肾肿瘤剜除与标准肾部分切除术对局限性肾癌术后正常肾实质保护的比较

目的:比较肾肿瘤剜除(TE)与标准肾部分切除术(SPN)对局限性肾癌术后患侧正常肾实质保护的差异,为临床合理选择肿瘤剜除提供依据。方法:回顾性分析2015～2016年我院肾部分切除术患者资料,纳入手术前及术后3～12个月均行增强CT及肾功生化且确诊为单侧单发性肾肿瘤患者。观察SPN组与TE组热缺血时间、手术切缘、术后病理、并发症及术后肾功能等,比较2种手术方式对保留患侧肾脏正常肾实质的差异。多元线性回归分析肾部分切除术后正常肾实质丢失的相关因素。结果:所有手术均经腹腔镜顺利完成,无中转开放手术病例。SPN组与TE组热缺血时间比较差异有统计学意义(23.5min vs.21.0min,P=0.042),术中出血量、切缘阳性率、病理分期分级以及术后并发症发生率差异均无统计学意义。术后3～12个月复查CT未见肿瘤残留及复发病例。术后SPN组与TE组肾体积丢失差异有统计学意义(19.9cm~3 vs.10.26cm3,P=0.017)。多因素分析发现肿瘤直径与手术方式和肾部分切除术后患侧正常肾实质丢失明显相关。结论:肾肿瘤剜除是一种技术上可行、肿瘤学上安全的一种保留肾单位手术。肾TE较SPN能保留更多的正常肾实质,是临床保留肾单位手术的合理选择。     

经尿道双极等离子束电切治疗难治性尿道狭窄的疗效观察

目的探讨经尿道双极等离子体电切治疗尿道狭窄的安全性和有效性。方法2006年12月～2007年12月采用经尿道双极等离子体（柱状及襻状电极）电切治疗尿道狭窄10例,其中骨盆骨折所致1例,会阴部骑跨伤4例,前列腺电切术后狭窄2例,长期留置尿管后狭窄3例。结果10例手术均获成功．术中出血量10～30ml：术后随访10例,自行排尿通畅,无性功能障碍和尿失禁,术后6个月Qmax15—24ml／s。所有病例随访期间未出现再狭窄。结论经尿道双极等离子束电切治疗尿道狭窄,具有低温切割、切割准确、术后尿道再狭窄少等优点,是很有效的微创新技术之一。     

低剂量LPS激活NF-κB促进胰岛β细胞株NIT-1增殖

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对小鼠胰岛β细胞增殖的影响及NF-κB信号途径的调节作用。方法不同剂量LPS按不同时间刺激小鼠胰岛β细胞株NIT-1细胞,并使用NF-κB特异性抑制剂Bay11-7082(5μmol·L-1)进行干预。使用cell counting kit-8(CCK-8)试剂检测细胞增殖,Western blot检测NIT-1细胞磷酸化I-κBα(pI-κBα)和总I-κBα蛋白水平。结果LPS在0.1、0.5、1.0、5.0mg·L-1刺激72h对NIT-1细胞增殖有促进作用,在5.0mg·L-1浓度时促进作用减弱,在10.0mg·L-1浓度时对NIT-1细胞增殖无明显影响;NF-κB特异性抑制剂Bay11-7082可阻断LPS对NIT-1细胞增殖的促进作用;LPS刺激后60～120min,NIT-1细胞磷酸化I-κBα相对于总I-κBα蛋白水平增高;Bay11-7082阻断LPS诱导的NIT-1细胞I-κBα蛋白磷酸化。结论低剂量LPS促进NIT-1细胞增殖,NF-κB激活可能参与其过程。     

女性膀胱癌腹腔镜根治性切除原位回肠新膀胱术术式改进

目的 探讨并改进腹腔镜女性膀胱癌根治性切除-原位回肠新膀胱术的手术方法,随访观察其治疗效果.方法 2003年2月至2008年9月,为19例女性膀胱癌患者施行了腹腔镜膀胱全切除-原位回肠新膀胱术,其中13例同时行子宫、卵巢及附件切除,6例行保留子宫、卵巢附件.主要手术步骤为:①行标准盆腔淋巴结清扫,②行膀胱全切除同时切除或不切除内生殖器,③在下腹正中线上作4～5 cm切口,取出标本,并构建"M"形去管回肠储尿囊,④输尿管末端形成半乳头,"插入式"种植于储尿囊;⑤储尿囊回纳腹腔,在腹腔镜下作储尿囊与尿道吻合.术后记录围手术期情况,并对患者进行定期随访,了解患者的生活质量、排尿情况,并检测患者的残余尿量、新膀胱压力等.结果 手术时间(340.5±43.1)min,术中出血(353.9±71.3)ml.术后随访2～69个月,半年内均能自主排尿,1例日间偶有尿失禁,2例夜间尿失禁,3例排尿困难.膀胱容量(333.6±45.4)ml,残余尿量0～210(41.2±18.1)ml.术后半年至1年,行静脉尿路造影,除1例单侧肾积液外,其余双肾显影良好,未见肾盂输尿管扩张.膀胱尿道造影,可见膀胱位于盆腔,其形状大小位置于正常膀胱相似,未见膀胱输尿管反流.术后输尿管新膀胱吻合口梗阻1例,新膀胱阴道瘘1例,肿瘤远处转移2例于随访期间死亡.结论 腹腔镜女性膀胱全切除-原位回肠新膀胱术,技术上可行,可根据患者情况采用保留或切除内生殖器的手术方法,术中出血较少,创伤较小,术后大部分患者能自主排尿,但尿失禁及排尿困难发生率略高于男性,术后中远期新膀胱功能及肿瘤根治效果还需进一步临床观察.     

前列腺特异性膜抗原人源Fab抗体可变区基因的筛选与鉴定

目的:筛选、鉴定抗中国人前列腺特异性膜抗原(PSMA)的人源Fab抗体可变区的编码基因,为PSMA蛋白质生物学功能的研究及前列腺癌的基因治疗研究开辟新途径。方法:采用噬菌体表面展示技术,以PSMA原核表达重组子pET30 a(+)-PSMA诱导表达并纯化后的PSMA为固相抗原,从噬菌体Fab可变区抗体库中经过5轮“吸附-洗脱-扩增”筛选过程,获得抗原结合活性和特异性较强的PSMA人源Fab可变区抗体基因片段的阳性克隆,并对其进行免疫检测及序列测定。结果:筛选得到Fab抗体克隆的Fd段基因核苷酸序列为696 bp,编码由232个氨基酸残基组成的多肽,与人免疫球蛋白γ链恒定区的同源性为98%;轻链κ基因核苷酸序列为630 bp,编码由210个氨基酸残基组成的多肽,与κ链恒定区同源性为93%。结论:利用噬菌体抗体库技术,成功获得了PSMA人Fab抗体可变区编码基因克隆,该克隆抗体基因具有典型的免疫球蛋白轻链和重链可变区的结构特点,基因编码产物具有与PSMA反应的免疫学活性和特异性。     

碳酸酐酶Ⅸ(CA-Ⅸ)与HIF-1α在前列腺癌中的表达情况及相关性研究

目的探讨碳酸酐酶Ⅸ(CA-Ⅸ)及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在前列腺癌不同分期分级中的表达及其内在联系情况。方法采用免疫组织化学S-P法及Western-blot检测正常前列腺组织、前列腺癌组织以及前列腺癌细胞系PC-3、Lncap中CA-Ⅸ及HIF-1α的表达情况,结合临床资料进行统计分析,评价CA-Ⅸ及HIF-1α表达情况与前列腺组织癌变分化程度之间的关系,同时分析两者之间的相关性。结果在正常前列腺组织中CA-Ⅸ及HIF-1α基本不表达,在前列腺癌组织石蜡切片中,HIF处于高表达,其表达情况与前列腺癌病理分级相关。低分化的前列腺癌组织中HIF-1α的表达量高于高分化的前列腺癌组织。CA-Ⅸ在前列腺癌组织中表达率为37.5%,高于正常组织,与肿瘤分化程度无关。CA-Ⅸ及HIF-1α在前列腺癌组织中的表达情况具有相关性。结论 CA-Ⅸ及HIF-1α与前列腺癌的发生成正相关,而且两者在前列腺癌组织中的表达具有相关性,同时提示了以缺氧诱导因子通路为基础的分子机制在前列腺癌的演进中起到一定的作用。     

前列腺癌噬菌体抗体库的构建及抗特异性膜抗原抗体的筛选

目的建立国人前列腺癌噬菌体Fab抗体片段库，筛选、鉴定抗前列腺特异性膜抗原（PSMA）的人源Fab抗体可变区的编码基因，为前列腺癌的诊断与基因治疗研究开辟新途径。方法20例前列腺癌患者外周血分离淋巴细胞，提取其总RNA，经RTPCR及半套式扩增得到免疫球蛋白全部轻链和重链Fd段基因，克隆进载体pComb3，并电转化大肠杆菌XLl-Blue，构建前列腺癌噬菌体Fab抗体片段库。采用噬菌体表面展示技术，以PSMA原核表达重组子pET30a（＋）-PSMA诱导表达并纯化后的PSMA为固相抗原，从噬菌体Fab抗体库中经过“吸附洗脱扩增”筛选过程，获得抗原结合活性和特异性较强的PSMA人源Fab可变区抗体基因片段的阳性克隆，并进行免疫检测及序列测定。结果成功构建前列腺癌噬菌体抗体Fab片段库，其轻链及重链Fd段与载体DNA的重组率分别为87％、79％，库容为2．32×10^7，滴度为8．7×10^13pfu／ml。筛选得到Fab抗体克隆的Fd段基因核苷酸序列为696bp，编码由232个氨基酸残基组成的多肽，与人免疫球蛋白γ链恒定区的同源性为98％；轻链κ基因核苷酸序列为630bp，编码由210个氨基酸残基组成的多肽，与κ链恒定区同源性为93％。结论成功构建了前列腺癌噬菌体抗体库，并获得了PSMA人Fab抗体可变区编码基因克隆，该克隆抗体基因具有典型的免疫球蛋白轻链和重链可变区的结构特点，基因编码产物具有与PSMA反应的免疫学活性和特异性。     

腹膜后腹腔镜手术治疗肾上腺嗜铬细胞瘤

目的探讨经腹膜后入路施行腹腔镜肾上腺嗜铬细胞瘤切除术的疗效。方法行腹膜后腹腔镜肾上腺嗜铬细胞瘤切除术32例，术前经尿VMA、MRI及^131I-MIBG确诊为肾上腺嗜铬细胞瘤26例，拟诊嗜铬细胞瘤6例。术前均用苯苄胺等药物准备2—4周。手术采用气管内麻醉，取患侧向上的全侧卧位，经腹膜后入路，“手指分离法”建立腹膜后工作空间，显露肿瘤，用超声刀分离肿瘤周围组织，较大的血管及肾上腺中央静脉用钛夹双重钳夹后剪断，将瘤体置入标本袋内取出。结果32例均在腹膜后腹腔镜下顺利切除肿瘤。手术时间45—180min，平均（91．2±22．5）min。出血量20—160ml，平均（64．3±24．1）ml。29例（90．6％）在分离瘤体时血压波动〈40mmHg。瘤体直径28—53mm，平均（39．5±7．7）mm。术后血压稳定，疼痛较轻，术后4—9d出院。病理检查证实均为肾上腺嗜铬细胞瘤。结论腹膜后腹腔镜肾上腺嗜铬细胞瘤切除术具有操作精细准确，不需过多地推动和挤压肿瘤，出血少，创伤小，恢复快等优点。     

PSMA对JNK/SAPK通路的激活及对前列腺癌细胞凋亡的调控*

 目的：探讨前列腺特异性膜抗原(PSMA)是否通过c-Jun氨基末端激酶/应激激活的蛋白激酶(JNK/SAPK)通路对前列腺癌细胞凋亡进行调控。方法：利用前期研究中建立的高效阻断PSMA表达的shRNA慢病毒载体,阻断前列腺癌细胞中PSMA的表达作为实验的干扰组;同时利用构建的PSMA载体转染前列腺癌细胞,促进前列腺癌细胞中PSMA的表达作为阳性实验组;不做任何处理的细胞株作为空白组;加入JNK/SAPK抑制剂SP600125作为阴性对照。Western blotting及免疫细胞化学方法观察各组细胞p-JNK/SAPK的表达量,CCK-8法检测细胞生长情况、流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果：Western blotting及细胞免疫化学提示抑制PSMA表达后,p-JNK/SAPK表达水平下降;增强PSMA表达后p-JNK/SAPK表达水平上升;在SP600125作用下,3组细胞p-JNK/SAPK均处于较低水平,且彼此无明显差异。CCK-8法和流式细胞术检测细胞周期提示PSMA表达受抑制后细胞增殖能力下降,细胞S期百分比减少;增加PSMA表达,细胞增殖能力增强,S期百分比增加;在SP600125作用下,3组细胞增殖和S期百分比均处于低水平,无明显差异。在抑制PSMA表达组中,前列腺癌细胞的凋亡率明显升高;而在增强PSMA表达组,细胞凋亡率明显降低;加入SP600125后,细胞凋亡率均低于常规培养组。结论：PSMA通过上调JNK/SAPK信号通路对前列腺癌细胞的增殖、细胞周期及凋亡产生影响,但JNK/SAPK并不是唯一通路。     

原发性精囊恶性肿瘤手术方案选择

目的探讨精囊癌的手术方案及其选择条件。方法在总结相关文献的基础上，回顾分析我院5例精囊癌患者手术方案的选择，并进行随访；总结精囊癌不同分期条件下手术方案的选择及治疗效果。结果2例行双侧精囊及膀胱、前列腺、直肠根治性切除术，术后1例术后3月复发并远处转移。3例行精囊肿瘤、膀胱部分、前列腺部分切除术，术后1例2年复发死亡，1例3年死于其他疾病。结论根治性手术是精囊癌的基本治疗措施，可根据肿瘤的范围、周围器官受累情况选择手术范围。