重组人成纤维细胞生长因子-20的原核表达、生物学活性鉴定及抗血清制备

目的:表达具有生物学活性的重组人成纤维细胞生长因子-20(rhFGF-20),并制备rhFGF-20抗血清.方法:应用RT-PCR从人前列腺组织总RNA中扩增FGF-20的cDNA,将其克隆到pET-24a中,在大肠杆菌中诱导表达,经NTA-Ni2 -琼脂糖亲和层析纯化,应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、细胞增殖试验进行分析鉴定,并免疫新西兰雄性白兔制备多克隆抗体,免疫双扩散法测定抗体效价.结果:构建的pET-24a-FGF-20能在大肠杆菌中高表达;诱导表达的rhFGF-20蛋白主要存在于包含体中,经包含体溶解、Ni2 -NTA His-Bind Resins亲和层析后,纯化产物呈单一条带;细胞增殖试验显示其能促进成纤维细胞生长,并具有剂量依赖性(浓度为50～5 000 ng/ml);制备的抗血清效价为1∶32,可与hFGF-20产生免疫反应.结论:大肠杆菌表达的rhFGF-20蛋白具有刺激成纤维细胞增殖的活性,制备的抗血清具有特异性.     

癌灶内注射腺病毒介导的血管内皮生长因子启动子-胸苷激酶基因治疗大鼠肝癌

目的研究腺病毒介导的血管内皮生长因子启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(AdVEGF tk)对大鼠肝癌的治疗作用。方法以二乙基亚硝胺 (DEN)诱导Wistar大鼠产生肝癌 ,将成癌鼠随机分组 ,在同鼠肝内的多发性癌灶中选取 2个孤立的癌灶分别作为参照癌和处理癌 ,记录癌灶直径。参照癌不作处理。处理癌分别用不同的重组腺病毒癌内注射 ,并从次日起连续 10d每天腹腔内给予丙氧鸟苷 (GCV)或生理盐水 1次。停止注射后第 10天剖腹测量处理癌和参照癌大小 ,比较各组间癌灶体积增长率。结果用低浓度DEN处理 12 0d ,所有被探查的大鼠均有典型的肝癌形成。与同鼠中参照癌相比 ,AdVEGF tk/生理盐水处理的癌灶体积增长率平均值差异无显著意义 (P>0 0 5 ) ,而AdCMV tk/GCV和AdVEGF tk/GCV处理的癌灶体积增长率平均值显著降低 (P <0 0 1) ,与AdVEGF tk/生理盐水组处理癌和参照癌的体积增长率平均值之间的差异也有显著意义 (P<0 0 1)。AdVEGF tk/GCV处理癌与AdCMV tk/GCV处理癌体积增长率之间差异无显著意义 (P>0 0 5 )。结论癌灶内注射AdVEGF tk对大鼠肝癌生长具有明显抑制作用。     

氧应激与细胞信号转导

氧应激是脂肪肝、动脉粥样硬化、癌症、器官缺血再灌注损伤等病理生理过程中导致器官组织损伤的主要因素之一.近年对氧应激与细胞信号转导的路径的研究逐步深入,为药物和基因治疗奠定了良好的研究基础.本文就氧应激与细胞信号转导的有关通路包括核转录因子、生长因子信号通路、蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinases,PTK) 和蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatases,PTP)系统及其丝氨酸/苏氨酸激酶信号系统作一综述.     

肝型脂肪酸结合蛋白研究进展

肝型脂肪酸结合蛋白(liver type fatty acid binding protein,L-FABP)是脂肪酸结合蛋白家族的重要成员,主要在肝脏、小肠及肾脏表达.既往研究其主要与机体脂肪酸的吸收及转运、细胞内的长链脂肪酸的转运及细胞器内的再分布等密切相关.近年发现肝型脂肪酸结合蛋白具有信号转导分子的功能,是机体能量代谢的重要环节,进一步的研究证明与酒精性、非酒精性脂肪肝损伤、肾间质损害、糖尿病、器官缺血损伤等密切相关.鉴于其小的分子量及良好的细胞膜通透性,有望成为较好的肝、肾组织损伤的敏感指标.本文就近年肝型脂肪酸结合蛋白的生理功能、调控机制以及临床应用进展作一综述.     

mda-7/IL-24对裸鼠肝癌移植瘤的生长抑制和促凋亡作用

目的:探讨mda7/IL24对裸鼠肝癌细胞移植瘤的生长抑制和促凋亡作用及其相关机制。方法：构建携带mda7基因的重组腺病毒载体Admda7。以HepG2细胞皮下接种建立裸鼠肝癌移植瘤模型,采用瘤内单点注射的方法分别给予AdGFP、Admda7和ALLN（毒胡萝卜素,NAcLLnorleucinal）+Admda7,观察瘤质量和瘤体积的变化,通过免疫组化和TUNEL法检测肿瘤组织内凋亡相关蛋白caspase3活化、细胞增殖相关抗原ki67和微血管密度、细胞凋亡率,并通过Western blotting检测caspase12、caspase3和Bax的表达。结果： Ad.mda7治疗组和Ad.GFP对照组肿瘤体积分别为（312.6±30.2）mm3和（520.6±30.0）mm3（P<0.01）,两组的肿瘤质量分别为（0.321±0.031）g和（0.534±0.030）g（P<001）;Ad.mda7治疗后瘤细胞的凋亡率显著高于对照组（P<0.01）;Ad.mda7可抑制肝癌组织ki67表达、微血管密度和促进caspase3的表达。 经 ALLN 处理的裸鼠,明显抑制Ad.mda7对肝癌细胞的致凋亡作用（P<0.05）,并且下调Ad.mda7诱导的caspase12、caspase3和Bax的表达。结论： Ad.mda7可显著抑制裸鼠肝癌移植瘤的生长和新生血管的形成,并通过内质网应激通路显著诱导肿瘤细胞的凋亡。     

胸腺肽β4与肿瘤

胸腺肽β4(thymosinβ4,Tβ4)是一个由43个氨基酸残基组成的水溶性多肽,但并非是一个真正的胸腺激素,而是一个主要的肌动蛋白隐蔽蛋白。作为细胞骨架的结构元件,Tβ4具有多种生物学活性,其中最显著的功能是抑制炎症、促进皮肤创伤愈合、角膜修复和血管生成。Tβ4在多种类型肿瘤中表达增高,与肿瘤发生、发展及转移有密切关系;其机制可能涉及刺激肿瘤血管生成,促进肿瘤细胞上皮间质转化,增强肿瘤细胞迁移、侵袭和转移能力,以及诱导肿瘤细胞抗凋亡和耐药等。Tβ4是肿瘤转移的关键调节因子,在肿瘤分子诊断、靶向治疗方面的研究和应用正受到越来越多的关注,可能成为多种恶性肿瘤转移和预后的分子标志。     

人去唾液酸糖蛋白受体单克隆抗体制备及其初步应用

目的 制备人去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)的小鼠单克隆抗体,并应用该抗体检测ASGPR在细胞系和组织中的表达。方法 对ASGPR H1大亚基进行序列分析,选取ASGPR1全长序列制备免疫原。通过RT-PCR合成ASGPR1 cDNA,构建ASGPR1表达重组载体,在E. coli BL21中表达后纯化,获得目的抗原。应用传统融合杂交瘤技术制备小鼠单克隆抗体,常规检测单抗亚类和效价,竞争抑制实验鉴定单抗特异性。用流式细胞术和免疫组织化学法分别检测ASGPR在多种肝源性与非肝源性细胞系以及多种肝组织中的表达。结果 制备的单克隆抗体亚型为IgG1,效价达112 800。竞争抑制实验结果显示该单抗具有很好的ASGPR结合特异性,而且识别的肽段位于ASGPR胞外段。流式细胞术检测结果显示,ASGPR不同程度地表达于肝源性细胞系,但不表达于非肝源性细胞系。免疫组织化学检测结果显示,ASGPR专一性表达于正常肝组织和肝癌组织,在肝癌组织的表达与分化程度有关,高分化肝癌中的阳性率高于低分化肝癌(75.0% vs 28.6%,P<0.05)。结论 成功制备高特异性人ASGPR小鼠单克隆抗体,适用于用流式细胞术和免疫组织化学法检测ASGPR表达,可用于临床病理鉴定原发性肝癌与转移性肝癌。     

肿瘤转移的器官特异性及其分子调节

很早以前人们就认识到,肿瘤转移是一个非随机过程,某些类型的肿瘤具有器官转移特异性.比如,乳腺癌通常转移到骨、肝、脑和肺;前列腺癌通常扩散到骨;而直肠癌则在初期就可能形成肝内转移灶.尽管在临床上转移一直是一个直接影响肿瘤疗效和预后的重要问题,但由于转移是一个发生在活体内难以被观察到的隐匿过程,临床医师对转移过程的关注往往远不如对转移结果的重视,对于肿瘤器官特异性转移的生物学更是缺乏了解.而认识肿瘤转移的器官特异性及其生长调节的分子机制无疑有助于在临床上有效防治肿瘤转移.     

肠道菌群失调与肝癌

肠道菌群在维持人体内环境稳态方面起着至关重要的作用,其与疾病的关系越来越多地受到重视,但相关病理生理学机制还远不清楚.近期的研究证实,肠道菌群失调参与肝癌的发生和发展过程,涉及由菌群失调引起的胆汁酸代谢改变、肝星状细胞衰老、内毒素代谢紊乱等.本文就肠道菌群失调诱导的这些变化促进肝癌发生和发展的作用机制研究进展作一综述,指出靶向肠道菌群失调的肝癌预防策略和未来研究方向.     

脱γ-羧基(异常)凝血酶原与肝细胞癌

脱γ-羧基(异常)凝血酶原(DCP)是一新发现的肝细胞癌(HCC)标志物。1984年Liebman等报告约90％HCC患者血浆中含有DCP。此