细胞对GCV的敏感性轻度增加,用50 μg/ml GCV处理时,30% MC3T3-E1细胞被杀死;感染AdVEGF-tk的LM8细胞对GCV的敏感性明显增加,用50 μg/ml GCV处理时,95% LM8细胞被杀死,产生的细胞毒活性表现为剂量依赖性.结论腺病毒介导的VEGF启动子-tk/GCV系统对高表达VEGF的骨肉瘤细胞具有杀伤作用.     

IL-24诱导肿瘤细胞凋亡的信号转导通路

应用增生活跃和诱导终末分化的人类HO-1黑素瘤细胞产生的cDNA文库进行减数杂交,获得了一组黑素瘤分化相关基因,其中mda-7/IL-24被证明具有抑制黑素瘤增生和促进终末分化的能力。IL-24基因作为目前被发现的唯一的既抑制肿瘤细胞生长、转移和血管形成,并诱导肿瘤细胞凋亡,又刺激表达次级细胞因子免疫调理而日益受到关注。正常表达的IL- 24通过配体-受体介导的JAK/STAT通路在免疫应答的调控中起着重要作用。过表达IL-24通过内部的(线粒体介导或内质网应激)和外部的(死亡受体介导)通路诱导肿瘤细胞的凋亡,并有抑制肿瘤细胞侵袭转移和抗血管发生的作用。     

凝集素亲和电泳-免疫印迹法检测甲胎蛋白变异体

甲胎蛋白(AFP)是一个公认的肝细胞癌(HCC)标记物.然而,部分慢性肝炎、肝硬化等良性肝病亦可合成少量AFP.由于糖基化过程的差异,不同疾病状况下肝细胞分泌的AFP 在糖链结构上并不相同.为了鉴别AFP是产生于恶性肝癌细胞还是良性肝病细胞,人们已建立多种 AFP糖链变异体测定方法.新近的报告表明, AFP糖链变异体测定还有助于HCC复发转移的监测和预后的判断[1,2].我们在已建立的凝集素亲和免疫电泳自显影法[3]的基础上,又建立了操作更简便、敏感度更高的凝集素亲和电泳-免疫印迹法,并初步用于良恶性肝病的AFP糖链变异体检测.     

曲格列酮体外对肝癌细胞HepG2生长及β-catenin信号通路的影响

目的:观察过氧化物酶体增长因子活化受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)γ激动剂--曲格列酮体外对肝癌细胞生长及β-catenin信号通路的影响,初步探讨其可能的抗肝癌机制.方法:体外培养肝癌细胞HepG2,以MTT法测定不同浓度曲格列酮(5、10、20、40、80、100μm0l/L)作用120 h后细胞存活率,并与正常培养细胞(对照组)作比较;应用流式细胞仪分析曲格列酮(10μmol/L)处理组及对照组HepG2细胞周期;免疫细胞化学法观察曲格列酮(10μmol/L)处理组及对照组HepG2细胞β-catenin的亚细胞定位;Western印迹法检测各自cyclin D1和c-myc蛋白的表达.结果:5、10、20、40、80、100μmol/L曲格列酮作用120 h后,HepG2细胞存活率分别为(96.8±1.2)%、(53.4±1.2)%、(42.3±1.2)%、(31.4±1.0)%、(13.6±0.8)%和(9.6±0.7)%,组间有统计学差异(P＜0.05).与对照组相比,10 μmol/L曲格列酮处理组细胞G0/G1期细胞比例增加[(67.6±0.5)%vs(56.3±1.5)%,P＜0.01],而S期细胞比例减少[(20.6±0.5)%vs(25±1.0)%,P＜0.01)].对照组细胞β-catenin亚细胞定位于细胞核,而曲格列酮处理组定位于细胞质;Western印迹结果表明曲格列酮处理组细胞c-myc和cyclin D1蛋白表达低于对照组.结论:曲格列酮体外能抑制肝癌细胞生长,且随着浓度的增加,其抑制作用逐渐增强;其抑制作用可能与调控β-catenin信号通路,调节相关靶蛋白表达有关.     

肝癌干细胞研究进展与方向

近年来随着“干细胞”的概念被引入肿瘤学研究,肿瘤干细胞学说逐渐形成。该学说认为,导致肿瘤发生和维持肿瘤生长的是一小群叫做“肿瘤干细胞”的细胞;这些细胞在肿瘤组织中数量极少,具有自我更新、分化及抗治疗能力等干细胞样特性。在过去的数年中,研究者分别通过侧群细胞技术及CD133、CD90、OV6、EpCAM等标志鉴定和分离得到具有很强的体外克隆形成及体内成瘤能力的小群肝癌细胞,为肝癌干细胞的存在提供了有力证据。本文对肿瘤干细胞理论和肝癌干细胞相关研究进展进行了综述,对肝癌干细胞在肝癌诊断和治疗方面的重要性进行了讨论,并对我们面临的有关挑战、机遇和未来的研究方向进行了分析。     

中期因子mRNA在原发性肝癌中的表达及其意义

目的：探讨中期因子（MK）mRNA在原发性肝细胞癌（HCC）中的表达及其意义。方法：收集33例人肝细胞癌组织、配对癌旁肝组织及10例肝良性肿瘤组织、5例正常肝组织、采用TRIzol一步抽提法提取总RNA，应用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）检测MKmRNA的表达。结果：28例肝细胞癌可见MKmRNA表达，阳性率为84．8％，而配对的癌旁组织中仅见3例表达，正常肝脏和肝脏良性肿瘤细胞无1例阳性。统计学分析表明，肝细胞癌肝细胞癌MKmRNA表达率与其他各组的差异有非常显著性（P＜0．01），但肝细胞癌MKmRNA表达与其组织学类型、病理分级、瘤体大小、包膜状况及其甲胎蛋白（AFP）值之间差异无显著性（P＞0．05）。结论：肝细胞癌在mRNA水平上表达MK增加，检测MK表达情况可作为HCC的辅助诊断指标之一，对术后制定进一步治疗方案也有参考价值。     

胆管癌中乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的感染及其与p53异常表达的相关性

目的 探讨不同部位胆管癌中乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)的感染及其与p53异常表达的相关性.方法 采用微粒酶免疫分析法检测312例肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)、73例肝门部胆管癌(perihilar cholangiocarcinoma,PHC)和26例远端胆管癌(distal cholangiocarcinoma,DC)患者HBV、HCV血清标志物乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和抗-HCV(anti-HCV),p53蛋白的检测采用免疫组织化学方法.结果 血清HBsAg阳性率在ICC中为48.4%(151/312),在PHC中为10.9%(8/73),在DC中为7.7%(2/26);anti-HCV阳性率在ICC中为2.9%(9/312),在PHC和DC中均为0.ICC、PHC和DC中p53异常表达率分别为30.1%(94/312)、23.3%(17/73)和19.2%(5/26);三组胆管癌中HBsAg和anti-HCV与p53异常表达均无显著性相关.结论 HBV,而非HCV感染可能与ICC的发生有关,p53基因的异常改变可能在HBV相关性ICC的发生过程中无重要作用.     

内质网应激诱导的细胞凋亡与小鼠肝脏缺血再灌注损伤的关系

目的：探讨内质网应激诱导的细胞凋亡在肝脏缺血再灌注损伤（HIRI）中的作用。方法：建立小鼠肝局部HIRI的模型,随机分为假手术组和实验组,每组动物8只。检测两组间内质网应激分子伴侣BiP,活化caspases-4,活化caspases-3,细胞凋亡、血清谷丙转氨酶和组织学的改变。 结果：在再灌注6 h后实验组肝组织BiP,活化caspases-4,活化caspases-3蛋白的表达增高,出现大量凋亡细胞,伴明显的血清谷丙转氨酶水平增高和肝组织学损害。结论：内质网应激诱导的细胞凋亡可能参与肝IRI。