用基因芯片研究卡托普利对糖尿病大鼠肾脏增殖相关基因表达的影响及其意义

目的比较卡托普利干预与非干预糖尿病大鼠之间肾脏增殖相关基因表达的差异,探讨卡托普利在非糖尿病肾病阶段是否可以通过抗增殖对肾脏起保护作用。方法糖尿病大鼠分为卡托普利干预组和非干预组（对照组）。干预组予卡托普利口服15周。干预结束后将大鼠处死,从肾脏皮质抽提mRNA,干预组与对照组逆转录分别用Cy5和Cy3标记,成为两组cDNA探针。cDNA探针与基因芯片杂交,扫描仪扫描,用软件分析Cy5和Cy3两种荧光信号的强度和比值。结果6个。肾脏增殖相关基因在两组问有差异表达。结论卡托普利在非糖尿病。肾病阶段可以抑制增殖,对肾脏起保护作用。     

福建省三明社区糖尿病及糖调节受损患病率现况调查

目的了解东南沿海省份城市三明社区成人糖尿病（DM）以及糖调节受损（IGR）的患病率。方法采用分层随机整群抽样方法,在200710～2007—11期间,横断面调查三明市社区16岁以上居民551名。所有调查对象均接受问卷调查、体格测量以及口服葡萄糖耐量试验（OGTT）。结果三明市社区16岁以上居民糖尿病、糖调节受损患病率分别为10．5％和13．6％[单纯空腹血糖受损（I-IFG）1．5％,糖耐量减低（IGT）12．1％,以2000年中国总人口标化后患病率7．4％、11．3％（I-IFG：0．8％,IGT：10．5％）。55．17％为新诊断糖尿病患者,IGR/DM患病率达1．53。高血压、肥胖和超重人群患病率标化后分别为27．8％、8．7％和29．5％。结论三明市社区的糖尿病患病情况不容乐观,仍然有一大部分未及时诊断的糖尿病人群,随着地区的城市化加剧和人口的老龄化程度加剧,DM患病率将有更大幅度的升高。     

脂联素原核表达载体PQE30/ADPN的构建及其表达与纯化

目的构建大鼠全长脂联素(fAd)和球状域脂联素(gAd)重组表达载体PQE30/ADPN,并在大肠杆菌宿主系统中表达出脂联素蛋白,对表达产物进行纯化和鉴定。方法将纯化的脂联素克隆产物与原核表达载体PQE30通过双酶切方法位点特异地连接在一起,再转化入大肠杆菌M15感受态细胞中,并用IPTG诱导表达,并通过亲和层析、去盐、去除内毒素等纯化蛋白。结果PCR获得长度分别为684bp(fAd)和402bp(gAd)的目的片段,经PQE30原核表达载体连接、筛选及序列分析后,证实所插入目的片段与GenBank中脂联素序列(序列号:NM_144744)完全一致;含重组脂联素质粒的大肠杆菌在30℃经0.5mmol.L-1IPTG诱导6h时,可溶性蛋白表达量最高。结论成功克隆大鼠脂联素基因,并在大肠杆菌中获得有效表达。     

eNOS基因多态性与原发性高血压及其脑梗塞易感性的关系

[目的]探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因27 bp数目可变的串联重复序列(VNTR)多态性与原发性高血压(EH)及其脑梗塞易感性的关系.[方法]①采用PCR-琼脂糖凝胶电泳法检测227例EH患者(其中123例无脑梗塞EH(-),104例并发脑梗塞EH( )和145例对照者27 bp VNTR基因型;②硝酸还原酶法测定对照组空腹血清-氧化氮代谢物(NOx)水平.[结果]①EH组aa ab基因型及a等位基因频率高于对照组(基因型0.220/0.083;等位基因0.121/0.041,P值均＜0.01);EH( )组与EH(-)组间基因频率分布类似.以65岁进行年龄分层,EH＜65组aa ab基因型及a等位基因频率高于对照组＜65组(基因型0.256/0.073;等位基因0.140/0.036,P值均＜0.01);EH( )＜65组aa ab基因型及a等位基因频率高于EH(-)＜65组(基因型0.347/0.194;等位基因0.194/0.104,P值均＜0.05).②多因素分析表明,27 bp VNTR多态性是EH发生的独立危险因素,也是65岁以下EH患者发生脑梗塞的独立危险因素.③对照组aa ab基因型空腹血清NOx低于bb基因型(P＜0.05).[结论]①eNOS基因27 bp VNTR多态性可能与原发性高血压及其早发脑梗塞有关;②a等位基因可能通过减少内皮基础NO释放参与上述病变的发生.     

应用基因芯片技术评估卡托普利干预后糖尿病性心肌病大鼠基因谱的变化

目的：比较对照组和干预治疗组大鼠心肌组织中基因表达的差异，探讨卡托普利保护心肌组织的作用。方法：①实验于2002—08／2003—12在福建省立医院内分泌科完成。选用雄性SD大鼠12只。在空腹12h后按60mg／kg腹腔注入链脲佐菌素，每天注射1次，连续注射10周。5周后血糖浓度持续〉16．6mmol／L，表明已建立糖尿病模型。②10周后取大鼠部分心肌组织做电镜检查，发现线粒体变性，肌纤维收缩带形成，表明已建立糖尿病性心肌病动物模型。⑧将12只糖尿病性心肌病大鼠随机分为2组：对照组和干预组，每组6只。干预组给予按1．5mg／（kg&;#183;d）给予卡托普利口服治疗15周；对照组正常饲养。两组均干预15周，然后将大鼠处死，取心肌组织作基因芯片检查。④经反转录分别用Cy3-dUTP和Cy5-dUTP标记对照组和干预组mRNA，获得两组动物来源的cDNA探针。cDNA探针与基因表达谱芯片杂交，结果由扫描仪扫描并用ImaGene3．0软件进行分析统计。以比率（Cy5／Cy3）〉2为表达上调基因，以Cy5／Cy3〈1为表达下调基因。结果：大鼠12只均进入结果分析。①线粒体电子质子偶联和氧化磷酸化相关基因（反映心肌的能量供应）——质子泵基因、细胞色素P450，细胞色素C氧化酶亚单位Va、辅酶Qlb亚单位、泛素特异蛋白酶2Cy5与Cy3比率分别为2．684，2．387，3．124，3.213，3．234；肌动蛋白（在心肌收缩过程中起重要作用）基因Cy5与Cy3比率为2．277，线粒体电子质子偶联和氧化磷酸化相关基因、肌动蛋白基因在干预组中表达明显上调。②二甲基精氨酸水解酶（可产生一氧化氮，导致线粒体内氧自由基、过氧亚硝酸阴离了生成增加，导致呼吸链损伤）基因Cy5与Cy3比率为0．271，整合素b1（与心肌间质纤维化有关）基因Cy5与Cy3比率为0．286。二甲基精氨酸水解酶基因．整合素b1基因在干预组中表达明显下调。结论：①卡托普利通过增强线粒体电子质子偶联和氧化磷酸化相关基因的表达，促进ATP的产生，保证了病变心肌的能量供应。②卡托普利町通过上调肌动蛋白基因表达，增强病变心肌的收缩力。⑧卡托普利可下调二甲基精氨酸水解酶基因表达，减少一氧化氮的产生，防止呼吸链的损伤。④卡托普利通过抑制整合素b1的表达，抑制心肌间质纤维化。     

左右臂踝脉搏波传播速度绝对差值诊断外周动脉疾病的价值

目的探讨并发外周动脉疾病（PAD）的糖尿病患者下肢动脉臂踝脉搏波传播速度（baPWV）的改变情况。方法102例健康对照组和101例2型糖尿病患者（包括PAD患者）。用动脉硬化诊断仪测量baPWV和踝肱比值（ABI）。结果无并发PAD的糖尿病患者baPWV高于健康对照组（中位数1640与1110cm/s,P〈0.05）。并发PAD的糖尿病患者,患肢baPWV低于非患肢baPWV（中位数1300与1650cm/s,P〈0.05）。对于同年龄组患者（50-70岁）,并发PAD的糖尿病患者患肢baPWV（中位数1300与1640cm/s,P〈0.05）和ABI（中位数0.8与1.1,P〈0.05）均比无并发PAD的糖尿病患者低。并发PAD的糖尿病患者左右baPWV绝对差值均较无并发PAD者大（均P〈0.05）。并发PAD的糖尿病患者左右baPWV绝对差值与患肢ABI呈负相关（rs=-0.586,P〈0.05）。结论糖尿病患者baPWV增加,而并发PAD后患肢baPWV降低,左右baPWV绝对差值可能用于PAD的诊断。     

用RNA干扰腺病毒载体研究Wnt/β-连环蛋白信号途径对人甲状腺细胞增殖的影响

目的 以糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)特异的RNA干扰(RNAi)腺病毒表达载体作为研究工具,从转录后水平抑制GSK-3β基因表达,探讨Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路对人甲状腺细胞增殖的影响.方法 利用体外同源重组技术构建短发夹RNA(shRNA)腺病毒表达载体,在HEK293A细胞中包装并扩增病毒、空斑实验法测定病毒滴度;RNAi腺病毒感染原代培养人甲状腺细胞,Western印迹法检测其对GSK-3β蛋白表达的抑制效应;利用构建的RNAi腺病毒抑制GSK-3β表达,BrdU法检测原代培养人甲状腺细胞增殖活性.结果 成功构建了GSK-3β特异的RNAi腺病毒表达载体,获得高滴度的腺病毒液;RNAi腺病毒感染原代培养人甲状腺细胞后,GSK-3β蛋白的表达受到明显抑制,β-catenin蛋白表达显著增加(1.324±0.057 vs 0.935±0.029,P<0.05);腺病毒感染原代培养人甲状腺细胞1、3、5、7 d后,RNAi腺病毒组比空病毒组细胞增殖率明显增加(1.473±0.035 vs 1.312±0.043、1.226±0.045 vs 0.959±0.066、0.776±0.041 vs 0.605±0.054、0.337±0.018 vs 0.259±0.021,P<0.05).结论 构建的目的RNAi腺病毒表达载体能有效抑制GSK-3β基因的表达;Wnt/β-catenin信号通路在人甲状腺细胞的增殖中有重要影响.     

链脲佐菌素和高脂肪饲料诱导的实验性2型糖尿病大鼠模型

目的 制备一种发病过程类似人类2型糖尿病的动物模型。方法 雌性Wistar大鼠喂以高脂饲料9周后，继以小剂量链服佐菌素(STZ，25mg／kg，腹腔注射)诱发胰岛素代偿分泌障碍，使之产生高血糖症。结果 高脂饮食后一个月，大鼠出现胰岛素抵抗、高血糖、肥胖。结论 本研究通过饮食方法成功复制出2型糖尿病模型。