PRP和自体骨髓基质细胞移植修复狗牙Ⅱ度根分叉病变的研究

目的：应用富血小板血浆和／或骨髓基质细胞移植修复根分又病变的动物实验,探讨其用于牙周再生治疗的可行性。方法：人工构建5只成年杂种狗慢性Ⅱ度根分叉病变模型,分别随机采用：引导组织再生治疗术 富血小板血浆 Bio-Oss(GTR／PRP／Bio-Oss)、引导组织再生治疗术 富血小板血浆 Bio-Oss 自体骨髓基质细胞(GTR／PRfl／Bio-Oss/MSCs)、引导组织再生治疗术 骨髓基质细胞(GTR／MSCs)和GTR治疗,每组各7颗牙。12周后作病理切片,HE染色观察牙周组织再生情况。结果：动物实验发现GTR组的新生牙槽骨、牙骨质和牙周膜高度与GTR／PRfl／Bio-Oss组、GTR／MSCs组无显著性差异;而GTR／PRPl／Bio-0ss／MSCs组与上3组有显著性差异。结论：在本实验条件下,MSCs和胶原膜复合,PRP与Bio-Oss复合对GTR的引导牙周组织再生作用没有显著的促进作用。     

冻存骨髓基质细胞复合材料体内成骨基质的合成能力

背景:课题组以往研究显示：体外培养条件下,冻存骨髓基质细胞复苏后仍保持较高的细胞存活率、细胞增殖及成骨分化能力。上述结果仍然需要进一步在体内环境下证实。 目的：观察经超低温冻存后的骨髓基质细胞和支架材料胶原膜BME-10X复合体植入裸鼠体内后Ⅰ型胶原的合成情况。 方法：体外分离培养Beagle犬骨髓基质细胞,冻存12个月后复苏,体外构建骨髓基质细胞和胶原膜材料复合体。分别经矿化诱导培养液、基础培养液培养5 d后,植入裸鼠体内,于术后第4周取出标本,进行大体观察、组织病理学和免疫组化分析,并应用图像分析系统对各组标本中的Ⅰ型胶原进行定量分析。以矿化诱导培养液培养的单纯胶原膜材料为对照组。 结果与结论：对照组在植入胶原膜后,胶原膜边界清晰,膜边缘及内部基本没有细胞生长,Ⅰ型胶原分布很少;在未诱导矿化组,术后第4周可见,胶原膜内有细胞长入,并有细小的条索状新生胶原形成,Ⅰ型胶原分布明显增多;在诱导矿化组,植入后也可见支架材料的分解降解和更多的细胞生长,大量新生的胶原形成类骨质样组织,与前两组对比,Ⅰ型胶原分布增多有显著性意义。结果表明冻存骨髓基质细胞复苏后进行体外培养扩增与诱导分化,并在体内环境下复合胶原支架材料,仍然具有较强成骨能力。     

不同浓度凝血酶对富血小板血浆修复颅骨缺损的影响

背景：富血小板血浆生物功能的发挥受多种因素的控制,如个体差异、富血小板血浆的使用浓度、富血小板血浆载体、富血小板血浆激活方式等均可影响富血小板血浆的作用。目的：观察不同浓度凝血酶对富血小板血浆修复颅骨缺损的影响。方法：抽取兔耳中央动脉全血制备富血小板血浆,稀释富血小板血浆,使其中血小板最终计凝数约为全血的5倍。在16只新西兰兔颅骨顶部分别制备4个直径为8 mm的全厚层骨缺损,按随机数字表法将60 U/mL凝血酶+富血小板血浆+β-磷酸三钙、1 000 U/mL凝血酶+富血小板血浆+β-磷酸三钙、富血小板血浆+β-磷酸三钙与单纯β-磷酸三钙植入4个缺损区域内。术后1,3个月X射线、光镜观察颅骨修复情况,计算各组新骨生成面积百分数。结果与结论：术后1个月,各组缺损边缘较清晰,缺损周边有不同程度新骨生成,β-磷酸三钙颗粒部分降解,降解处由新骨代替,仅见少量骨陷窝,缺损中心β-磷酸三钙周围可见纤维包绕,仅少数标本可见新骨生成;X射线显示边界清晰,缺损区密度较为均一;各富血小板血浆组新骨生成百分数均高于β-磷酸三钙组(P < 0.05),但富血小板血浆各组间差异无显著性意义(P > 0.05)。术后3个月,各组缺损边界不清,新骨生成量增加,缺损周边β-磷酸三钙颗粒部分或全部降解并由新生骨所代替,部分区域出现骨小梁,新生骨中骨陷窝增多,多数标本缺损中央有新骨生成;X射线显示各组缺损边缘模糊不清,缺损周边部分密度高于缺损中心部位,与其他正常部位骨密度相当;各富血小板血浆组新骨生成百分数亦明显高于β-磷酸三钙组(P < 0.05),富血小板血浆+β-磷酸三钙组高于其他3组(P < 0.05),两凝血酶组差异无显著性意义(P > 0.05)。提示富血小板血浆可促进新西兰兔颅骨缺损修复,60,1 000 U/mL凝血酶对富血小板血浆修复新西兰兔颅骨缺损的作用无影响,可能与并未找到凝血酶的最佳浓度有关。     

不同浓度凝血酶对富血小板血浆修复颅骨缺损的影响

背景:富血小板血浆生物功能的发挥受多种因素的控制,如个体差异、富血小板血浆的使用浓度、富血小板血浆载体、富血小板血浆激活方式等均可影响富血小板血浆的作用.目的:观察不同浓度凝血酶对富血小板血浆修复颅骨缺损的影响.方法:抽取兔耳中央动脉全血制备富血小板血浆,稀释富血小板血浆,使其中血小板最终计凝数约为全血的5倍.在16只新西兰兔颅骨顶部分别制备4个直径为8 mm的全厚层骨缺损,按随机数字表法将60 U/mL凝血酶+富血小板血浆+β-磷酸三钙、1 000 U/mL凝血酶+富血小板血浆+β-磷酸三钙、富血小板血浆+β-磷酸三钙与单纯β-磷酸三钙植入4个缺损区域内.术后1,3个月X射线、光镜观察颅骨修复情况,计算各组新骨生成面积百分数.结果与结论:术后1个月,各组缺损边缘较清晰,缺损周边有不同程度新骨生成,β-磷酸三钙颗粒部分降解,降解处由新骨代替,仅见少量骨陷窝,缺损中心β-磷酸三钙周围可见纤维包绕,仅少数标本可见新骨生成;X射线显示边界清晰,缺损区密度较为均一:各富血小板血浆组新骨生成百分数均高于β-磷酸三钙组(P<0.05),但富血小板血浆各组间差异无显著性意义(P>0.05).术后3个月,各组缺损边界不清,新骨生成量增加,缺损周边β-磷酸三钙颗粒部分或全部降解并由新生骨所代替,部分区域出现骨小梁,新生骨中骨陷窝增多,多数标本缺损中央有新骨生成;X射线显示各组缺损边缘模糊不清,缺损周边部分密度高于缺损中心部位,与其他正常部位骨密度相当;各富血小板血浆组新骨生成百分数亦明显高于β-磷酸三钙组(P<0.05),富血小板血浆+β-磷酸三钙组高于其他3组(P<0.05),两凝血酶组差异无显著性意义(P>0.05).提示富血小板血浆可促进新西兰兔颅骨缺损修复,60,1 000 U/mL凝血酶对富血小板血浆修复新西兰兔颅骨缺损的作用无影响,可能与并未找到凝血酶的最佳浓度有关.     

环孢素A联合脂多糖对牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的探讨环孢素A(CsA)联合牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)增殖的影响。方法改良组织块法培养hPDLFs,分别用CsA(10、100、200、400ng/ml),Pg-LPS(10、100、1000ng/ml),CsA(100ng/ml)加Pg-LPS(100ng/ml),CsA(100ng/ml)加Pg-LPS(1000ng/ml)作用于生长良好的第3～5代细胞,MTT法测其药物作用用下的增殖情况。结果细胞经上述浓度CsA或Pg-LPS作用后形态无明显变化,CsA在100ng/ml浓度情况下,促细胞增殖作用最明显;高浓度Pg-LPS(1000ng/ml)显著抑制细胞增殖,100ng/mlCsA能够显著降低Pg-LPS(1000ng/ml)对细胞增殖的抑制效应;CsA(100ng/ml)与Pg-LPS(100ng/ml)联合作用于细胞时,对细胞的增殖无明显影响。结论在一定的浓度下,CsA促PDLF增殖作用明显;CsA能对抗脂多糖(LPS)抑制细胞增殖的效应。