HBV基因突变及其临床意义研究进展

HBV以准种形式存在患者体内,不同基因区的准种变化具有明显的异质性,其对疾病的诊断、治疗及转归均有一定影响。理解HBV突变及其改变的分子及病理特征,有助于实现不同乙肝感染患者的分层管理,促进更精准的个体化治疗。该文就HBV基因突变及其临床意义研究进展作一综述。     

2005年至2007年福建医科大学附属第一医院耳鼻喉科感染病原菌分布研究

目的了解耳鼻咽喉科临床分离培养的真菌和细菌及其他相关病原菌的种属和分布,及阳性菌的药敏结果。方法调查我院耳鼻咽喉科2005年3月至2007年10月间,统计分析研究临床样本分离的病原菌的变化趋势。结果送检的标本总数量由2005年的248例升高到2007年的306例,检测出真菌及细菌的阳性例数从2005年的115例上升至2007年的181例,送检标本阳性例数为46.4%～59.2%。结论2005～2007年我院耳鼻咽喉科感染病原菌呈上升趋势,应引起重视。     

自身免疫性脑炎短期预后不良的危险因素及其预测价值

目的:分析自身免疫性脑炎（AE）患者短期预后的危险因素,并评估其预测价值。方法:收集2016年3月至2021年1月于福建医科大学附属第一医院及福建省神经医学中心诊治的81例AE患者资料进行回顾性分析。根据患者出院时的临床表现,采用改良Rankin评分量表（mRS）将AE患者分为预后良好组（mRS≤2分,48例）和预后不...     

建立实时荧光定量PCR检测新型隐球菌CAPIO基因及其初步应用

目的建立FQ-PCR（real-time Fluorescent Quantitative PCR）系统定量检测新型隐球菌CAP10基因，为将其应用于新型隐球菌感染的诊断和疗效判断奠定基础。方法根据新型隐球菌5种血清型（A、B、C、D、AD）中同源序列设计引物和探针，PCR扩增CAP10基因片段，并将其克隆到pGEM-T Easy载体上，构建质粒标准品；建立FQ—PCR体系，优化反应条件，建立标准曲线，进行特异性、敏感性、重复性实验。结果FQ-PCR系统用于检测CAP10基因片段，敏感性为1拷贝数／出，重复性好，批内变异系数（CV）为1．36％，批间变异系数（CV）为1．86％，特异性好，对临床其他常见脑膜炎病原体不出现特异性扩增曲线。结论成功建立了新型隐球菌CAP10基因FQ-PCR检测方法，结果稳定、准确，有望为判断新型隐球菌性脑膜炎疗效、预后提供新的依据。     

EB病毒BZLF1N基因的克隆与序列分析

目的:克隆EB病毒BZLFIN基因编码区的cDNA并对其序列进行分析.方法:采用RT-PCR方法,从B95-8细胞获得BZLF1N基因的cDNA,克隆至pGEM-TEasy载体,选择阳性克隆并进行序列测定.结果:构建的重组载体中含有EB病毒BZLF1N基因的全长序列,与Genebank公布的序列完全一致.结论:获得EB病毒BZLF1N基因的克隆,为进一步的研究奠定了基础.     

线粒体病的分子诊断

线粒体病是指由线粒体DNA（mtDNA）改变引起的一组独立的疾病。已经发现与mtDNA突变有关的疾病达270多种。研究表明,线粒体DNA结构、线粒体病的遗传有其独特的特点。近年来,有关这方面的研究取得了很大进展。现就线粒体DNA结构、线粒体病的遗传特点及线粒体病的实验诊断进展,尤其是分子诊断进展作一介绍。     

术前外周血NLR,dNLR及LMR在胶质母细胞瘤患者预后评估中的价值分析

目的 评价术前外周血中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、间接中性粒细胞/淋巴细胞比值(dNLR)、淋巴细胞/单核细胞比值(LMR)与胶质母细胞瘤(GBM)患者预后的关系,探讨这些指标的预后评估价值. 方法回顾性分析98例GBM患者的临床资料和随访资料,分析NLR,dNLR和LMR之间的相关性,通过受试者工作特征曲线(ROC曲线)确定NLR,dNLR和LMR预测术后生存的最佳分界点,并以此将患者分为高值组和低值组,分析其与患者临床病理特征之间的相关性.采用Kaplan-M eier生存分析、单因素及多因素Cox回归分析,评估术前外周血 NLR,dNLR和 LMR对 GBM 患者术后生存的影响. 结果 术前 NLR 与 dNLR呈明显正相关(P<0.001),NLR与LMR以及 dNLR与 LMR则呈负相关(P< 0.001).ROC 曲线分析确定 NLR,dNLR和LMR预测生存的最佳分界点分别为2.42,1.53和3.85.NLR≤2.42组和 NLR> 2.42组、dNLR≤1.53组和dNLR>1.53组、LMR<3.85组和LMR≥3.85组患者生存时间比较,差别有统计学意义(P<0.001),而性别、年龄、肿瘤位置和肿瘤大小比较,差别无统计学意义.Kaplan-Meier生存分析结果显示,NLR≤2.42组的患者生存时间(中位生存期15月)明显长于NLR>2.42组(中位生存期11月)(P<0.05);dNLR≤1.53的GBM患者,其生存时间(中位生存期17月)要长于dNLR>1.53的患者(中位生存期12月)(P<0.05);LMR<3.85的患者生存时间(中位生存期10月)则要明显短于LM R≥3.85组(中位生存期14.5月)(P<0.05).单因素和多因素Cox回归分析结果显示,NLR,dNLR和LMR均为影响GBM患者预后的因素(P<0.001),但只有NLR和LMR为预测GBM患者生存的独立预后因素(P<0.05),且NLR的预测效果要优于LMR. 结论 术前NLR,dNLR和LMR均为影响GBM患者预后的因素,其中NLR和LMR为独立预后因素,且NLR对GBM 患者术后生存的预测效果优于LMR.     

孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血的检测

本研究旨在建立一种孕早期、简便、快速且无创伤性的检测胎儿常见缺失型α-地中海贫血突变的单管多重PCR技术,用于α-地中海贫血的产前诊断。选择50例妊娠14—20周的贫血孕妇,采用gap—PCR方案设计4组PCR引物单管多重PCR体系,快速地检测孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血。结果表明：在50例贫血孕妇血浆的游离胎儿DNA中检出5例α-地中海贫血,其中3例为东南亚型缺失^--SEA,2例为右侧缺失-α^3.7。结论：采用单管多重PCR检测技术能快速准确地检测出3种最常见缺失型α-地中海贫血,对于防止α-地中海贫血患儿出生、提高人口素质、减轻社会负担有重要意义。     

用新生隐球菌荚膜相关蛋白10基因mRNA水平评估抗真菌药物疗效

目的 定量检测新生隐球菌（Cryptococcus neoformans,CN）的荚膜相关蛋白10（capsule associated protein 10,CAP10）基因mRNA,探索将其用于隐球菌性脑膜炎抗真菌药物疗效评估的可行性。 方法 构建重组质粒标准品pGEMT-Easy-CAP10并制作标准曲线;建立荧光定量PCR（fluorescent quantitative PCR, FQ-PCR）反应体系并对其进行评价。利用建立的FQ-PCR体系检测11例氟康唑联用5-氟胞嘧啶治疗、9例两性霉素B联用5-氟胞嘧啶治疗患者治疗前后脑脊液（CSF）CAP10 mRNA拷贝数的变化,并结合临床资料进行分析。 结果 建立的FQ-PCR体系适合于CAP10 mRNA拷贝数的测定。两性霉素B联合5-氟胞嘧啶治疗组CAP10 mRNA的拷贝数的log值治疗前为3.43±0.84,治疗后下降为2.35±0.85（P<0.05）;氟康唑联合5-氟胞嘧啶治疗组治疗前为2.65±1.24,治疗后下降为1.84±1.07（P<0.05）。2组患者临床症状均明显改善。 结论 构建的新生隐球菌CAP10 mRNA的FQ-PCR定量检测体系适合于脑脊液标本的检测,为新生隐球菌感染患者抗真菌药物疗效的判断提供了新的依据。     

RNA干扰隐球菌cap10基因的siRNA表达载体的构建与鉴定

目的 构建cap10基因RNA干扰(RNAi)的小干扰RNA（siRNA）表达载体,为将其应用于隐球菌的改造及隐球菌性脑膜炎的生物治疗奠定基础。 方法 根据GenBank发表的cap10基因序列,按照干扰模板设计原则,选择设计1条可形成发夹结构的核苷酸序列,克隆连接到空载体psilencer 4.1-CMV neo中构建重组质粒ps 4.1 neo-cap-10并测序鉴定。用LiAc化学法将重组质粒转染新生隐球菌细胞并用G418筛选。比较重组质粒转染前后新生隐球菌cap10基因表达量的变化。 结果 成功构建针对cap10基因的ps 4.1 neo-cap10,经测序证实符合预期设计;ps 4.1 neo-cap10转染组新生隐球菌内cap10基因表达（175 534.6±47 004.3）copies/μl明显低于空质粒转染组（321 995.5±32 611.8）copies/μl和空白组（562 931.7±65 928.4）copies/μl,P＜0.05。 结论 成功构建cap10基因的shRNA表达载体,其可以明显抑制新生隐球菌细胞内cap10基因的表达。