蛋白激酶CK2β siRNA对肺腺癌细胞A549生长的抑制作用

目的：探讨蛋白激酶CK213特异性干扰RNA对肺腺癌细胞系A549增殖的影响。方法：构建蛋白激酶CK2psiRNA表达质粒pGPU6-CSNK2B，以与人编码序列无同源性的通用阴性对照表达质粒pGPU6一NC作对照，分别用脂质体转染法转染A549细胞。采用RT-PCR、Western Blot、免疫细胞化学技术检测转染后（K2pmRNA和蛋白表达，同位素参入法检测CK2活性，细胞计数法检测转染后A549的细胞生长曲线和倍增时间，流式细胞术检测转染后对A549细胞周期的影响。结果：重组质粒稳定转染A549细胞后，转染pGPU6一CSNK2B组CK213mRNA、细胞胞浆蛋白表达和CK2激酶活性均较转染pGPU6一NC组和未转染组细胞明显下降（P〈0．05），各组间细胞胞核蛋白CK213表达无明显差异（P〉0．05）；CK2活性的抑制率与CK213蛋白表达抑制率大致平行；转染pGPU6一CSNK2B组细胞生长相对缓慢，细胞的倍增时间为56h，而未转染组细胞的倍增时间为39h；流式细胞结果显示转染pGPU6-CSNK2B组A549细胞增殖指数明显降低（P〈0．05），细胞阻滞于G0／G1期。结论：蛋白激酶CK2B特异性siRNA表达质粒可以阻抑A549细胞CK2t3的表达，抑制细胞增殖和CK2激酶活性，为CK2 siRNA作为抗肿瘤药物的开发和CK2药靶的研究奠定了基础。     

2—氯腺苷与潘生丁联合应用对培养的人白血病细胞株的协同抑制作用

研究２－氯腺苷及其与潘生丁联合应用对人白血病细胞株生长的作用。方法：应用体外细胞培养方法，分别检测药物对ＨＬ－６０及Ｋ５６２肿瘤细胞生长曲线，半数抑制浓度，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入及流式细胞分析的影响。结论：２－ＣｌＡ与Ｄｉｐ联合应用对ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞有协同抑制作用。     

三种tyrphostin对大鼠肝酪蛋白激酶Ⅱ的作用(英文)

目的：研究ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ对酪蛋白激酶Ⅱ（ＣＫⅡ）的作用．方法：依次采用ＤＥＡＥ纤维素和肝素Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ层析将大鼠肝ＣＫⅡ进行了部分纯化，通过将去磷酸化的酪蛋白和［γ３２Ｐ］ＡＴＰ与ＣＫⅡ保温的方法测定ＣＫⅡ的活性．结果：ＡＧ３４对ＣＫⅡ有强烈的抑制作用ＩＣ５０３３μｍｏｌ·Ｌ－１（２７－４１μｍｏｌ·Ｌ－１），ＡＧ３７２（１２１μｍｏｌ·Ｌ－１）和ＡＧ１１１２（１５０μｍｏｌ·Ｌ－１）对ＣＫⅡ有明显的抑制作用．ＡＧ３４对ＣＫⅡ的动力学研究表明：它与酪蛋白和ＡＴＰ均呈非竞争性抑制作用．结论：ＡＧ３４、ＡＧ３７２和ＡＧ１１１２是ＣＫⅡ的抑制剂，ＡＧ３４的抑制作用与酪蛋白和ＡＴＰ均呈非竞争性．     

Effect of quercetin on cell cycle of HL-60 cells

本文报道了槲皮素对人早幼粒白血病细胞株ＨＬ－６０细胞的增殖和细胞周期的影响．结果表明槲皮素能抑制ＨＬ－６０细胞的增殖，呈剂量依赖关系，当槲皮素作用２４，４８，７２ｈ后，其ＩＣ５０分别为４６．６，２８．７，１４．９μｍｏｌ·Ｌ－１．流式细胞仪分析表明，槲皮素能明显增加ＨＬ－６０的Ｇ２－Ｍ期细胞，而相对减少Ｇ０／Ｇ１细胞之百分比，且呈剂量依赖关系，当去除槲皮素时，该作用是可逆的．结果表明槲皮素对肿瘤细胞的生长抑制作用可能与其对细胞周期的影响有关．     

SARS-3CL蛋白酶基因在杆状病毒载体中的构建及其转染

目的:构建SARS冠状病毒3CL蛋白酶基因的杆状病毒重组供体质粒,包装重组3CL蛋白酶的杆状病毒,感染昆虫细胞进行表达.方法:首先扩增含3cl-Teagy和pFagtBac HTh的转化菌,用酶切连接法构建重组转座质粒pFB HTb-3cl.将该质粒转化E.coli DH10Bac感受态菌,在菌体内进行重组,并经三重抗性和蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒Bacmid-HTb-3cl,对重组质粒Bacmid-HTB-3cl进行纯化并转染St9昆虫细胞包装杆状病毒,利用病毒感染St9昆虫细胞并进行蛋白表达.利用SDS-PAGE检测蛋白表达情况.结果:成功构建了重组表达载体并得到了重组杆状病毒,SDS-PAGE检测到有3CL蛋白酶表达.结论:3CL蛋白酶在昆虫细胞中的表达为蛋白活性的检测及抑制剂的筛选奠定了基础.     

半边旗提取物5F对人高转移肺癌细胞PGCl3侵袭转移的影响

目的研究半边旗提取物5F（以下简称5F）对人高转移肺癌细胞PGCl3转移相关能力的影响。方法MTT法检测5F对PGCl3细胞的增殖抑制作用;Transwellchamber法检测5F对PGCl3细胞侵袭能力和趋化性运动能力的影响;细胞粘附实验检测5F对PGCL3细胞粘附能力的影响。结果：5F对PGCL3细胞的生长和增殖都具有一定程度的抑制作用,当药物浓度为12．5、25、50、100μmol／L作用细胞24小时,抑制率分别为：（5．74±0．20）％、（9．91±0．58）％、（15．02±0．42）％、（36．50±1．15）％。当用浓度为25、50、100μmol／L的药物处理细胞6h后,能明显抑制细胞体外侵袭基底膜成分matrigel的能力,其抑制率分别为：（30．62±0．42）％、（55．30±4．53）％、（76．21±3．21）％。当用浓度为25、50、100μmol／L的药物处理细胞6h后,能明显抑制细胞的趋化运动能力。其抑制率分别为：（18．91±1．43）％、（43．72±2．84）％、（59．614-4．01）％。当用上述浓度的药物处理细胞5h后,测定其在1h内与matrigel的粘附能力。结果表明：5F能使PGCL。     

人参皂甙对去卵巢大鼠骨质丢失的防治作用(英文)

目的:研究人参皂甙(GSL)对去卵巢大鼠所致骨丢失的预防作用。方法:采用双侧卵巢摘除术,体内双荧光标记法,胫骨上段硬组织包埋切片,全自动图象分析及松质骨形态计量学软件处理,观察药物对骨形态计量参数的影响。结果:大鼠去卵巢10周后骨量丢失(-75％,P<0.01)伴随破骨细胞活性、骨形成率及骨转换率明显增加。GSL 100和300mg·kg~(-1)·d~(-1)均抑制破骨细胞骨吸收(-68％,-70％,P<0.01),低剂量组略增加骨形成和骨转换率( 32％, 15％,P>0.05vs OVX)。高剂量组则略抑制骨形成及骨转换率(-30％,-33％vsOVX,P>0.05),并增加骨量( 56％,P<0.01vsOVX),部份预防骨丢失。17α-乙炔基雌二醇100μg·kg~(-1)·d~(-1)抑制骨吸收和骨转换率(-45％,-45％vs OVX,P<0.05),增加骨量( 162％vs OVX,P<0.01),预防骨丢失。结论:人参皂甙对去卵巢所致高转换型骨丢失有预防作用,与其抑制骨吸收和轻度抑制骨转换率有关。其低剂量增加骨形成。人参皂甙抑制骨转换率和预防骨丢失作用比17α-乙炔基雌二醇弱。     

半边旗有效化合物对肺癌细胞DNA拓扑异构酶、TPK及c-myc基因的影响

目的：研究半边旗有效化合物６Ｆ和Ａ对肺癌细胞ＤＮＡ拓扑异构酶（ＴＯＰＯ）１和Ⅱ活性的影响：化合物Ａ对细胞胞浆和胞膜酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）活性及癌基因ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的影响。方法：通过电泳法测定化合物６Ｆ和Ａ对肺癌细胞ＤＮＡ拓扑异构酶（ＴＯＰＯ）Ⅰ、Ⅱ活性的影响：用液体闪烁计数法测定化合物Ａ对酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）活性的影响;流式细胞仪间接荧光检测法测定化合物Ａ对ｃ－ｍｙｃ基因蛋白表达的影响。     

多粘菌素B对S_（180）细胞增殖和膜脂肪酸组成的影响

观察到环肽类抗生素多粘菌素Ｂ对小鼠肉瘤Ｓ１８０细胞增殖具有显著抑制作用，半数有效抑制浓度（ＩＣ５０）为８．９５×１０５ＩＵ·Ｌ－１。用毛细管柱气相色谱法分析了多粘菌素Ｂ作用于Ｓ１８０细胞２４ｈ后膜脂肪酸组成的变化，发现磷脂的花生四烯酸（Ｃ２０：４）显著减少，中性脂的硬脂酸（Ｃ１８：０）增多，油酸（Ｃ１８：１）减少，硬脂酸与油酸的比值（Ｃ１８：０／Ｃ１８：１）升高．提示多粘菌素Ｂ对Ｓ１８０细胞增殖的抑制与膜脂肪酸组成的变化有关。     

半边旗提取物对HL—60细胞的细胞毒作用及对细胞周期的影响

目的：研究蕨类植物半边旗提取物对HL－60细胞的体外杀伤作用及对细胞周期的影响。方法：用噻唑蓝（MTT）法测定细胞成活率；用流式细胞术测定细胞周期时相分布。结果：半边旗乙醇总提取物PSE及纯化合物5F、6F及A对HL－60细胞有强烈的杀伤作用，具明显的时间和剂量效应；PSE、5F、6F及A作用HL－60细胞24h后，G0/G1期细胞比例明显下降，S期细胞比例明显升高，G2／M期轻度升高（5F作用组例外）。结论：半边旗提取物对HL－60细胞有强烈的杀伤作用，明显影响细胞周期时相分布。