绿色荧光蛋白和成肌调节因子在骨髓基质干细胞中的共表达

目的:研究重组腺病毒(Ad)对骨髓基质干细胞(MSCs)的转染,以及绿色荧光蛋白(GFP)和成肌调节因子MyoD和Myogenin在MSCs中的表达. 方法:用差速贴壁法体外培养大鼠MSCs,并用流式细胞仪(FCM)检测其表面标志;对构建有绿色荧光蛋白的重组腺病毒(Ad-GFP)进行扩增和鉴定,并转染MSCs;用RT-PCR检测MyoD和Myogenin在转染后MSCs中的表达;将MSCs与C2C12成肌细胞共培养,诱导前者的分化,并用免疫荧光检测MyoD的表达. 结果:FCM检测证实,在MSCs的表面标志中CD11b和CD45阴性,而CD29和CD44阳性;随着Ad-GFP感染复数(MOI)的增加,转染效率也相应提高,但在MOI大于100后,MSCs开始出现病变;RT-PCR结果提示MyoD和Myogenin在转染后的MSCs中有表达;免疫荧光检测证实诱导后的MSCs可以表达MyoD蛋白. 结论:MSCs可以被Ad-GFP有效转染而表达GFP;同时内源性成肌调节因子的激活,可以促进MSCs的成肌分化.     

异体骨髓干细胞移植后假肥大型肌营养不良症模型鼠膈肌dystrophin表达及病理改变

目的探讨骨髓干细胞移植对假肥大型肌营养不良症(DMD)模型鼠-mdx鼠膈肌的治疗效果。方法取雄性SD大鼠骨髓干细胞经尾静脉植入放疗处理后的8周龄雌性mdx鼠(n=18)。于移植后4、8、12周各取6只mdx鼠的膈肌行 HE染色、抗肌萎缩蛋白(dystrophin)免疫荧光检测以及dystrophin mRNA的RT-PCR分析,同时用正常C57鼠及放疗而未移植的mdx鼠作为对照,另进行PCR反应检测实验鼠膈肌内Sry(Y染色体的性别决定区)基因。结果移植后mdx 鼠膈肌间质内炎性细胞浸润较放疗而未移植mdx鼠有所减少;移植后核中心移位纤维比例[移植后4、8、12周分别为 (15．58±0．91)％、(12．50±1．87)％、(10．17％±1．17)％]较未移植mdx鼠(19．5±1．87)％显著减少。移植后dystrophin免疫荧光阳性细胞比例[移植后4、8、12周分别为(1．00±0．32)％、(6．00±1．05)％、(11．92±1．11％)]较未移植mdx鼠(O．17±0．41)％显著增加。RT-PCR结果显示C57鼠膈肌的dystrophin mRNA相对含量(0．63±0．04)最高;而未移植mdx鼠的膈肌中未检测到dystrophin mRNA;移植后的mdx鼠膈肌中mRNA的表达水平(移植后4、8、12周分别为0．19±0．05、0．26±0.06、0．36± 0．04)随时间推移逐渐增高;移植后各时间点mdx鼠膈肌Sry基因均为阳性。结论骨髓干细胞系统移植mdx鼠可以恢复部分膈肌的dystrophin表达,改善膈肌的病理,骨髓干细胞移植有希望成为全身治疗DMD的有效方法。     

人微小抗肌萎缩蛋白基因转染大鼠骨髓间充质干细胞及其基因表达

目的 构建人微小抗肌萎缩蛋白基因（microdystrophin）的真核表达载体,转染大鼠骨髓间充质干细胞（rMSC）,研究其体外表达情况。方法 限制性酶切PBSK-MICRO质粒的微小抗肌萎缩蛋白基因片段,插入到真核表达质粒poD-NA3．1（＋）的Notl位点内,克隆出真核表达载体pcDNA3．1（＋）／microdystrophin。通过酶切和测序对质粒进行鉴定。用脂质体将重组质粒转染人rMSCs中,经过G418筛选后。用RT—PCR及间接免疫荧光技术检测表达产物。结果 pcDNA3．1（＋）／microdystrophin经过Notl、HindⅢ酶切鉴定及测序证实插入片断正确。提取转染重组质粒rMSCs的总RNA,进行RT-PCR可见mRNA的转录：对G418筛选后rMSCs进行免疫荧光检测可见细胞内亮丽的红色荧光．说明转染后的rMSCs有微小抗肌萎缩蛋白的表达。结论 成功构建了人microdystrophin基因真核表达载体,将其转染人rMSCs内有微小抗肌萎缩蛋白的表达．为进一步研究体外修饰自体干细胞移植治疗DMD奠定了基础。     

单纯男性因素不育患者行形态选择性卵胞浆内单精子注射对胚胎发育及临床结局的影响

目的使用放大系统对不育男性患者的精子进行形态选择性卵母细胞浆内单精子注射术（IMSI）,观察IMSI技术能否改善
因男性精液问题而不孕不育夫妇的助孕结局。方法回顾分析本中心2013年1月~2014年11月共82例梗阻性无精子症患者,将
行TESA（经皮睾丸穿刺抽吸精子术）获得的睾丸精子通过放大系统（×6600）挑选后行卵母细胞注射（IMSI组）,2013 年1 月~
2014年11月共91例梗阻性无精子症患者经TESA取精术后行常规卵母细胞浆内单精子注射（ICSI组）;2014年1月~11月共44
例畸精子症患者行形态选择性包浆内单精子注射治疗（IMSI组）,2014年1月~11月共71例畸精子症患者行常规ICSI治疗（ICSI
组）。统计分析ICSI组和IMSI组患者的实验室结局和临床结局。结果梗阻性无精子症患者中正常受精率IMSI组显著高于
ICSI 组（84.3% vs 77.0%）（P<0.05）;ICSI 组的卵裂率95.5%,优胚率28.2%,囊胚形成率54.8%,种植率26.4%,临床妊娠率
47.3%,流产率14%,梗阻性无精子症IMSI组患者的卵裂率96.7%,优胚率29.2%,囊胚形成率54.3%,种植率32.3%,临床妊娠率
50.0%,流产率7.3%,两组无显著性差异（P>0.05）。畸精子症患者的正常受精率IMSI组显著高于ICSI 组（68% vs 75.5%）（P<
0.05）,囊胚形成率IMSI组显著高于ICSI组（54.6% vs 67.9%）（P<0.05）,ICSI组的卵裂率96.2%,优胚率27.6%,种植率28.2%,
临床妊娠率43.7%,流产率9.7%;IMSI组患者的卵裂率95.2%,优胚率27.1%,种植率30.7%,临床妊娠率43.2%,流产率10.5%,
两组无显著性差异（P>0.05）。结论梗阻性无精子症患者的睾丸精子经放大系统选择后行ICSI,正常受精率较传统ICSI有显著
性提高;畸精子症患者射出的精液标本经放大系统挑选后行ICSI,正常受精率、囊胚形成率较传统ICSI有显著性提高。
     

原发性卵巢功能不全患者血清miRNA-146、OX-LDL和ROS的表达及临床意义

目的探讨原发性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency, POI)患者miRNA-146、氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, OX-LDL)、活性氧(reactive oxygen species, ROS)的表达及临床意义。方法 100例POI患者作为观察组, 随机匹配100例卵巢功能正常的妇女作为对照组。通过荧光定量PCR(real-time PCR, qRT-PCR)检测血清miRNA-146, 酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测OX-LDL和ROS, 超声评估卵巢体积和卵巢动脉收缩期峰值血流速度。miRNA-146模拟物或抑制剂转染小鼠卵巢颗粒细胞, 与OX-LDL共培养, 评估其细胞活力、集落形成能力、细胞凋亡率和Toll样受体4(toll like receptor 4, TLR4)/核因子-κB(nuclear factor-κB, NF-κB)通路蛋白的表达。结果与对照组相比, POI组miRNA-146表达水平显著下降...     

体外培养Wilson病患者肝细胞铜转运研究

【目的】探讨铜转运P型ATP酶在离体肝细胞铜代谢及Wilson病 (WD)发病机制中的作用。【方法】WD患者和对照者离体培养肝细胞模型 ,经单用铜 (15mg/L)及铜加P型ATP酶阻滞剂矾酸钠 (18 39mg/L)、铜加P型ATP酶激动剂长春新碱 (0 5mg/L)孵育 ,差速离心分离肝细胞胞浆、溶酶体、线粒体和微粒体 ,在不同孵育条件下WD患者及对照组各亚细胞组分的铜含量分别对照分析。【结果】WD患者肝细胞各组分的铜含量均显著高于对照组 ,P型ATP酶阻滞剂与激动剂对WD患者肝细胞微粒体、质膜铜转运的作用均出现异常。【结论】WD患者肝细胞亚组分的铜转运P型ATP酶的功能障碍 ,在WD的发病机制中有重要作用。     

干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良症的研究进展

Duchenne型肌营养不良症（duchenne muscular dystrophy，DMD）是最常见的X连锁隐性遗传性肌病，由位于Xp21的抗肌萎缩蛋白（dystrophy）基因突变引起dystrophy完全或部分缺失所致。该病主要见于男孩，发病率约3／10万活男婴。女性为致病基因携带者，所生男孩50％发病。患者一般3～5岁发病，主要表现为全身骨骼肌进行性无力、萎缩和小腿腓肠肌假性肥大。随着病情逐渐加重，12岁丧失行走能力，20岁左右因呼吸肌萎缩、无力，呼吸循环衰竭而死亡，迄今尚无有效的治疗方法。对症治疗、支持治疗、药物治疗、物理疗法和矫形治疗虽可预防及适度改善关节的畸形和挛缩，却未能有效的阻止病程的进展。对进行性肌营养不良患者而言，基因治疗和干细胞移植可望成为有效的治疗方法。近年来不少学者用骨髓或脐血干细胞移植治疗DMD模型鼠，其病理、生理、生化、抗肌萎缩蛋白表达和运动功能均有改善。     

开办“地中海贫血技术骨干培训班的”教学实践

地中海贫血是广西地区常见的致死、致残遗传性血液病，对广西地区基层医务人员培训地中海贫血防治知识有助于控制广西地区重型地中海贫血患儿出生率，提高人口素质。本文对培训l广西地区基层医务人员地中海贫血知识的教学实践作一初步探索。．     

栀子、土茯苓等4种药材的真伪鉴别

目的中药质量直接影响中医药发展。为保证临床用药质量，必须重视中药质量的把关。方法将较突出的4种中药材质量问题加以整理．分组介绍该4种中药材真假鉴别方法。结果能有效识别所述药材的真假。结论本文介绍的几种中药真假鉴别方法简便易行,准确实用。对基层单位有一定参考价值。     

肝豆状核变性基因蛋白产物表达的改变

肝豆状核变性 (Ｗｉｌｓｏｎ′ｄｉｓｅａｓｅ,ＷＤ)是一种常染色体隐性遗传病。其致病基因定位于 13ｑ14.3,编码的蛋白质产物是一种铜转运Ｐ型ＡＴＰ酶 (ＷＤ蛋白 ) [1 3] 。该病以原发性铜代谢障碍为特征 ,目前的研究多认为ＷＤ基因突变使该酶功能降低或丧失而致病[4 6] 。在ＷＤ患者 ,ＷＤ基因突变 ,导致ＷＤ蛋白的表达变化 ,其表现可能为量的减少、功能异常等 ,目前该课题的研究在国内外尚未见报道。为此 ,我们应用特定的抗Ｐ型ＡＴＰ酶抗体 (抗ＡＢＤ) ,结合Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ印迹技术检测了ＷＤ蛋白的变化 ,同时筛查患者ＷＤ基…