肠道储尿囊粘膜远期形态学改变的研究

目的初步探讨术后肠道储尿囊粘膜远期形态学的变化与临床并发症的关系.方法肠道储尿囊代膀胱术后随访25例患者,其中结肠储尿囊15例,回肠储尿囊10例.取得活检组织后行光镜和电镜检查.结果结肠储尿囊术后远期病例肠粘膜腺体深度为(0.17±0.04)mm,明显浅于对照组腺体深度[(0.42±0.04)mm],微绒毛高度为(0.35±0.05)μm,明显短于对照组微绒毛高度(0.69±0.08)μm,出现粘膜明显萎缩;回肠储尿囊术后肠粘膜绒毛高度,近期组为(0.61±0.22)mm,远期组为(0.37±0.16)mm,与对照组(0.41±0.14)mm比较,远期、近期都有明显的粘膜萎缩.在远期病例,2种储尿囊粘膜上皮细胞的紧密连接都保持良好.没有发现明显恶变的形态学征象.发生了代谢性酸中毒或储尿囊结石的病例在粘膜形态结构上无特殊改变.结论术后肠道储尿囊粘膜出现了结构上的萎缩,是"适应性”的变化,认为肠管是一种良好的膀胱替代物.     

骨髓间充质干细胞在膀胱脱细胞基质上的生长及分化***★

背景：传统方法多采用平滑肌细胞和移行上皮细胞构建组织工程膀胱，并进行支架材料的双面种植，但由于平滑肌细胞取材培养困难，且体外传代有限，双面种植较为困难。 目的：实验拟验证以骨髓间充质干细胞及膀胱脱细胞基质构建组织工程膀胱的可行性。 设计：基础实验研究。 单位：中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心。 材料：实验于2006-03/2007-05在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心完成。实验室级别为卫生部部属医院开放实验室。1月龄SD大鼠，雌雄不限，体质量80~ 100g，由中山大学实验动物中心提供。新鲜猪膀胱取自南方医科大学动物实验中心。 方法：采用全骨髓培养连续贴壁法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞，并应用流式细胞仪检测其表面抗原。采用去污剂洗涤法制备猪膀胱脱细胞基质，并测定其纯度及特性。将第3代骨髓间充质干细胞接种到膀胱脱细胞基质上，以添加25 ng/L血管内皮生长因子（VEGF165）的培养液进行体外、体内复合培养，检测其相容性。体内实验以细胞单独培养为对照，体外实验以未植入细胞的材料为对照，并模拟合适的微环境诱导骨髓间充质干细胞生长分化，分别在4，8周后取出动物体内的复合材料行组织切片检查，并进行免疫组织化学角蛋白染色，检测上皮细胞再生情况。 主要观察指标：骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质的生物相容性。 结果：①采用全骨髓法成功培养出骨髓间充质干细胞，行流式细胞仪检测细胞表面抗原显示，传代第3代细胞CD29阳性细胞为99.43%。②制备的膀胱脱细胞基质具有良好的生物特性，镜下见均质状态的基质和细丝状的胶原纤维。体内外相容性实验表明骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质具有良好的相容性，细胞生长状态良好。③4周后组织切片检查可见组织中较多炎症细胞浸润，胶原及弹性纤维排列紧密，免疫组织化学角蛋白染色见有薄层、不连续的单层上皮生长，8周后可见组织中已无明显炎症细胞浸润反应，胶原及弹性纤维排列紧密，免疫组织化学角蛋白染色见有薄层、连续的多层上皮生长。 结论：骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质具有良好的生物相容性，并且在体内与周围组织有良好的生物相容性，可以作为构建组织工程膀胱的材料。     

p65基因序列shRNA慢病毒载体构建及其作用功能的初步研究

Objective To obtain shRNA sequences that can stably block the expression of Nuclear Factor kappa- B (p65) in the prostate cancer cell line LNCaP and construct the lentivirus vector.And validate the gene function of p65 in the cell line. Methods According to p65 genetic information, we design siRNA1, siRNA2, siRNA3 those three siRNA sequences targeting the ods area of p65 gene and then form the corresponding four pairs of complementary single strand DNA of shRNA, including the sense strand and the antisense strand. The synthetic shRNA sequence was inserted into the empty pSIH1-H1-copGFP shRNA Vector, and after transfecting the prostate cancer cells , the inhibitory effect of p65 mRNA by different sequences was detected through real-time PCR, and the inhibitory effect of p65 protein expression was detected by Western-blotting. Thus we can obtain highly effective shRNA sequences in the inhibition of p65 in prostate cancer cells. MTT, flow cytometry, transwell were chosen to test the cell growth, migration and invasive power in vitro to compare the difference of the experimental group, control group and negative group. Results The third shRNA sequence had the best inhibitory effect and the inhibitory effect of p65 mRNA in prostate cancer cell line was 59 % and the protein was 81%. It's position locates in p65 (NM_021975 ) 1096-1113 and it's stemloop sequence is 5'-GATCCGCCCTATCCCTTTACGTCATTCAAGAGATGACGTAAAGGGATAGGGCTTTTTG-3'. After transfecting, the prostate cancer cell line had the low expression of p65 stably. Through MTT, we got the growth curve, which showed that the growth ability of experimental group was significantly decreased compared with the control group and the Logarithmic growth didn't appear in the first 96 hours. Flow cytometry test displayed that the percentage of G0-G1-phase cells in experimental group was 61.49%, and the control group was 44.89%, idle group was 41.52%, which was increasing oberviously. The S-phase cells in the experimental group was 28.58%, compared with the 47.36% and 46. 10% diminished. The results of transwell showed that the experimental group had 16. 5000±6. 62076 cells and the other two groups had 45. 6333 13. 54159 and 36. 8333±5. 68412 cells, which showed the invasive power of experimental group was significantly declined(P＜0.05).Conclusions It's successful to obtain shRNA sequences that can stably block the expression of p65 in the prostate cancer cell line LNCaP and construct the lentivirus vector. p65 can positively regulates the biological behavior of prostate cancer LNCaP cell line in the cell growth, migration and invasive power.     

肾动静脉畸形的数字减影血管造影术诊断 及栓塞治疗的临床分析

 【目的】 探讨肾动静脉畸形(rAVM)的数字减影血管造影术(DSA)诊断价值及经动脉栓塞治疗(TAE)的方法及其疗效｡【方法】 回顾性分析2004年10月至2009年1月期间我院5例以肉眼血尿为主要表现的rAVM患者的诊断经过以及TAE治疗的效果,术后随访10 ~ 60个月(平均38个月)｡【结果】 患者经DSA检查后均诊断为静脉曲张型rAVM,自发性､无痛性､全程肉眼血尿是此型rAVM的惟一临床表现｡肾动脉DSA能清晰显示rAVM的畸形血管和动静脉瘘,其中1例副肾动脉供血,1例第2次DSA时出现自然消退｡DSA后5例均顺利以PVA和(或)微钢圈行超选择TAE,术后栓塞肾与全肾的体积平均比为(8.51 ± 4.84)%(范围4.52% ~ 18.31%)｡术后肉眼血尿于1 h明显改善,15 ~ 48 h(平均28 h)内消失,随访期间未见血尿复发,无并发症｡【结论】 临床诊断rAVM困难,在所有影像学检查中,肾动脉DSA是诊断rAVM的金标准｡PVA和(或)微钢圈TAE治疗rAVM安全､简单､微创,中远期临床疗效明确｡     

改良IME-FICC 法检测鼻咽癌患者外周血循环肿瘤细胞及其临床意义分析

目的: 探索改良免疫磁珠富集联合免疫荧光细胞化学技术(IME-FICC)检测鼻咽癌患者外周血循环肿瘤细胞(CTCs)的临床意义。方法: 取76例初治鼻咽癌患者外周血,分离单个核细胞,用与磁珠共价结合的上皮细胞黏附分子(EpCAM)抗体富集外周血中表达EpCAM的肿瘤细胞,再采用宽波段滤板检测细胞角蛋白(CK)8/18阳性的肿瘤细胞。中位随访25个月后,对包括循环肿瘤细胞在内的预后因子做统计分析。结果: 20 例正常人的外周血中未检测到CK8/18,63例鼻咽癌患者的外周血检测到CK8/18,阳性率为82.9%(63/76,P<0.01)。复发患者治疗前检测到的外周血CK8/18⁺ CTC中位数明显高于不复发患者(P<0.01),两组中位病毒壳蛋白抗原(VCA)-IgA滴度无显著差异(P>0.05)。外周血CK8/18⁺CTCs个数在3以上,无复发生存率逐渐下降。VCA-IgA滴度不能预测生存。结论: 外周血中CK8/18⁺CTCs是初治鼻咽癌患者的预后不良因素。     

高效抑制核因子κ—B的茎环RNA基因序列的获得

目的获得高效抑制前列腺癌细胞株Lncap中核因子kappa—B表达的shRNA序列。方法根据核因子kappa—B基因信息,设计siRNA1、siRNA2、siRNA3三条针对核因子kappa-B基因cds区的siRNA序列及无意义的对照序列,组建与之对应的4对互补的单链DNA序列,包括siRNA的正义链和反义链：正义链序列按5’向3’顺序依次为：酶切位点（BamH Ⅰ）、干扰序列（19bp）、loop环（TFCAAGAGA）、干扰序列的反向互补序列（19bp）、中止信号（TTTTT）、酶切位点（EcoR Ⅰ）。将合成的序列插入空载体pSIH1-H1-copGFP shRNA Vector中,转染前列腺癌细胞后,通过real—timePCR检测不同序列片断对核因子kappa—B的mRNA抑制效果。结果设计的3条针对核因子kappa—B的序列中第3条的抑制效果最好,目的序列位于核因子KAPPA—B（NM_021975）的1096到1113,茎环序列为5＇-GATCC GCCCTATCCCTITACGTCA TTCAAGAGA TGACGTAAAGGGATAGGGC TTITT G-3’。其对前列腺癌细胞株中核因子kappa—B的mRNA的干扰效率为59％,对其蛋白表达的抑制率为81％。转染细胞后,细胞可以稳定低表达核因子kappa—B。结论成功获得高效抑制前列腺癌细胞株Lncap中核因子kappa—B表达的shRNA序列,为后期研究核因子kappa-B在前列腺癌发病中的作用机理等研究提供了基础。     

13-MTD通过激活MAPK途径和抑制Akt存活途径诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的： 探讨侧链饱和脂肪酸13-甲基十四烷酸(13-MTD)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用机制。方法：140 mg/L 13-MTD处理体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞和人乳腺正常细胞,采用流式细胞仪检测技术观察13-MTD对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,免疫印迹法检测13-MTD处理后细胞内c-Jun氨基末端激酶(JNK）,p38, Fas 相关死亡结构域蛋白(FADD)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)等蛋白磷酸化变化。结果：流式细胞仪实验结果显示13-MTD能有效地诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,但不引起正常人乳腺上皮细胞凋亡。免疫印迹检测显示经13-MTD处理后的人乳腺癌MCF-7细胞JNK和p38磷酸化蛋白明显增加,Akt磷酸化蛋白明显减少。结论：13-MTD是一个新的安全高效抗肿瘤药物,其作用机制可能是通过激活MAPK途径和抑制Akt存活途径来诱导肿瘤细胞凋亡。     

腹腔镜下脐尿管癌根治切除一例报告

患者,男,56岁.因肉眼血尿4 d于2007年3月入院.B超检查见膀胱内多发实质性占位.膀胱镜检输尿管口清楚,膀胱顶部可见2个广基菜花样肿物,大小分别为3 cm×3 cm、2 cm×2 cm,活检病理报告为中分化腺癌.     

经阴道NOTES辅助腹腔镜肾切除术猪动物模型的构建

目的:介绍构建经阴道NOTES辅助腹腔镜肾切除术猪动物模型的经验和体会,并评价其应用价值。方法:本组选择6头健康雌性小型猪,中位重量46(42～48)kg。全麻,取70°侧卧位,双后肢外展。于脐两侧缘分别置入一5mm和10mm trocar。自阴道后穹窿置入一5mm trocar。自阴道trocar置入腹腔镜,脐缘两tro-car置入操作器械。用电凝钩和吸引器锐性和钝性相结合游离肾脏,逐步显露肾蒂,用Hem-o-lock和钛夹阻断肾动静脉及输尿管,完整切除肾脏,装入自制标本袋,扩大阴道后穹窿切口取出。结果:6例经阴道NOTES辅助腹腔镜猪肾切除术均成功完成,未中转标准腹腔镜或开放手术,亦未另增操作通道。其中左侧3例,右侧3例。中位手术时间100(70～150)min。其中建立通道中位时间10(9～22)min,肾脏切除中位时间15(7～30)min,标本取出中位时间65(40～80)min;术中中位失血量30(20～40)ml。术中无大血管及腹腔脏器损伤等严重并发症发生。结论:建立经阴道NOTES辅助腹腔镜肾切除术的动物模型可行。该模型较真实地模仿人体NOTES的操作过程,是现阶段进行学员培训和特殊器械研发较适宜的方式。     

经脐单一切口腹腔镜联合2mm trocar治疗腹腔型隐睾

目的探讨经脐单一切口腹腔镜联合2 mm trocar治疗腹腔型隐睾的应用价值。方法 2009年11月～2011年1月,采用经脐单一切口腹腔镜联合2 mm trocar治疗11例腹腔型隐睾。脐下缘1.5 cm弧形切口,置入自制多通道trocar,置入5 mm腹腔镜和操作器械1把,脐与耻骨联合连线中点处直接穿刺置入2 mm trocar,置入2 mm腹腔镜抓钳,进行手术。结果 10例11侧成功将隐睾下降固定于阴囊;1例1侧行隐睾切除术。手术时间30～70 min,平均45 min。无手术并发症发生。10例随访3～14个月,平均8.8月,未发现下降的睾丸萎缩。结论经脐单一切口腹腔镜联合2 mm trocar治疗操作不复杂的腹腔型隐睾可行。