胰岛素样生长因子受体在胎儿和成人皮肤中的表达特征及其意义

为探讨胰岛素样生长因子－I受体（IGF－IR）两亚基（α，β）和磷酸化酪氨酸蛋白（P－Tyr）在胎儿和成人皮肤中的表达特征，用免疫组化方法确定这3种蛋白在12例不同胎龄的胎儿和8例成人皮肤中的定位和表达量的变化规律。结果显示，在早期妊娠胎儿的皮肤组织中，这3种蛋白的阳性细胞率很低，随着胎儿生长发育，IGF－IRα，，IGF－IRβ和P－Tyr蛋白表达逐渐增强。在成人皮肤中，IGF－IRα，β主要分布于表皮细胞的细胞膜上，而P-Tyr主要定位于表皮2细胞和部分成纤维细胞中。这3种蛋白在不同发育阶段人皮肤组织内都有表达，显示它们可能对皮肤的发生，结构功能的维持以及伤后修复具有重要作用。     

增生性瘢痕中细胞外信号调节激酶及其激酶基因表达的变化

目的：探讨细胞外信号调节激酶1/2（extracellular-signal regulated protein kinase，ERK1/2）及其上游信号分子MEK1/2在增生性瘢痕和正常皮肤中基因表达的变化。方法：提取8例增生性瘢痕和8例正常皮肤组织的总RNA后，分离mRNA，用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测这4种基因在不同组织中的表达变化规律。结果：在正常皮肤组织中，MEK1、MEK2、ERK1和ERK2基因表达较弱；而在增生性瘢痕中，这4种基因表达明显增强，其mRNA量的灰度比分别为正常皮肤的1.1倍、1.2倍、2.2倍和2.5倍。结论：增生性瘢痕的发生可能与MEK1/2和ERK1/2基因表达升高有关。     

细胞外信号调节激酶1/2传导通路在不同发育阶段皮肤组织内的变化

为研究磷酸化细胞外信号调节激酶1/2（p-ERK1/2）、Ras和C-fos在不同发育阶段皮肤中的表达特征及其可能的生物学意义,用免疫组化技术检测这3种蛋白在8例胎儿皮肤和8例成人皮肤中的表达变化规律。结果发现,在胎儿发育初期,p-ERK1/2、Ras和C-fos蛋白表达较低,随着胎儿生长发育,这3种蛋白的阳性细胞率逐渐增大,在妊娠后期胎儿和成人皮肤组织中,3种蛋白的阳性细胞率明显高于妊娠早期胎儿皮肤（P<0.01）。p-ERK1/2、Ras和C-fos蛋白在不同发育阶段皮肤组织内都有表达,显示它们可能对皮肤的发生、结构和功能的维持以及损伤后修复十分重要。     

正常皮肤和瘢痕组织表皮干细胞定位与增殖分化特征的比较性研究

目的采用特殊染色法研究少儿与成年人大面积重度烧伤后瘢痕组织表皮干细胞分布与表达β1整合素和角蛋白19、14、10(K19,K14,K10)的特征与规律,在此基础上确定表皮干细胞及短暂扩充细胞分布、数量的差异以及这些改变与瘢痕愈合关系.方法分别取4～12岁少儿及35～53岁成年人2组健康皮肤及大面积深度烧伤后瘢痕组织.采用免疫组织化学SP法检测表皮干细胞、短暂扩充细胞特异表达的β1整合素和K19以及分化表皮细胞表达的K14和K10.结果瘢痕组织表皮基底层表达β1整合素与K19的阳性细胞数较健康皮肤明显减少,阳性强度降低.瘢痕组织表皮中表达K14的阳性细胞仅位于表皮底部2～3层,明显少于健康皮肤,而K10表达阳性细胞则较健康皮肤分布广泛.结论瘢痕组织表皮基底层具有增殖能力的表皮干细胞和短暂扩充细胞明显少于健康皮肤,且瘢痕组织表皮干细胞的分化过程与健康皮肤不同,处于有丝分裂后分化阶段的细胞比例降低,而终末分化细胞的比例明显增高.提示瘢痕组织表皮的增殖能力下降,细胞的分化行为紊乱,这可能是瘢痕组织表皮结构与功能改变、愈合能力下降的原因之一.     

人红细胞单链抗体基因的克隆及其序列分析

目的：获得抗人红细胞的单链抗体基因。方法：以分泌抗人红细胞单抗（ＨＲＣ）的杂交瘤细胞总ＲＮＡ为模板，分别扩增出轻链可变区（ＶＬ）和重链可变区（ＶＨ）基因，用连接肽将其连接成具ＶＬ－ｌｉｎｋｅｒ－ＶＨ结构的单链抗体基因。结果：ＤＮＡ序列分析证实，获得的单链抗体基因的轻，重链分别属于鼠Ｉｇｋａｐｐａ轻链第Ⅲ亚组和Ｉｇ重链第Ⅱｃ亚组，结论：构建了抗人红细胞单链抗体的载体，提供了与其它基因连接，为建立病人     

不同发育阶段人皮肤表皮干细胞增殖分化特征及其与创面修复结局关系的研究

目的从细胞分化角度研究人胎儿期、少儿期、成年人期皮肤中表皮干细胞增殖分化特征,以及这些特征与创面修复结局的关系.方法分别取因创伤等原因致流产的22～24周龄胎儿和4～12周岁少儿、35～53岁成年人3组全层皮肤.采用免疫组化方法检测表皮干细胞特异表达的β1整合素和细胞角蛋白19(K19).结果胎儿期皮肤表皮基底层细胞β1整合素和K19染色均为强阳性.少儿期表皮基底层细胞中60%～80%的细胞表达β1整合素和K19.成年人表皮基底层中表达β1整合素和K19的细胞较少儿组进一步减少,且染色强度较弱.结论本实验结果提示,胎儿期表皮基底层增殖细胞均为表皮干细胞和短暂扩充细胞,而少儿期表皮基底层中部分细胞为于细胞和短暂扩充细胞,成年人期干细胞与短暂扩充细胞所占的比例则进一步降低.这种干细胞增殖分化的差异可能与三种不同发育阶段皮肤损伤的完全与不完全修复有关.     

人源高致病性H5N1不同蚀斑特性病毒致病力研究

目的分析不同空斑特性病毒致病力的差异,为禽流感病毒跨种属传播机制研究提供新的思路与依据。方法利用病毒蚀斑技术,从A/Beijing/01/03(H5N1)(BJ01)病毒中分离纯化不同蚀斑特性的病毒——较大和较小蚀斑病毒。采用纯化的大、小斑病毒滴鼻感染小鼠,观察并记录感染后14d小鼠体重和死亡数变化,分析大、小斑病毒致病力的差异。结果 BJ01株原始病毒呈现大小不一的混合斑状态,从BJ01株分离纯化了大斑病毒L1、L2和小斑病毒S1、S2、S3,其中小斑病毒S1和S2的致病力较强,大斑病毒L1和小斑病毒S3的致病力较弱,大斑病毒L2病毒致病力最弱。同种空斑特性的病毒致病力差异显著,不同空斑特性病毒在致病力上也存在显著差异。结论 H5N1病毒的空斑大小与病毒致病力没有线性相关性,但可以根据空斑大小,利用蚀斑技术分离纯化出致病力差异明显的病毒。     

c-fos和c-myc 原癌基因与bFGF在烧伤后早期创面组织中的表达规律

目的：探讨烧伤后创面组织原癌基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ ｍｙｃ 和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ） 的表达顺序及分布规律。方法：采用深Ⅱ度烫伤模型,将４２ 只大鼠分为７ 组,即正常对照组、烫伤后３ ｈ、６ ｈ、１ ｄ、３ ｄ、７ ｄ 和１４ ｄ 组。用ＳＰ免疫组化方法研究烫伤后不同时间点内源性ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ ｍｙｃ 和ｂＦＧＦ蛋白的表达规律及分布特征。结果：烧伤可以诱导ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ ｍｙｃ 和ｂＦＧＦ表达,但三者的表达模式不尽相同,正常皮肤即有ｃ－ｆｏｓ 表达,伤后３ ｈ 达峰值,以后逐渐下降,１ 天以后降至最低水平,其阳性颗粒主要分布于表皮基底细胞胞浆及真皮成纤维细胞的胞核内。ｃ－ ｍｙｃ 的表达在伤后３ 天达最高值,阳性信号分布于真皮层成纤维细胞的胞浆中;而ｂＦＧＦ则在伤后６ ｈ 开始出现,伤后第１ 天达最高值,主要分布于真皮层的成纤维细胞的胞浆中。结论：烧伤可以诱导皮肤创面组织原癌基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ ｍｙｃ 及ｂＦＧＦ的表达,其表达具有时相与部位分布特征。三者表达的时相性提示在烧伤后早期原癌基因与生长因子基因之间具有相互调控作用,而这种调控作用对后期组织修复将产生一定的影响。     

五种出血热病毒重组酶聚合酶等温扩增方法的建立

目的 建立五种出血热相关病毒,即扎伊尔型埃博拉病毒、苏丹型埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙病毒和黄热病毒的一步法重组酶聚合酶等温扩增(RPA)技术,为病原体的确定提供现场快速检测方法.方法 通过基因组序列分析,选择每种病毒的特异核酸片段作为检测靶基因,针对靶基因序列设计RPA检测的引物和探针;取系列稀释的模板基因进行RPA检测,确定其灵敏性;取出血热相关病毒核酸为模板进行RPA检测,确定其特异性;验证不同温度反应条件(37~42℃)对检测结果的影响.结果 五种出血热病毒的RPA反应体系均可有效扩增靶基因,灵敏性为1.5×102~1.5×103copies/反应,与其他出血热相关病毒的核酸无交叉反应;RPA实验在37~42℃均可实现靶基因的有效扩增.结论 建立了五种出血热病毒的RPA等温扩增体系,该体系反应快速,温度范围宽,适用于现场快速检测.     

抑制原癌基因c-fos表达对创伤修复结局的影响

目的:探讨原癌基因c-fos在伤后皮肤创面愈合过程中的调控作用及其对修复结局的影响.方法:利用大鼠深Ⅱ°烫伤模型,采用免疫组化和原位杂交方法分别检测PCNA蛋白及bFGF mRNA在创面组织中的表达,并观察外源性使用c-fos单克隆抗体及bFGF后二者表达的变化规律及修复结局的改变.结果:烧伤诱导c-fos及bFGF mRNA的表达,从而启动修复过程.外源性应用c-fos抗体后,伤后各时间点基本探测不到bFGFmRNA的表达,伤后14d创面皮肤虽然基本完成了再上皮化过程,但其基底细胞排列成薄层细胞,PCNA数密度明显低于对照组,同时皮肤全层变薄.而创面外源性应用bFGF后,bFGF mRNA表达有一定增加,但无明显差异.但伤后14d创面皮肤组织基底层变厚,其中含有大量PCNA阳性细胞,真皮层亦变厚,并含有大量的毛细血管.结论:c-fos在创面愈合过程中具有重要作用,它可以启动bFGF基因转录,增加细胞的增殖活性.用c-fos抗体中和内源性c-fos作用可以明显抑制生长相关基因的表达,最后导致创面修复细胞PCNA表达下降.