检测体内异种Ⅱ型胶原异体移植引起的细胞毒反应

检测用猪Ⅱ型胶原免疫新西兰大白兔的异种异体细胞免疫反应。用Ⅱ型胶原免疫新西兰大白兔60d，定期抽取血浆检测抗Ⅱ型胶原抗体；第60d取兔的外周血淋巴细胞、兔脾细胞、淋巴结分别分离淋巴细胞，进行体外二次Ⅱ型胶原刺激，检测由此引起的反应性的细胞增殖规律。实验分为二组，第一组加入不同浓度植物血凝素（PHA）作阳性对照，并测定非特异性免疫；第二组加入不同浓度Ⅱ型胶原，检测特异性免疫。正常兔的淋巴细胞在PHA刺激下发生增殖，但对Ⅱ型胶原的第一次刺激不发生增殖，而免疫兔对PHA和Ⅱ型胶原的刺激均能发生显著的增殖。表明异种Ⅱ型胶原在一定浓度下．可以引起免疫兔的抗Ⅱ型胶原抗体的升高。并可引起兔脾、外周血淋巴细胞增殖，异种Ⅱ型胶原能在体内引起细胞免疫反应。     

独眼青光眼手术疗效与风险

目的讨论研究对独眼青光眼患者实施手术治疗的临床意义并对手术的风险性进行评估。方法选择我院眼科需行青光眼手术的独眼患者32例,根据病情分为白内障超声乳化吸出并人工晶状体植入术17例,小梁切除术15例。比较两组患者不同手术治疗后患者恢复情况及术后并发症等相关指标。结果术后两组患者眼压改善程度及视力提高情况,差异无统计学意义(P0.05),均显著优于治疗前且手术脱盲率100.0%,脱残率97.1%,未出现由于手术导致失明的事件发生。部分患者出现并发症给予及时治疗后恢复,患者及家属对手术治疗满意度较高且对手术结果接受程度较好。结论对独眼青光眼患者实施手术治疗具有较好的临床疗效,可显著提高患者术后视力,改善其生活质量。手术前需对患者进行完善的检查并做好各类手术准备,秉承认真负责的态度分析患者病情并制定针对性治疗方案不仅有助于患者术后康复,更能显著提高手术的安全性与有效性并降低医疗事故的发生概率,降低医生的责任风险并促进医患关系良好健康的发展。     

人端粒酶反转录酶重组绿色荧光表达载体转染椎间盘正常髓核细胞

背景：椎间盘髓核细胞分离培养困难,老化较快,迫切需要一种标准细胞株用于实验研究。 目的：探讨人端粒酶反转录酶重组绿色荧光表达载体的构建及其转染正常髓核细胞构建永生化细胞的可行性研究。 方法：通过目的基因克隆、真核表达质粒中目的基因序列测定、目的基因真核表达质粒的构建、转染人端粒酶反转录酶表达检测等步骤进行实验。 结果与结论：构建出人端粒酶反转录酶重组绿色荧光表达载体,成功转染正常髓核细胞并在细胞中稳定表达。结果表明运用人端粒酶反转录酶转染椎间盘髓核细胞构建永生化细胞是一种可行的方法。     

海藻酸钠复合载体长期培养软骨细胞的生物学稳定性

背景：近年研究发现在海藻酸钠三维培养体系中软骨细胞存活时间延长,细胞外基质分泌旺盛。　 目的：观察海藻酸钠复合载体对体外长期培养软骨细胞生物学稳定性的影响。 方法：将兔软骨细胞接种至以海藻酸钠、透明质酸、壳聚糖、纤维连接蛋白、碱性成纤维细胞生长因子为主要成分的复合载体三维培养体系中,以平面培养作为对照。定期观察在两种不同培养体系中软骨细胞形态学改变,细胞生长曲线差异,细胞上清液糖胺多糖含量差异。 结果与结论：软骨细胞在海藻酸钠复合载体中生长良好,生长旺盛,并形成球状细胞团,细胞分裂增殖活跃;培养2 d时复合载体培养软骨细胞增殖稍高于平面培养软骨细胞;培养4 d时可见复合载体培养软骨细胞增殖明显加快;培养6~14 d时复合载体培养的仍保持较稳定增殖,而平面培养的软骨细胞增殖逐渐降低;复合载体细胞外液糖胺多糖含量明显高于平面培养软骨细胞。说明海藻酸钠复合载体可以长期培养软骨细胞并保持其生物学稳定性。     

骨科疾病中蛋白质组学的应用进展

背景：蛋白质组学是后基因组时代的新研究领域,它以组织或细胞的全部蛋白质结构与功能为研究对象,通过检测蛋白质来分析各种疾病的重要病理生理变化。 目的：就目前蛋白质组学相关技术在骨科各种疾病中的应用与展望作一综述。 方法：以“组织构建/蛋白质组学/骨科学/椎间盘退变/骨质疏松/骨性关节炎/成骨细胞/破骨细胞/综述”为中文检索词,以“proteomics/orthopedics/review/osteoblasts metabolism/osteoclasts metabolism/ intervertebraldisc degeneration/osteoporosis/osteoarthritis/serum related orthopedic diseases”为英文检索词,检索珠江三角洲数字图书馆联盟期刊全文数据库和Pubmed外文数据库2001年1月至2013年9月有关蛋白质组学在骨科各类疾病当中的基础和临床研究的相关文献。纳入有关报告蛋白质组学在椎间盘病变、骨质疏松症及骨性关节炎等方面的应用的文献。排除重复性研究和不典型报道。 结果与结论：蛋白质组学已成功应用于成骨细胞、破骨细胞代谢,椎间盘退变、骨质疏松症、骨性关节炎及骨科相关疾病的血清等方面,以上所提及的疾病均为各类人群的常见多发病,这些相关的基础临床研究无疑为人类健康带来了巨大的福音,相信蛋白质组学相关技术在基础医学和临床医学中会取得更大的突破,将展示广阔的发展前景。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

细胞骨架与力学信号传导

背景：细胞在感受力学刺激后,通过一定的信号转导机制,将力学信号转换成化学信号,进而实现其生物功能。在这一系列的信号转导过程中,横贯细胞的细胞骨架作为枢纽,发挥着重要作用。 目的：通过系统的分析和总结细胞骨架在力学信号转导通路中的作用机制,为细胞骨架相关疾病的临床治疗提供潜在的治疗靶点。 方法：以英文检索词为“cytoskeleton,microtubules,microfilaments,intermediate filaments,mechanical stimulation,signal transduction ”及中文检索词为“细胞骨架、微管、微丝、中间纤维丝、机械刺激、信号传导”,由第一作者检索 1990至2012年PubMed 数据库及中国知网中文科技数据库,查阅近年机械刺激对细胞骨架影响的相关文献,最终保留 48篇文献。 结果与结论：机械刺激是细胞增殖、生长发育以及凋亡的重要因素。随着对细胞骨架认识的逐渐深入,人们发现细胞骨架在细胞对力学刺激的感受和信息传导的过程中起重要作用。机械刺激作用于细胞后,通过Rho家族蛋白、蛋白激酶C、整合素以及丝裂原激活蛋白激酶等多条信号通路,且各种信号传导通路中存在交联,从而影响细胞骨架的重组,并将力学刺激进一步转换成化学信号,最终完成其生物效应。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

人正常椎间盘髓核细胞体外不同培养代次的生物学性状分析:适应于组织工程椎间盘种子细胞的选择

背景:目前用作组织工程椎间盘研究的种子细胞主要来源于体外培养的髓核细胞,而体外培养的髓核细胞传至一定代次后即出现老化现象,老化的细胞失去生长能力不适于组织工程研究.目的:比较不同代次正常髓核细胞的形态学、增殖特性以及细胞的主要细胞外基质成分基因表达情况.方法:以酶消化法分离、培养人正常椎间盘髓核细胞,对不同代次髓核细胞采用光镜、电镜等形态学方法进行大体形态和超微结构观察,采用XTT实验检测不同代次细胞间的生长动力学差异,测定髓核细胞的活力和细胞Ⅱ型胶原及糖胺多糖mRNA表达.结果与结论:传3代之前细胞形态饱满,胞浆丰富,细胞呈多角形、短梭形,细胞内细胞器丰富,形态正常,线粒体含量少,核糖体含量多,说明细胞代谢旺盛,增殖能力强,生长曲线和XTT实验也提示传3代之前髓核细胞活性高,增殖能力强,细胞活力高,细胞外基质分泌旺盛.从传4代起,部分细胞形态逐渐向长梭形演化,逐渐表现为成纤维细胞的形态,说明细胞开始出现"返祖"现象,也称为老化现象,细胞的生长趋缓,传六七代后细胞均表现为长梭形,粗面内质网扩张,线粒体增多,细胞活力降低,细胞外基质明显减少,生长处于停滞状态.实验结果提示,体外培养条件下,人髓核细胞前3代细胞形态良好,增殖能力强,适合作为组织工程椎间盘的种子细胞,而细胞传4代后增殖能力逐渐减弱,不宜作为组织工程椎间盘的种子细胞.     

兔膝关节软骨缺损动物模型的建立

背景:以往制备骨关节模型的方法成模时间较长.目的:建立一个理想的兔膝关节软骨缺损动物模型.设计、时间及地点:随机分组设计,对照动物实验,于2007-03/2008-10在广州市红十字会医院创伤外科研究所完成.材料:用新西兰大白兔16只,雌雄不限,体质量3.2～4.0 kg.方法:以6g/L戊巴比妥钠行耳缘静脉注射麻醉下,通过在实验兔后腿关节的股骨髁关节面部位用电动骨钻,在控制其直径4.5 mm,深度为3 mm,造成其关节软骨的缺损,制模后2,6,12,18周取出其股骨髁.主要观察指标:用大体观察、组织学染色共聚焦显微镜观察缺损部位软骨修复情况.结果:实验兔后腿关节的股骨髁关节面的关节软骨缺损后,在制模后2,6周缺损部位凹陷明显,只有少许肉芽组织和纤维组织生长填充,未见软骨细胞爬行生长,12,18周见缺损部位以纤维组织增生为主,底部及边缘可见骨组织和软骨增生,但是镜下形念仍与正常软骨组织区别较大,表面仍未见软骨细胞爬行生长.结论:实验建立的兔膝关节软骨缺损模型成模时间短,且缺损部位不能通过自我修复达到自愈.     

关节镜诊治膝关节骨关节炎50例临床总结

目的：总结关节镜诊断膝关节骨关节炎和镜下清理术治疗膝骨关节炎的经验。方法：50例（55膝）膝关节骨关节炎病人，均行关节镜检查和镜下清理术。镜下所见为：软骨退变、滑膜炎性增生、半月板退变、交叉韧带磨抓游离体及骨赘形成、关节积液。结果：随访1－3年，近期优良率76．4％。结论：关节镜检查可以早期诊断膝关节骨关节炎，镜下清理术具有创伤小、并发症少、患者恢复快等优点，是诊治膝关节骨关节炎的有效方法。     

应用Ⅱ型胶原为载体的异种异体移植修复关节软骨缺损

背景:已有用Ⅱ型胶原作为载体的软骨细胞移植的实验动物模型,Ⅱ型胶原是否引起实验性的关节炎或发生由Ⅱ型胶原介导的细胞毒的反应尚未明确.目的:检测用猪Ⅱ型胶原免疫新西兰大白兔的细胞免疫状态.设计:以实验动物为研究对象,观察对比的探索性研究.单位:一所市级医院创伤外科研究所.材料:实验于1999-08/2000-02在广州红十字会医院创伤外科研究所完成.新西兰大白兔6只,雌雄不限,体质量2.0～3.0kg.方法:用Ⅱ型胶原免疫新西兰大白兔60 d,定期抽取血浆检测抗Ⅱ型胶原抗体;第60天取兔的外周血淋巴细胞,取兔脾细胞、淋巴结分离淋巴细胞,进行体外2次Ⅱ型胶原刺激,检测由此引起的反应性的细胞增殖规律.随机分为两组,第1组加入不同浓度植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)作阳性对照,并测定非特异性免疫;第2组加入不同浓度Ⅱ型胶原,检测特异性免疫.主要观察指标:①兔抗Ⅱ型胶原抗体含量检测.②正常兔与免疫兔脾淋巴细胞增殖试验比较.③正常兔和免疫兔淋巴结淋巴细胞增殖试验比较.④正常兔和免疫兔外周血淋巴细胞增殖试验比较.结果:第21天抗体效价出现第1次高峰,再次注射抗原40 d后出现第2次高峰,维持20 d后逐渐下降,正常兔的淋巴细胞在PHA刺激下发生增殖,但对Ⅱ型胶原的第1次刺激不发生增殖,而免疫兔对PHA和Ⅱ型胶原的刺激均能发生显的增殖,Ⅱ型胶原浓度为25 mg/L已有发生,在50mg/L出现高峰.结论:异种Ⅱ型胶原在一定浓度下,可以引起免疫兔的抗Ⅱ型胶原抗体的升高,并可引起兔脾、外周血淋巴细胞增殖,在体内引起细胞免疫反应,且可引起移植免疫性关节炎.